制备了伤寒Vi多糖疫苗课件

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1、 细菌性疫苗细菌性疫苗(ymio)(ymio) 杨丽华杨丽华 2011 2011年年3 3月月第一页，共九十五页。1. 1. 死疫苗死疫苗(ymio)(ymio)2. 2. 活疫苗活疫苗 3. 3. 蛋白蛋白(dnbi)(dnbi)类疫苗类疫苗4. 4. 多糖类疫苗多糖类疫苗(ymio)(ymio) 5. 5. 多糖蛋白结合疫苗多糖蛋白结合疫苗 细菌性疫苗细菌性疫苗第二页，共九十五页。细菌性疫苗细菌性疫苗(ymio)(ymio)种类种类23白喉白喉破伤风破伤风百日咳百日咳疫苗疫苗451霍乱霍乱伤寒伤寒副伤寒副伤寒百日咳百日咳疫苗疫苗卡介苗卡介苗鼠疫鼠疫布氏杆菌布氏杆菌伤寒伤寒痢疾痢疾霍乱霍乱疫

2、苗疫苗脑膜炎脑膜炎伤寒伤寒vivi 肺炎肺炎流感嗜流感嗜血杆菌血杆菌多糖疫多糖疫苗苗ACAC脑膜炎脑膜炎球菌多糖球菌多糖结合疫苗结合疫苗HIBHIB脑膜炎脑膜炎伤寒伤寒vivi流感嗜流感嗜血杆菌血杆菌多糖疫多糖疫苗苗第三页，共九十五页。百日咳疫苗百日咳疫苗 伤寒疫苗伤寒疫苗结合疫苗结合疫苗 白喉疫苗白喉疫苗第四页，共九十五页。白喉白喉(bihu)(bihu)疫苗疫苗一、白喉概述一、白喉概述二、病原学二、病原学三、白喉杆菌三、白喉杆菌(gnjn)(gnjn)的致病力及毒素产生的遗传的致病力及毒素产生的遗传学学四、白喉毒素四、白喉毒素五、白喉类毒素五、白喉类毒素六、生产工艺六、生产工艺七、类毒素的

3、质量检定七、类毒素的质量检定第五页，共九十五页。外毒素外毒素对神经对神经(shnjng)系统损系统损害害细菌产生细菌产生(chnshng)的外毒素的外毒素对心肌损对心肌损害害外毒素外毒素对肾脏对肾脏(shnzng)损害损害白喉曾经是对儿童威胁非常大的传染病。白喉曾经是对儿童威胁非常大的传染病。它是由白喉棒状杆菌引起的一种呼吸道传染病它是由白喉棒状杆菌引起的一种呼吸道传染病主要临床表现为上呼吸道发炎主要临床表现为上呼吸道发炎，常常表现在咽部，有时在鼻腔、喉部和气管，常常表现在咽部，有时在鼻腔、喉部和气管，白喉疫苗白喉疫苗第六页，共九十五页。白喉流行白喉流行(lixng)(lixng)特点特点1.

4、1.传染原：白喉杆菌是严格寄生于人类传染原：白喉杆菌是严格寄生于人类(rnli)(rnli)的细的细菌菌 没有中间宿主，病人及带菌者是唯没有中间宿主，病人及带菌者是唯 一的传染原。一的传染原。2.2.传播途径：主要是呼吸道飞沫传播，也可通传播途径：主要是呼吸道飞沫传播，也可通 过被污的器具和食物传播。过被污的器具和食物传播。3.3.易感人群：人对白喉普遍易感，新生儿易感人群：人对白喉普遍易感，新生儿1 1岁时岁时白喉易感性达高峰。白喉易感性达高峰。第七页，共九十五页。二、病原学二、病原学1.1.细菌形态细菌形态 白喉棒状杆菌菌体一端或两端膨大呈白喉棒状杆菌菌体一端或两端膨大呈 棒状，有着色棒状

5、，有着色(zhu s)(zhu s)较深的异染颗粒，革兰较深的异染颗粒，革兰 氏染色阳性，白喉杆菌无动力，无荚氏染色阳性，白喉杆菌无动力，无荚 膜，不形成芽孢。膜，不形成芽孢。第八页，共九十五页。白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌(gnjn)(gnjn)显微镜下形态显微镜下形态第九页，共九十五页。白喉白喉(bihu)(bihu)棒状杆菌显微镜下形态棒状杆菌显微镜下形态第十页，共九十五页。 2. 2.培养特性培养特性 白喉杆菌是需氧菌，最适温度为白喉杆菌是需氧菌，最适温度为34343535。能分解。能分解 葡萄糖、麦芽糖和糊精，产酸不产气，能还原硝酸葡萄糖、麦芽糖和糊精，产酸不产气，能还原硝酸 盐，不产生

6、吲哚，不消化蛋白。盐，不产生吲哚，不消化蛋白。 3. 3.抵抗力抵抗力 . .白喉杆菌对抗生素有不同程度白喉杆菌对抗生素有不同程度(chngd)(chngd)敏感，对青霉素和敏感，对青霉素和 红霉素极敏感。红霉素极敏感。 . .对消毒剂抵抗力弱，对消毒剂抵抗力弱，3 3苯酚苯酚10min10min可将该菌杀死可将该菌杀死 . .不耐热，不耐热，58 10mi58 10mi或或100 1min100 1min即可被杀死。即可被杀死。二、病原学二、病原学第十一页，共九十五页。三、白喉杆菌三、白喉杆菌(gnjn)(gnjn)的致病力及毒素产生遗传学的致病力及毒素产生遗传学1. 1. 致病力致病力 自

7、然界中动物不感染白喉，只能在敏感动物中造成自然界中动物不感染白喉，只能在敏感动物中造成 人工感染。猴、马、家兔和豚鼠对白喉敏感实验人工感染。猴、马、家兔和豚鼠对白喉敏感实验 室常用的动物是家室常用的动物是家兔、豚鼠和兔、豚鼠和NIHNIH小鼠小鼠。2.2.毒素产生遗传学毒素产生遗传学 白喉是由白喉杆菌白喉是由白喉杆菌(gnjn)(gnjn)产生毒性很强的外毒素引起产生毒性很强的外毒素引起的。的。 白喉杆菌的产毒基因是由白喉杆菌的产毒基因是由嗜菌体携带。嗜菌体携带。 嗜菌嗜菌 体感染无毒白喉杆菌后嗜菌体体感染无毒白喉杆菌后嗜菌体DNADNA与细菌与细菌DNADNA整合，整合， 形成溶原性白喉杆菌

8、而获得产毒能力（形成溶原性白喉杆菌而获得产毒能力（PW8PW8株目前株目前 用于白喉类毒素生产用于白喉类毒素生产) )。第十二页，共九十五页。四、白喉毒素四、白喉毒素1.1.白喉外毒素为棒状杆菌白喉外毒素为棒状杆菌-噬菌体噬菌体toxtox基因表达基因表达 产物产物, ,可与细胞表面的特异性受体结合可与细胞表面的特异性受体结合, ,干扰蛋干扰蛋 白质白质(bizh)(bizh)的合成，对人和动物都引起致死性毒性，的合成，对人和动物都引起致死性毒性， 如心脏、肾上腺、肝、肾、胰及神经组织等均如心脏、肾上腺、肝、肾、胰及神经组织等均 受到损害。受到损害。2.2.白喉毒素是单一多肽，由白喉毒素是单一

