imageJ测荧光
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1、word这里是它的官网:正题1、安装后首先打开ImageJ:2、打开要分析图片:Fileopen热键为Ctrl+O3、转换成8bit的灰度图:ImageType8-bit4、黑白反转因为对于光密度OD来说越白数值越小,纯白为0;越黑数值越大,纯黑理论上是无限大。因此我们需要将上一步所转换的灰度图进展黑白反转,不然的话测出来的数值就会荧光越亮反而数值越小:EditInvert热键为Ctrl+Shift+I以下为从左到右分别为原图、8bit灰度图与反转后的图:5、校正光密度软件默认为测量灰度,因此我们要改为更加适用的光密度,其中原理不是一两句话能说得清的,这里忽略:AnalyzeCalibrate
2、 在弹出来的界面的Function选择Uncalibrated OD,并下界面左下方勾选Global calibration,然后点击右下角的OK点击OK后会跳出校正后的光密度曲线:如不勾选Global calibration,光密度的校正只对这X图片有效,一般分析都要分析多X图片,所以需要勾选,勾选后在打开另一图片时会提示是否将此校正应用于所有图片,不勾选Disable Global Calibration,勾选Disable these Messages6、选择测量单位一般选择象素,如有明确的比例,也可以选择相应单位:AnalyzeSet scale点击后在弹出的界面里点击中间的click
3、 to Remove Scale,并勾选下面的Global同样的,如不选Global这个测量单位的选择只对这X图片有效,最后点击OK7、选择测量项目:AnalyzeSet Measurements在弹出界面中选择我们需要测量的项目Area、Integrated density,并勾选下面的Limit to threshold这个选项是指只测量我们选中的X围,如不勾选侧会测量整X图片数据,选择后点击OK8、选择测量域值:ImageAdjustThreshold热键为Ctrl+Shift+T滑动弹出界面中间的滑块选择适合的域值,以使的你图片中的细胞或待测目标刚好全部被选中,选好之后点击右下角的Se
4、t在弹出来的界面点击OK9、测量:AnalyzeMeasure热键为Ctrl+M或直接按M10、记录数据并计算:结果中的Area为选择X围的面积,如果是测量的是细胞的话就是细胞在图中的面积;IntDen就是所选X围的IOD光密度的总和。结果界面中的数据可以复制到Excel等软件中进展计算。用IntDen的数值除以Area的数值得出来的就是这X图片中细胞的平均光密度,以这X图片的数据为例,即:18854/179252=0.105181532/pixel同法测量多X图的平均光密度值后就可以进展半定量比拟。以下附上分别应用Image-Pro Plus与ImageJ对五X图片进展分析的结果比照:从结果的比照看来ImageJ与IPPImage-Pro Plus的分析结果是根本一致的8 / 8
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