9、多肽，由560560个氨基酸组成，个氨基酸组成， 分子量为分子量为62kDa62kDa, ,等电点等电点pH4.1pH4.1，在，在pH6pH6时加热时加热5555 很快失活。很快失活。3.3.通过物理和化学方法将其纯化。通过物理和化学方法将其纯化。第十三页，共九十五页。细细菌菌毒毒素素甲醛甲醛类毒素类毒素毒素经毒素经甲醛甲醛(ji qun)(ji qun)处理后去除毒性处理后去除毒性 而保留免疫原性而保留免疫原性五、白喉五、白喉(bihu)(bihu)类毒素类毒素第十四页，共九十五页。甲醛甲醛(ji qun)浓度浓度温度温度PH脱毒脱毒影响影响(yngxing)(yngxing)脱毒因素脱毒

10、因素第十五页，共九十五页。温度、温度、pHpH和甲醛浓度和甲醛浓度(nngd)(nngd)等均影响脱毒效等均影响脱毒效果果. .温度越高脱毒越快，超过温度越高脱毒越快，超过4040影响抗原性，影响抗原性， 一般一般373738 38 。. .在酸性时脱毒较慢，但游离甲醛含量在酸性时脱毒较慢，但游离甲醛含量(hnling)(hnling)高，在高，在 保存过程中由于甲醛的继续作用，可导致脱保存过程中由于甲醛的继续作用，可导致脱 毒过甚，并影响毒素的稳定性；在碱性时脱毒过甚，并影响毒素的稳定性；在碱性时脱 毒快，但抗原性损失较大，一般采用毒快，但抗原性损失较大，一般采用弱碱性。弱碱性。. .甲醛浓

11、度大则脱毒快，但抗原损失大。甲醛浓度大则脱毒快，但抗原损失大。第十六页，共九十五页。温度升高温度升高游离甲醛游离甲醛(ji qun)的浓度的浓度低低毒素纯度高毒素纯度高易发生毒性易发生毒性逆转逆转提高甲醛浓度、脱毒提高甲醛浓度、脱毒pHpH、脱毒温度和延长脱毒时间脱毒温度和延长脱毒时间(shjin)(shjin)；增加非蛋白氮含量（于精制增加非蛋白氮含量（于精制毒素中加入赖氨酸、精氨酸等）毒素中加入赖氨酸、精氨酸等）防止或减轻防止或减轻毒性逆转毒性逆转类毒素的毒性类毒素的毒性(d xn)(d xn)逆转逆转第十七页，共九十五页。 六、白喉疫苗工艺流程六、白喉疫苗工艺流程 菌种（菌种（ PW8P

12、W8株株 ） 传代扩增传代扩增 3 34 4代代 发酵罐培养发酵罐培养 34343535培养对数生长培养对数生长 末期末期(mq)(mq)收获，甲苯杀菌。收获，甲苯杀菌。 离心去菌体离心去菌体 收集清液收集清液 超滤浓缩超滤浓缩 硫酸铵两段盐析硫酸铵两段盐析 除盐除菌除盐除菌 氨离子及无菌检查氨离子及无菌检查 脱毒脱毒 甲醛液甲醛液 37 37 脱毒试验（家兔）脱毒试验（家兔） 原液原液 检定（浓度、纯度、安全等）检定（浓度、纯度、安全等） Al(OH)Al(OH)3 3吸附吸附 成品成品 检定（安全、效价等）检定（安全、效价等）第十八页，共九十五页。七、类毒素的质量七、类毒素的质量(zhli

13、ng)(zhling)检定检定1 絮状单位（絮状单位（Lf） 是毒素或类毒素与抗毒素的结合单位，只能代表是毒素或类毒素与抗毒素的结合单位，只能代表“量量” 而不能完全代而不能完全代表活性。使用抗毒素絮状单位标准品来测定类毒素的絮状单位。表活性。使用抗毒素絮状单位标准品来测定类毒素的絮状单位。 絮状单位测定絮状单位测定 毒素或类毒素与相应抗毒素在适当的含量、比例毒素或类毒素与相应抗毒素在适当的含量、比例(bl)、温度反应时、温度反应时间等条件下可在试管中发生抗原抗体结合，产生肉眼可见的絮状凝间等条件下可在试管中发生抗原抗体结合，产生肉眼可见的絮状凝集反应，集反应， 根据抗毒素絮状单位标准品可测定

14、类毒素的絮状单位（根据抗毒素絮状单位标准品可测定类毒素的絮状单位（Lf）值。）值。2 纯度：纯度：1500Lf/mgPN3 安全性试验（豚鼠）安全性试验（豚鼠）第十九页，共九十五页。七、类毒素的质量七、类毒素的质量(zhling)(zhling)检定检定4 4效价测定效价测定 类毒素刺激机体产生特异性抗体的免疫应答和对相应抗类毒素刺激机体产生特异性抗体的免疫应答和对相应抗 体的特异性结合反应。体的特异性结合反应。小鼠小鼠VeroVero细胞法细胞法 将标准和待检类毒素将标准和待检类毒素2 2倍稀释倍稀释3 35 5个稀释度，皮下免疫个稀释度，皮下免疫N N IH IH小鼠小鼠8 8只（只（0.

15、5ml/0.5ml/只只) )，免疫，免疫5 5周采血，根据周采血，根据verovero细胞细胞 生长生长(shngzhng)(shngzhng)情况，以标准品的效价为标准，用平行线分析情况，以标准品的效价为标准，用平行线分析法进法进 行结果计算。行结果计算。豚鼠毒素攻击法豚鼠毒素攻击法 皮下免疫豚鼠皮下免疫豚鼠1010只（只（1ml/1ml/只），免疫只），免疫4 4周后用毒素攻击，周后用毒素攻击， 观察观察5 5天根据存活率以标准品的效价为标准，用平行线分天根据存活率以标准品的效价为标准，用平行线分 析法进行结果计算。析法进行结果计算。第二十页，共九十五页。百日咳疫苗百日咳疫苗(ymio)

16、(ymio)一、百日咳概述一、百日咳概述二、病原学二、病原学三、百日咳疫苗发展简史三、百日咳疫苗发展简史四、无细胞百日咳疫苗四、无细胞百日咳疫苗、生产工艺流程、生产工艺流程(n y li chn)(n y li chn)、质量检定、质量检定、APVAPV的效果的效果、接种不良反应、接种不良反应第二十一页，共九十五页。急性脑炎、急性脑炎、呕吐、痉挛呕吐、痉挛(jn lun)和昏和昏迷，死亡或迷，死亡或脑损伤脑损伤并发症肺炎并发症肺炎(fiyn)形成肺气肿形成肺气肿肺不张，甚肺不张，甚至死亡。至死亡。营养营养(yngyng)缺缺乏症乏症百日咳是对儿童威胁非常大的传染病，百日咳是对儿童威胁非常大的传

17、染病，它是由百日咳杆菌引起的一种呼吸道传染病。它是由百日咳杆菌引起的一种呼吸道传染病。典型症状为突然阵发性痉咳，并带有吸气性尾典型症状为突然阵发性痉咳，并带有吸气性尾声或伴有呕吐，可持续数月。声或伴有呕吐，可持续数月。百日咳概述百日咳概述第二十二页，共九十五页。百日咳流行百日咳流行(lixng)(lixng)特特点点1.1.传染原：人是百日咳唯一的天然宿主百日咳传染原：人是百日咳唯一的天然宿主百日咳 病人是传染原。病人是传染原。2.2.传播途径：主要是呼吸道飞沫传播，也可通传播途径：主要是呼吸道飞沫传播，也可通 过被污的器具和食物传播。过被污的器具和食物传播。3.3.易感人群易感人群(rnqn

18、)(rnqn)：主要传染对象是：主要传染对象是6 6岁以下儿童，岁以下儿童，1 1 岁以内婴幼儿发病率岁以内婴幼儿发病率50%50%。第二十三页，共九十五页。二、病原学二、病原学细菌形态细菌形态 百日咳菌呈革兰氏染色百日咳菌呈革兰氏染色(rns)阴性，短杆状或椭圆形阴性，短杆状或椭圆形第二十四页，共九十五页。生长生长(shngzhng)(shngzhng)特性特性1.1.百日咳菌可分四种相变，百日咳菌可分四种相变，相菌毒力最强有免相菌毒力最强有免 疫原性疫原性；相菌毒力消失，无免疫原性；相菌毒力消失，无免疫原性； 相菌介于相菌介于 相之间。相之间。2.2.百日咳菌是需氧菌，最适温度为百日咳菌是

19、需氧菌，最适温度为353536,36,最最 适适。3.3.不发酵任何糖类不发酵任何糖类(tn li)(tn li)、不分解糊精，尿素盐，不、不分解糊精，尿素盐，不液液 化明胶不产生吲哚，不利用枸橼酸盐。化明胶不产生吲哚，不利用枸橼酸盐。第二十五页，共九十五页。 作用作用 PT PT FHA FHAAggsAggsPRNPRN AC ACTCTTCTHLTHLT 呼吸道粘附作用呼吸道粘附作用 - - - 细胞毒性细胞毒性 免疫原性免疫原性 - - -1 1百日咳百日咳相菌有两大类抗原相菌有两大类抗原 菌体菌体O O抗原抗原 表面表面K K抗原（荚膜物质抗原（荚膜物质(wzh)(wzh)）2 2百

20、日咳菌可产生百日咳菌可产生 外毒素外毒素(PT)(PT) 内毒素内毒素 其他生物活性物质，据报道有其他生物活性物质，据报道有2525种之多。种之多。、主要、主要(zhyo)(zhyo)抗原和生物学活性抗原和生物学活性第二十六页，共九十五页。 百日咳菌粘附在上呼吸道上皮细胞纤毛百日咳菌粘附在上呼吸道上皮细胞纤毛(xinmo)(xinmo)上繁殖上繁殖 重患重患 (FHA PT PRN Agg) (FHA PT PRN Agg) 下呼吸道上皮细胞纤毛上繁殖下呼吸道上皮细胞纤毛上繁殖 细菌不进入组织和血液循环细菌不进入组织和血液循环 干扰吞噬细胞功能干扰吞噬细胞功能 AC AC 分泌大量分泌大量PT

21、PT麻痹上皮细胞功能麻痹上皮细胞功能 TCT TCT 产生血细胞增多产生血细胞增多损伤支气管血管周损伤支气管血管周 HLT HLT 细胞代谢发生变化细胞代谢发生变化 组织胺致敏性增强组织胺致敏性增强 围组织围组织 分泌胰岛素增强和分泌胰岛素增强和 血糖降低血糖降低. . 、致病机理、致病机理(j l)(j l)第二十七页，共九十五页。三、百日咳疫苗三、百日咳疫苗(ymio)(ymio)发展简史发展简史粗制百日咳灭活疫苗粗制百日咳灭活疫苗 第一次世界大战时期，在对病原菌的生物学构造及其第一次世界大战时期，在对病原菌的生物学构造及其 与与 致病机理间的关系缺乏认识的前提下，凭经验制造的灭活致病机理

22、间的关系缺乏认识的前提下，凭经验制造的灭活 疫苗，工艺粗造、含量不确定。疫苗，工艺粗造、含量不确定。全菌体百日咳疫苗全菌体百日咳疫苗(WPV)(WPV) 以标准化方式生产的，制造疫苗的菌株必须含有以标准化方式生产的，制造疫苗的菌株必须含有123123型凝型凝 集原（集原（Agg1Agg1、Agg2Agg2 、Agg3Agg3）。经过）。经过5050多年的临床应用证多年的临床应用证 明该疫苗的免疫效果是肯定的，但接种后的不良反应问题明该疫苗的免疫效果是肯定的，但接种后的不良反应问题 一直未解决。一直未解决。无细胞百日咳疫苗无细胞百日咳疫苗(APV)(APV) 2020世纪世纪8080年代初期，对

23、百日咳菌的成分及其所引起生物学年代初期，对百日咳菌的成分及其所引起生物学 作用的认识，产生了作用的认识，产生了APVAPV。基因工程基因工程(jyn gngchng)(jyn gngchng)疫苗正在研究中。疫苗正在研究中。第二十八页，共九十五页。四、无细胞四、无细胞(xbo)(xbo)百日咳疫苗百日咳疫苗19811981年日本的佐藤教授等人在纯化出年日本的佐藤教授等人在纯化出PTPT和和FHAFHA两种抗原的基础两种抗原的基础(jch)(jch) 上，在世界上第一次研制成功了含有两种抗原成分的无细胞百上，在世界上第一次研制成功了含有两种抗原成分的无细胞百 日咳疫苗，并且与白喉和破伤风类毒素联

24、合制成无细胞百白破日咳疫苗，并且与白喉和破伤风类毒素联合制成无细胞百白破 联合疫苗。该疫苗在日本开始正式使用，目前日本已经全部取联合疫苗。该疫苗在日本开始正式使用，目前日本已经全部取 代了菌体百白破疫苗。代了菌体百白破疫苗。19921992年美国正式批准使用日本生产的无细胞百日咳疫苗。美国年美国正式批准使用日本生产的无细胞百日咳疫苗。美国 获得生产许可证的获得生产许可证的APVAPV还含有还含有Agg2Agg2和和PRNPRN。目前。目前WHOWHO已经将其作已经将其作 为儿童预防免疫推荐用疫苗。为儿童预防免疫推荐用疫苗。我国是于我国是于8080年代中期开始研制无细胞百白破联合疫苗，年代中期开

25、始研制无细胞百白破联合疫苗，9090年代年代 中期获得正式生产文号。中期获得正式生产文号。近期的临床试验证明含有近期的临床试验证明含有5 5种保护性抗原（种保护性抗原（PT FHA PRN Agg2PT FHA PRN Agg2 A A gg3 gg3 ）的）的APVAPV效果最佳。效果最佳。第二十九页，共九十五页。 冻干百日咳菌种（冻干百日咳菌种（相相CS菌株）菌株） 接种血培养基大管培养接种血培养基大管培养 36 48-72小时培养小时培养 传代传代(chun di) 接种发酵罐培养（综合培养基）接种发酵罐培养（综合培养基） 培养培养48小时小时 收集培养物收集培养物 第一段硫酸铵盐析及浸

26、提第一段硫酸铵盐析及浸提 第二段硫酸铵盐析及浸提第二段硫酸铵盐析及浸提 透析透析 密度梯度离心密度梯度离心 戊二醛脱毒戊二醛脱毒 透析透析 超声超声 无细胞百日咳原液无细胞百日咳原液、生产、生产(shngchn)(shngchn)工艺流程工艺流程第三十页，共九十五页。检测项目检测项目标准标准蛋白含量蛋白含量 抗原纯度测定抗原纯度测定PTPT和和FHAFHA不低于总蛋白质不低于总蛋白质含量的含量的85%85%热原测定热原测定符合规定符合规定毒毒性性试试验验 小鼠体重减轻试验小鼠体重减轻试验不高于不高于10BWDU/ml10BWDU/ml小鼠白细胞增多试验小鼠白细胞增多试验不高于不高于0.5PLU

27、/ml0.5PLU/ml小鼠组胺致敏试验小鼠组胺致敏试验不高于不高于0.8HSU/ml0.8HSU/ml毒性逆转试验毒性逆转试验不高于不高于0.8HSU/ml0.8HSU/ml效价测定（脑腔保护力试验）效价测定（脑腔保护力试验） 不低于不低于4.0IU/4.0IU/剂量剂量、质量、质量(zhling)(zhling)检定检定第三十一页，共九十五页。日本和中国的日本和中国的APVAPV和和DTPaDTPa按以上主要检定项目进行质量按以上主要检定项目进行质量 控制。控制。美国、欧洲一些国家及美国、欧洲一些国家及WHOWHO推荐的毒性和效价测定方法推荐的毒性和效价测定方法 等与之不同。等与之不同。毒

28、性试验毒性试验仅要求做仅要求做HSTHST，效价测定效价测定采用采用ELEL ISA ISA法检测疫苗注射小鼠后百日咳抗体应答法检测疫苗注射小鼠后百日咳抗体应答(yngd)(yngd)水平。水平。用小鼠脑腔保护力试验用小鼠脑腔保护力试验（MPTMPT）评价疫苗效果，评价疫苗效果，WPV WPV 的的 效价明显高于效价明显高于APVAPV，而且并非所有的而且并非所有的APVAPV均可通过均可通过MPTMPT试试 验。验。因此还没有令人满意的针对因此还没有令人满意的针对APVAPV疫苗的效价试验方疫苗的效价试验方 法。法。免疫原性试验在衡量制品的一致性方面是有用的，但免疫原性试验在衡量制品的一致性

29、方面是有用的，但 与临床保护之间还缺乏相关性。与临床保护之间还缺乏相关性。 效价测定方法探讨效价测定方法探讨(tnto)(tnto)第三十二页，共九十五页。接种种类接种种类免疫人数免疫人数病例数病例数发病率（发病率（% %）报道时间报道时间WPVWPV56568 814.314.319831983APVAPV36364 411.311.3_ _5858484882.882.8APVAPV30303 310.010.019881988_ _4242373780.080.0APVAPV26261 13.83.819881988 _ _2727171762.962.9APVAPV62622 23.2

30、3.219901990_ _3737303081.081.0表明表明APVAPV的保护效果是肯定的，能够的保护效果是肯定的，能够(nnggu)(nnggu)达到达到WPAWPA的保护水平。的保护水平。、APVAPV的效果的效果(xiogu)(xiogu)第三十三页，共九十五页。疫苗种类疫苗种类发热发热(%)(%)持续性喊持续性喊(%)(%)红晕红晕(%)(%)肿胀肿胀(%)(%)疼痛疼痛(%)(%)APVAPV0.8-2.80.8-2.84.5-9.04.5-9.01.4-5.51.4-5.51.2-5.51.2-5.51.4-4.81.4-4.8WPVWPV6.66.620.520.59.5

31、9.515.415.420.820.8表明表明(biomng)(biomng)APVAPV的不良反应明显低于的不良反应明显低于WPVWPV。、接种、接种(jizhng)不良反应不良反应第三十四页，共九十五页。伤寒伤寒(shnghn)(shnghn)疫苗疫苗一、概述一、概述(i sh)(i sh)二、病原学二、病原学三、伤寒疫发展简史三、伤寒疫发展简史四、伤寒四、伤寒ViVi疫苗疫苗第三十五页，共九十五页。1.伤寒病是一种急性全身性感染，感染网状内伤寒病是一种急性全身性感染，感染网状内皮细胞系统，肠道淋巴组织及胆囊，病原皮细胞系统，肠道淋巴组织及胆囊，病原(bngyun)是伤寒沙门氏菌。是伤寒沙

32、门氏菌。2.传播途径是食入被污染的食物或水源。传播途径是食入被污染的食物或水源。3.学龄儿童发病率最高，两岁以下儿童和学龄儿童发病率最高，两岁以下儿童和35岁以岁以上成人发病率低。上成人发病率低。一、一、 概述概述(i sh)(i sh)第三十六页，共九十五页。1潜伏期为潜伏期为7 72121天天病期为一病期为一个月，恢个月，恢复缓慢。复缓慢。3表情迟钝表情迟钝脉搏相对脉搏相对缓慢，肝缓慢，肝脾肿大和脾肿大和白细胞减白细胞减少。少。2长期发热、长期发热、持续高烧持续高烧达达10101414天、腹部天、腹部不适、头不适、头痛等。痛等。2长期发热、长期发热、持续高烧持续高烧达达10101414天、

33、腹部天、腹部不适、头不适、头痛等。痛等。典型的临床典型的临床(ln chun)(ln chun)症状症状第三十七页，共九十五页。二、病二、病 原原 学学1.1.细菌形态细菌形态(xngti)(xngti) 伤寒沙门氏菌是革兰氏阴性杆菌，伤寒沙门氏菌是革兰氏阴性杆菌， 有鞭毛，能运动。有鞭毛，能运动。第三十八页，共九十五页。伤寒沙门氏菌伤寒沙门氏菌(sh mn sh jn)(sh mn sh jn)革革兰染色兰染色第三十九页，共九十五页。伤寒沙门氏菌伤寒沙门氏菌(sh mn sh jn)(sh mn sh jn)电镜形态电镜形态第四十页，共九十五页。 2. 2.培养特性培养特性 在肉汤琼脂、马丁

34、琼脂或其他适宜培养基上以易在肉汤琼脂、马丁琼脂或其他适宜培养基上以易生长，需氧，适宜温度生长，需氧，适宜温度35-3735-37，适宜的，适宜的pHpH为为7.07.07.27.2。 发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇均产酸不产气；发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇均产酸不产气；不发酵乳糖、蔗糖；氧化酶试验不发酵乳糖、蔗糖；氧化酶试验(shyn)(shyn)阴性。阴性。第四十一页，共九十五页。1.1.鞭毛（鞭毛（H H）抗原：为蛋白质，煮沸破坏，不受抗原：为蛋白质，煮沸破坏，不受 （1 1）甲醛影响。）甲醛影响。2.2.菌体（菌体（O O）抗原：细胞壁部份，耐热，为脂多抗原：细胞壁部份，耐热，为脂多 糖（糖（

35、LPSLPS）由多糖（重复寡）由多糖（重复寡 糖和核心糖和核心(hxn)(hxn)寡糖）和类脂寡糖）和类脂A A组组 成。成。3.3.莢膜（莢膜（ViVi）抗原抗原: :即荚膜多糖（即荚膜多糖（CPSCPS）, ,是伤寒是伤寒 杆菌细胞外壁的一种荚膜抗杆菌细胞外壁的一种荚膜抗 原原, , Vi Vi抗原与其致病性有关抗原与其致病性有关 ViVi来源于毒力的缩写。来源于毒力的缩写。抗原抗原(kngyun)(kngyun)结构结构第四十二页，共九十五页。血清学诊断血清学诊断(zhndun)(zhndun) 1.1.肥达氏试验（肥达氏试验（widal testwidal test） 选择抗原的方法：

36、选择抗原的方法： . .测定测定O O抗体抗体 用伤寒用伤寒09010901株（没有株（没有H H和和ViVi抗原）抗原） 用加热杀菌破坏用加热杀菌破坏H H抗原（不耐热）抗原（不耐热） . .测定测定H H抗体抗体 用伤寒用伤寒S S株（没有株（没有O O菌体抗原）菌体抗原） 用甲醛处理用甲醛处理(chl)(chl)伤寒沙门氏菌破坏伤寒沙门氏菌破坏O O抗原抗原 2.2.酶联免疫试验酶联免疫试验第四十三页，共九十五页。1234全菌全菌体灭体灭活疫活疫苗苗口服口服(kuf)(kuf)Ty21aTy21a减毒减毒活疫活疫苗苗伤寒伤寒(shnghn)(shnghn)ViVi多多糖疫糖疫苗苗伤寒伤寒

37、结合结合(jih)疫苗疫苗二、伤寒疫苗的发展简史二、伤寒疫苗的发展简史第四十四页，共九十五页。1 1甲醛杀菌石碳酸防腐甲醛杀菌石碳酸防腐(fngf)疫苗疫苗2.2.加热杀菌加热杀菌(sh jn)石碳酸防腐疫苗石碳酸防腐疫苗3.3.丙酮杀菌丙酮杀菌(sh jn)疫苗疫苗、全菌体灭活疫苗、全菌体灭活疫苗第四十五页，共九十五页。甲醛甲醛(ji qun)(ji qun)杀菌石碳酸防腐疫苗杀菌石碳酸防腐疫苗 50 50年代初期学自前苏联，为伤寒、副伤寒甲乙三年代初期学自前苏联，为伤寒、副伤寒甲乙三联疫苗。用甲醛联疫苗。用甲醛(ji qun)(ji qun)杀菌，杀菌，0.50.5石炭酸生理石炭酸生理盐水

38、制成。每毫升含伤寒沙门氏菌体原为盐水制成。每毫升含伤寒沙门氏菌体原为1 1亿亿- -亿；副伤寒甲乙由每毫升各亿亿；副伤寒甲乙由每毫升各亿- -.5.5亿，细菌总量亿，细菌总量原三联疫苗为原三联疫苗为2020亿亿-10-10亿。亿。第四十六页，共九十五页。加热加热(ji r)(ji r)杀菌石碳酸防腐疫苗杀菌石碳酸防腐疫苗 此法历史最久，此法历史最久，18961896年年首创首创(shuchung)(shuchung)的伤寒疫苗即的伤寒疫苗即为此法制成，只用为此法制成，只用5656水水浴浴3030inin杀菌加石碳酸防腐杀菌加石碳酸防腐制成。美国仍用此法制作标制成。美国仍用此法制作标准品。准品。

39、第四十七页，共九十五页。丙酮丙酮(bn tn)(bn tn)杀菌疫苗杀菌疫苗 1921 1921年创制，认为对稳定年创制，认为对稳定ViVi抗原抗原(kngyun)(kngyun)有益，有益，系将一份菌液加三份丙酮处理，然后抽气系将一份菌液加三份丙酮处理，然后抽气干燥制成。干燥制成。19431943年首次在意大利使用，经年首次在意大利使用，经世界卫生组织做现场考核，认为效果最好。世界卫生组织做现场考核，认为效果最好。第四十八页，共九十五页。观察组观察组观察人数观察人数中强反应中强反应百分率百分率(%)(%)第一组第一组1408140885856.056.05第二组第二组131313131511

40、5111.5011.50合计合计272127212362368.758.75伤寒伤寒(shnghn)(shnghn)、副伤寒、副伤寒(shnghn)(shnghn)甲乙三联疫苗接甲乙三联疫苗接种反应种反应 实践证明，菌体疫苗预防伤寒效果肯定的，但接种实践证明，菌体疫苗预防伤寒效果肯定的，但接种(jizhng)(jizhng)后的严重反应一直困扰着人们。后的严重反应一直困扰着人们。第四十九页，共九十五页。、口服、口服(kuf)(kuf)Ty21aTy21a疫苗疫苗 7070年代末期研究成功年代末期研究成功(chnggng)(chnggng)的口服伤寒疫苗的口服伤寒疫苗Ty21aTy21a活疫苗，

41、是以活疫苗，是以Ty21Ty21伤寒毒株作为出发株，用伤寒毒株作为出发株，用亚硝基胍诱变所得的突变亚硝基胍诱变所得的突变株。株。第五十页，共九十五页。口服口服Ty21aTy21a疫苗疫苗(ymio)(ymio)的特点的特点1.1.减毒活疫苗减毒活疫苗此突变株缺少尿苷二磷酸半乳糖此突变株缺少尿苷二磷酸半乳糖-4-4-异构酶半乳糖异构酶半乳糖 激酶和半乳糖激酶和半乳糖1-1-磷酸尿苷酰转移酶的活性降低约磷酸尿苷酰转移酶的活性降低约8 8 0 0。且没有且没有ViVi抗原。所以其毒力减低，但此突变株有抗原。所以其毒力减低，但此突变株有 完整的完整的O O抗原抗原LPSLPS，并具有免疫原性，能诱导较

42、好并具有免疫原性，能诱导较好 的免疫保护性反应。的免疫保护性反应。2.2.经过多年观察证明经过多年观察证明(zhngmng)(zhngmng)有效，反应也较轻。一些国有效，反应也较轻。一些国家家 批准应用。批准应用。第五十一页，共九十五页。口服口服Ty21aTy21a疫苗疫苗(ymio)(ymio)的特点的特点3.Ty21a3.Ty21a菌株营养要求苛刻，生长缓慢，菌株营养要求苛刻，生长缓慢， 产量很低，不易批量生产。产量很低，不易批量生产。4.4.目前无可靠的检定指标。目前无可靠的检定指标。5.5.基因背景不够清楚，因为它是用强诱变基因背景不够清楚，因为它是用强诱变(yu bin)(yu b

43、in) 剂处理而得，作为活疫苗这是它的最大剂处理而得，作为活疫苗这是它的最大 的弱点。的弱点。第五十二页，共九十五页。地区地区疫苗制剂疫苗制剂效果效果效果比较效果比较埃及埃及液体液体NaHcoNaHco3 3 96%96%智利智利肠溶衣胶囊明胶囊肠溶衣胶囊明胶囊 6666ECCECC、1919明胶明胶 ECCECC明胶明胶 智利智利液体胶囊液体胶囊 35% 35% ECCECC、76%76%液体液体 液体液体ECC ECC 印尼印尼液体胶囊液体胶囊 42% 42% ECCECC、53%53%液体液体 液体液体ECC ECC 口服口服Ty21aTy21a减毒活疫苗的免疫减毒活疫苗的免疫(miny

44、)(miny)效效果果 第五十三页，共九十五页。、 伤寒伤寒(shnghn)(shnghn)ViVi多糖疫苗多糖疫苗1.1.伤寒伤寒ViVi多糖疫苗的概述多糖疫苗的概述2.2.伤寒伤寒ViVi多糖疫苗的免疫效果多糖疫苗的免疫效果3.3.伤寒伤寒ViVi多糖疫苗不良反应观察多糖疫苗不良反应观察(gunch)(gunch)结结果果4.4.伤寒伤寒ViVi多糖疫苗的制造工艺多糖疫苗的制造工艺5.5.伤寒伤寒ViVi多糖疫苗的特点多糖疫苗的特点第五十四页，共九十五页。伤寒伤寒(shnghn)(shnghn)ViVi多糖疫苗概述多糖疫苗概述由于由于(yuy)(yuy)ViVi抗原是一种表面抗原，是由抗原

45、是一种表面抗原，是由C3C3位乙酰化位乙酰化的的 N- N-乙酰乙酰-D-D-半乳糖醛酸（半乳糖醛酸（1 14 4）连接的同聚体。）连接的同聚体。在美国在美国NIHNIH的的RobbinsRobbins等重新认识伤寒等重新认识伤寒ViVi抗原的免抗原的免 疫原性后，并受流脑多糖疫苗的启发，用与之类疫原性后，并受流脑多糖疫苗的启发，用与之类 似的方法提取似的方法提取ViVi抗原，以不伤害其抗原结构，保抗原，以不伤害其抗原结构，保 持它的免疫原性，制备了伤寒持它的免疫原性，制备了伤寒ViVi多糖疫苗。多糖疫苗。第五十五页，共九十五页。伤寒伤寒ViVi多糖多糖(du tn)(du tn)疫苗概述疫苗

46、概述早期提取早期提取Vi Vi 抗原时为了降低抗原时为了降低LPSLPS的含量，的含量， 采取采取1mol/L1mol/L乙酸乙酸100100处理处理24h24h，使，使O-O-乙酰乙酰 基和基和N-N-乙酰基脱落造成乙酰基脱落造成ViVi抗原结构变化，抗原结构变化， 导致导致(dozh)(dozh)其免疫原性发生变化。其免疫原性发生变化。新方法是用十六烷基三甲基溴化铵处理伤新方法是用十六烷基三甲基溴化铵处理伤 寒沙门氏菌，所得寒沙门氏菌，所得ViVi抗原可以保留抗原可以保留O-O-乙酰乙酰 基和基和N-N-乙酰基，使其不变性。乙酰基，使其不变性。第五十六页，共九十五页。观察观察地区地区疫苗疫

47、苗人数人数观察观察时间（月）时间（月）保护率（保护率（）尼泊尔尼泊尔伤寒伤寒Vi Vi 34573457（5 54444岁）岁）17177272南非南非伤寒伤寒Vi Vi 56925692（5 51616岁）岁）21216464伤寒伤寒ViVi多糖疫苗多糖疫苗(ymio)(ymio)的免疫效的免疫效果果第五十七页，共九十五页。疫苗疫苗局部反应局部反应发热率发热率 (%) (%) 疼痛疼痛红肿红肿硬结硬结流脑流脑A+CA+C多糖多糖（50g/50g/人）人） N=129 N=129 89 89（6969）2323（1818） 21 21（1616）2 2（2 2）伤寒伤寒ViVi（25g/25g

48、/人）人） N=127 N=127 7878（6161）1010（8 8） 2 2（2 2） 1 1（1 1） 伤寒伤寒ViVi（50g/50g/人）人） N=126 N=126 86 86（6868）9 9（7 7) ) 9 9（7 7）0 0伤寒伤寒ViVi多糖多糖(du tn)(du tn)疫苗不良反应观察结疫苗不良反应观察结果果第五十八页，共九十五页。 （Ty2株）株） 细菌培养细菌培养 生物反应液体培养（生物反应液体培养（810h） 对数生长期末收获对数生长期末收获,甲醛甲醛(ji qun)液灭活液灭活 离心去菌体，收上清液离心去菌体，收上清液 浓缩多糖浓缩多糖 上清加上清加10%十

49、六烷基三甲基溴化铵十六烷基三甲基溴化铵 离心收集沉淀，加氯化钙溶液振荡解离离心收集沉淀，加氯化钙溶液振荡解离 除去核酸除去核酸 加加95%乙醇至乙醇至25%浓度收集上清浓度收集上清 上清中加上清中加95%乙醇至乙醇至80%浓度浓度 沉淀粗制多糖，抽干沉淀粗制多糖，抽干 除去蛋白除去蛋白 加加1：10饱和中性醋酸钠溶液溶解多糖饱和中性醋酸钠溶液溶解多糖 按按1：2加冷酚提取加冷酚提取3次，离心收集上清次，离心收集上清 液并透析液并透析 沉淀多糖沉淀多糖 透析液加透析液加95%乙醇至乙醇至80%沉淀多糖沉淀多糖 用无水乙醇和丙酮各洗用无水乙醇和丙酮各洗3次次 原液原液 注射用水溶解多糖并除菌注射用

50、水溶解多糖并除菌 注射用水稀释分装注射用水稀释分装 成品成品伤寒伤寒(shnghn)(shnghn)ViVi荚膜多糖疫苗工艺流程荚膜多糖疫苗工艺流程第五十九页，共九十五页。检定项目检定项目检定指标检定指标固总测定固总测定蛋白含量蛋白含量10mg/g10mg/g核酸含量核酸含量20mg/g20mg/gO O乙酰基含量乙酰基含量2mmol/g2mmol/gKd Kd 值值0.250.25Kd Kd 值值0.250.25回收率回收率50%50%热原检查热原检查0.025g/kg0.025g/kg伤寒伤寒ViVi多糖多糖(du tn)(du tn)疫苗检定项目及检定指疫苗检定项目及检定指标标第六十页，

51、共九十五页。伤寒伤寒ViVi多糖疫苗多糖疫苗(ymio)(ymio)的特点的特点安全有效安全有效 副反应较菌体疫苗轻，但却副反应较菌体疫苗轻，但却 有其大致相同的免疫效果。有其大致相同的免疫效果。稳定性好稳定性好 即可以为液体制剂，也可以即可以为液体制剂，也可以 为冻干制品，耐热为冻干制品，耐热(nai r)(nai r)，易于运输与保存。，易于运输与保存。使用方便使用方便 注射一针，即可以有一定的注射一针，即可以有一定的 保护力，易于用理化方法标准化。保护力，易于用理化方法标准化。同其他多糖疫苗一样对婴幼儿免疫效果同其他多糖疫苗一样对婴幼儿免疫效果 差。差。 第六十一页，共九十五页。结合结合

52、(jih)(jih)疫苗疫苗一、结合疫苗的特点一、结合疫苗的特点二、免疫机理二、免疫机理三、用于制备结合疫苗的多糖抗原三、用于制备结合疫苗的多糖抗原四、用于制备结合疫苗的蛋白载体四、用于制备结合疫苗的蛋白载体五、结合化学制备结合疫苗的主要要素五、结合化学制备结合疫苗的主要要素六、结合疫苗应具备的两个共同特征六、结合疫苗应具备的两个共同特征七、结合疫苗的使用和发展现状七、结合疫苗的使用和发展现状八、结合疫苗的研究方向八、结合疫苗的研究方向九、存在九、存在(cnzi)(cnzi)问题问题第六十二页，共九十五页。一、结合疫苗一、结合疫苗(ymio)(ymio)的特点的特点1.1.抗原物质（多糖和蛋白

53、质）经化学共价结合形成抗原物质（多糖和蛋白质）经化学共价结合形成 了具有一定空间构象的结合物。了具有一定空间构象的结合物。 抗原物质还包括多肽、甾族激素、脂肪胺、核苷抗原物质还包括多肽、甾族激素、脂肪胺、核苷 等小分子物质。等小分子物质。2.2.它能使多糖抗原的它能使多糖抗原的T T细胞非依赖性转化为细胞非依赖性转化为T T细胞依细胞依 赖性赖性, ,产生具有记忆特征的产生具有记忆特征的IgGIgG抗体抗体, ,提高多糖疫苗的提高多糖疫苗的免疫免疫(miny)(miny)原性和免疫原性和免疫(miny)(miny)持久性。持久性。3.3.能够在婴儿产生免疫应答。能够在婴儿产生免疫应答。第六十三

54、页，共九十五页。 二、免疫二、免疫(miny)(miny)机理机理1.1.胸腺非依赖性抗原胸腺非依赖性抗原(kngyun)(kngyun)（TI-AgTI-Ag）2.2.胸腺依赖性抗原（胸腺依赖性抗原（TD-AgTD-Ag）第六十四页，共九十五页。胸腺非依赖性抗原胸腺非依赖性抗原(kngyun)(kngyun)（TI-AgTI-Ag）细菌脂多糖、荚膜多糖等。细菌脂多糖、荚膜多糖等。TI-AgTI-Ag分子结构呈长链，分子结构呈长链，O-O-乙酰基、丙酮乙酰基、丙酮(bn tn)(bn tn)酰基、糖苷键和酰基、糖苷键和 磷酸脂键等抗原表位重复排列而成簇，对每种表位来将磷酸脂键等抗原表位重复排列

55、而成簇，对每种表位来将 可视为多价的，能与可视为多价的，能与B B细胞表面受体结合形成细胞表面受体结合形成“帽状现象帽状现象”。可单独触发可单独触发B B细胞产生抗体，不需细胞产生抗体，不需T T辅助性细胞辅助。辅助性细胞辅助。与与TI-AgTI-Ag发生应答的是发生应答的是B B细胞的抗原识别受体细胞的抗原识别受体IgMIgM（B B细胞成细胞成 熟的标志），产生的抗体仅为熟的标志），产生的抗体仅为IgM,IgM,且抗体效价低、无且抗体效价低、无IgIg类类 型转换。型转换。不诱导细胞免疫应答，也不引起免疫记，即使再次采用相不诱导细胞免疫应答，也不引起免疫记，即使再次采用相 同抗原刺激也不能

56、引起初次免疫应答，更无抗体亲和力成同抗原刺激也不能引起初次免疫应答，更无抗体亲和力成 熟过程熟过程。第六十五页，共九十五页。TI AgBIgM无记忆无记忆B B细胞细胞(xbo)(xbo)（BmBm）形成，不产）形成，不产生加强应答，因而免疫原性弱。生加强应答，因而免疫原性弱。B B细胞细胞(xbo)(xbo)对（对（TI-AgTI-Ag）应答特点）应答特点第六十六页，共九十五页。胸腺依赖性抗原胸腺依赖性抗原(kngyun)(kngyun)（TD-AgTD-Ag）绝大多数天然抗原（蛋白质）都是绝大多数天然抗原（蛋白质）都是TD-AgTD-Ag。 TD-Ag TD-Ag分子量大，结构复杂，表位种

57、类多且不均匀分子量大，结构复杂，表位种类多且不均匀( (就每就每 种表位而言它是单价的种表位而言它是单价的) )。此类抗原含有此类抗原含有(hn yu)(hn yu)T T细胞和细胞和B B细胞决定簇，蛋白质通过单价表细胞决定簇，蛋白质通过单价表 位的相互作用与位的相互作用与B B细胞表面细胞表面IgMIgM受体结合，但不诱导受体结合，但不诱导“帽帽 状现象状现象”，不足以激活，不足以激活B B细胞细胞, ,但被但被B B细胞胞饮、细胞胞饮、水解后肽水解后肽 表位与表位与T T细胞受体结合诱导细胞受体结合诱导THTH细胞产生细胞因子。细胞产生细胞因子。TD-AgTD-Ag需需THTH细胞产生细

58、胞因子并激活细胞产生细胞因子并激活B2B2细胞产生抗体细胞产生抗体, ,浆浆 细胞在产生抗体中发生细胞在产生抗体中发生IgIg类型转换，合成类型转换，合成IgGIgG和和IgMIgM类抗类抗 体。体。形成记忆形成记忆BmBm细胞，当受到相同抗原再次刺激时引起再次细胞，当受到相同抗原再次刺激时引起再次 应答，而且抗体亲和力较初次应答明显提高。应答，而且抗体亲和力较初次应答明显提高。诱导体液免疫应答，同时诱导细胞免疫应答。诱导体液免疫应答，同时诱导细胞免疫应答。第六十七页，共九十五页。TD-AgIgGIgMTH细胞细胞细胞因子细胞因子B2Bm停止分化停止分化记忆记忆B细胞（细胞（Bm）形成，产生加

59、强应）形成，产生加强应答答(yngd)，增强免疫原性。，增强免疫原性。B B细胞对（细胞对（TD-AgTD-Ag）应答）应答(yngd)(yngd)特特点点第六十八页，共九十五页。多糖多糖(du tn)(du tn)蛋白质结合物（蛋白质结合物（TD-AgTD-Ag）将多糖分子与蛋白质共价结合，由于将多糖分子与蛋白质共价结合，由于(yuy)(yuy)蛋白质蛋白质 抗原激活抗原激活THTH细胞，能诱导细胞，能诱导THTH细胞产生细胞因子细胞产生细胞因子（如（如r-IFN,IL-2r-IFN,IL-2、4 4、5 5）并传递给）并传递给B2B2细胞，使细胞，使 之参与免疫应答。之参与免疫应答。TD-

60、AgTD-Ag应答存在着应答存在着TH-B2TH-B2细胞间的协作作用细胞间的协作作用第六十九页，共九十五页。 多糖多糖(du tn)(du tn)蛋白质结合物（蛋白质结合物（TD-AgTD-Ag） 多糖蛋白质结合疫苗免疫优势多糖蛋白质结合疫苗免疫优势: :1.1.有有THTH细胞参与，刺激机体产生的抗体细胞参与，刺激机体产生的抗体 主要有主要有IgGIgG和少量和少量IgMIgM，能产生细胞免，能产生细胞免 疫和加强免疫应答，免疫原性强。疫和加强免疫应答，免疫原性强。2.2.免疫免疫(miny)(miny)接种范围广，对所有年龄组人群接种范围广，对所有年龄组人群 均能提供免疫保护。均能提供免

61、疫保护。第七十页，共九十五页。抗体生成的辅抗体生成的辅助细胞专一地助细胞专一地识别识别(shbi)(shbi)载体决载体决定簇定簇 THTH细胞细胞(xbo)(xbo) B2B2细胞细胞(xbo)(xbo)是产生抗体的效应细胞是产生抗体的效应细胞 专一地识别多糖（半抗原）专一地识别多糖（半抗原）表面抗原识别受体为表面抗原识别受体为IgGIgG和和IgMIgM产生产生IgGIgG和和IgMIgM。分化增殖过程中有少量分化增殖过程中有少量B B细胞细胞 停止分化变成记忆停止分化变成记忆BmBm细胞细胞出现加强应答免疫原性大大提高出现加强应答免疫原性大大提高细胞因子细胞因子TD-AgTD-AgTD-

62、Ag应答存在着应答存在着TH-B2TH-B2细胞间的协作作用细胞间的协作作用第七十一页，共九十五页。一类一类(y li)(y li)是细菌的荚是细菌的荚膜膜多糖（多糖（CPSCPS）A/CA/C群脑膜炎球群脑膜炎球菌菌(qijn)(qijn)肺炎肺炎(fiyn)链球菌链球菌b b型流感嗜血杆型流感嗜血杆菌（菌（HibHib）和）和伤寒杆菌伤寒杆菌结合疫苗结合疫苗在动物在动物和人体中均证实和人体中均证实了其安全性和增了其安全性和增强的免疫原性。强的免疫原性。三、用于制备结合疫苗的多糖抗原三、用于制备结合疫苗的多糖抗原第七十二页，共九十五页。另一类为菌体多糖另一类为菌体多糖(du (du tn)t

63、n)（OPSOPS）脂多糖脂多糖(du tn)(du tn)（LPSLPS）中）中的的O O特异性多糖（特异性多糖（O-O-PSPS）脂寡糖（脂寡糖（LOSLOS）中的寡糖（中的寡糖（OSOS）结合疫苗结合疫苗纯化的纯化的O-PSO-PS和和OSOS没有免疫原性，与蛋白载体制备结合疫没有免疫原性，与蛋白载体制备结合疫苗后可获得免疫原性。抗苗后可获得免疫原性。抗O-PSO-PS的的IgGIgG具有具有型特异性保护，抗型特异性保护，抗OSOS抗体具有杀菌活性及免疫抗体具有杀菌活性及免疫(miny)(miny)保保护作用。护作用。三、用于制备结合疫苗的多糖抗原三、用于制备结合疫苗的多糖抗原第七十三页

64、，共九十五页。四、四、用于制备结合疫苗用于制备结合疫苗(ymio)(ymio)的蛋白载的蛋白载体体1.1.细菌的分泌性毒素（去除细菌的分泌性毒素（去除(q ch)(q ch)毒性毒性） 破伤风类毒素（破伤风类毒素（TTTT） 白喉类毒素（白喉类毒素（DTDT）及无毒）及无毒 CRM197CRM197 百日咳毒素（百日咳毒素（PTPT）及无毒）及无毒CRM3201CRM3201 霍乱肠毒素（霍乱肠毒素（CTCT）及其）及其B B亚单（亚单（CTBCTB） 无毒的重组绿脓杆菌外毒素（无毒的重组绿脓杆菌外毒素（rEPArEPA） 大肠杆菌热敏感肠毒素（大肠杆菌热敏感肠毒素（HLTHLT）2.2.细菌

65、菌毛细菌菌毛 绿脓杆菌菌毛（绿脓杆菌菌毛（PAPPAP） 淋球菌淋球菌P-3-2P-3-2菌毛菌毛第七十四页，共九十五页。四、用于制备四、用于制备(zhbi)(zhbi)结合疫苗的蛋白载体结合疫苗的蛋白载体3.3.细菌外膜蛋白细菌外膜蛋白 B B群脑膜炎球菌外膜蛋白（群脑膜炎球菌外膜蛋白（OMPOMP）4.4.病原蛋白质病原蛋白质 如乙肝表面抗原（如乙肝表面抗原（H HsAgsAg）5.B5.B群脑膜炎球菌外膜蛋白（群脑膜炎球菌外膜蛋白（OMPOMP）6.6.伤寒杆菌鞭毛和肺炎球菌溶血素（伤寒杆菌鞭毛和肺炎球菌溶血素（PLYPLY）也是）也是 很有潜力的结合蛋白很有潜力的结合蛋白(dnbi)(

66、dnbi)。7.7.人工合成的多肽聚合物，常用的是多聚赖氨酸人工合成的多肽聚合物，常用的是多聚赖氨酸 第七十五页，共九十五页。1.1.多糖抗原的选择多糖抗原的选择 细菌的保护性抗原细菌的保护性抗原 荚膜多糖（荚膜多糖（CPSCPS） 菌体多糖（菌体多糖（OPSOPS）2.2.多糖分子大小选择多糖分子大小选择 天然天然(tinrn)(tinrn)多糖多糖 经降解后的寡多糖。经降解后的寡多糖。五、结合化学制备五、结合化学制备(zhbi)(zhbi)结合疫苗的要结合疫苗的要素素第七十六页，共九十五页。3.载体蛋白的选择载体蛋白的选择 破伤风类毒素（破伤风类毒素（TTTT） 白喉类毒素（白喉类毒素（DTDT）4.多糖和蛋白质活性功能基团多糖和蛋白质活性功能基团(j tun) 天然的天然的 修饰修饰的的5.结合模式结合模式五、结合五、结合(jih)(jih)化学制备结合化学制备结合(jih)(jih)疫苗的疫苗的要素要素第七十七页，共九十五页。功能团功能团蛋白质蛋白质多糖多糖一类功能团一类功能团（多糖或蛋白质原有（多糖或蛋白质原有功能团）功能团） 羧基、氨基、巯基羧基、氨基、巯基和芳香基和芳香基