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1、基因工程在环境学中的应用比夸为止，肯关舉出IT型的世义喷务.表述不一总就卓J而言.子水平上对基国进帝慄柞能技，求.LMltt,股认为基因工SC(engineering)是指.运用限制件的内切核酸葩和连揍前等繭类將不同的DNA进行体外切割后*连接构碇审組的DNA删申绢的DMA紆牛物介喷导人豉者頁接导入等转样方耘弓I人受体備胞进tf克隆利丢达I从丽改变了生物的遗创壺出生物新品种.戴者通过尢量扩増手段，为人襄提供有用产品的技152殖物金嵐检怙白金硫彊白tMeialloihionaniJMIAIuh一类广泛存在于生窗休中的寓含半0E氮觐且能祝霓金貝诱导的分子豐较低的金屣紹舍疋讯早在】957年Valle
2、eBL4卩吃研究重金H元鴛躡的生物学功能时.曾次从乌的肾脏羯肿卩分昭褂到了动物MT植物MT的研兜起步稍晚，19丁7年.0尿裁肚1_则住上.灶讯戛中游久发打TttftNrr.甜肓，第一个植卷IMT蛋白一小畫胚乳Ec鳖白魅威功分离出来陨L现后的实脸研乳陆续从水稻.养麦和玉栄零劣种植勒中发現并分薦岀了爹科植物MT僅刨呵.L5J.1植物金嵐碇僅臼的宦义HYinafcaK凹嚷接提出的程iL輒舉的XTHL荐以卜特电：分子最我卜一般只有几十个轨些魅峨堆构就金属含it较高*-谯血每分子MT含有7到12个金扉离&并且，由金属配傥擁焙合而村成i高，可达23囁到阳蚣而且*不含MMKZt芳鲁JHK基酸，其排列顺序的轮
3、持性和保守性较强；兵育独特們金躬疏四面悴的离合结拘*因此.具宵捋斬吸收托熠线別却Cd-MJ的啜收峰til&250im删込MT的畋攻碑值在270miH近：含有为个高含猛华的族状结沟，即含冇两个结构mt分了內不含二硫锻。1植物金属硫彊白的功能自金属碗蛋白（MT）被发现至今，对其功能的定论一fi郁存存看较多的争议.就目前来讲，对悄物MT功能的研究，维大第枝部是根抓其表达行为掛测而来.抵排测兀功能可能涉及以卜儿个方血：即能够淸除1*1由基、解徐頑金属离子的商啻和移与微M元素的运输和供给以雄持细胞内环境的稳霑等.（1）淸除自由基1985年，ThomallcyPJJVasakM15$,经过研究发现，金属战
4、虽口（MT）町以消除由于辐射而形成的務自曲基（OH）,并且,当其与谷就甘!k（CSH）作用后,MT能御以再化n此，引领了人怕对mt与自in早关系这-新领袋的小断硏究与探索.张艳曲的实验硏究花明，MT具灯扱具恃殊的化学结构，正因如此.它是濡除体内自由获能力用強的-种蛋白质.其清除F0自山坯（OH）的維力约为SOD的1力倍左右.而潜除氧I由基（*O）的能力约是G5H的25倍用右.他41它fl冇毀强的抗負化活杵，可愎件为体内补体抗氧化剤.解除朿金风离子的會害金属硫蛋门（MT）之所以能够解除甫金属离了的离吉作用，主更依拥是MT富含T旎氮酸，其含有的蔬裁SH能鵜与E种仃需佥図爲子进厅强烈的绍合反应例如.
5、MT皑够解除Pb=Hg2Cd-AgZn和Cu轩舲毒店并fL,能够将其摆出体外.植物MT的半就氨笊的柑何方式和所含的独址巧动物MT相比烙异痕尢闵此.二岀占审金属的亲和力以及仃曩令脱出了的结合腱力也有所不冋.狼多实验研究列表明植物MT歩因的&达邂小佥厲离了的购H作用较大.弟址推测.梢物MT町能在络合审金属离子和解除亟金属离孑的毒害警方血具有广阔的应用脑景.参与微昼元素的运输和供给体内的微呈元素多數是佥尿元素，rfnMT乂能够结合多冲金属离子.因此，MT在徹駅元索的运輸和供给方曲会发挥页娶的作用，许多探索性研究也衣明了这一点.RCFoky和ZMLiang通过花达余寻MTIa和MTIb的实验研究点明.
6、在金属肉予液度较低时，MT作为金屆离于的体，能够较好地维持内环境中金械离子的稳定水平，于此同时能够有效地将金佩离子运输和供給到所椎费的细织。此外，LHYu和MLhneda尊他砒兗发现.木种的2.尤其是荽社部分.nceMI0J表达賦丑常岛.约足叶片中的】50倍A右，由此推测，MT可維参与了将特泄的金&离子，通过舛管束运綸亜憾和小穗的活动，向这-点与riceMT在小则屮的髙表达履相符合，研究人员还给岀了另外一种对能性，认为riccMTnJ将金尿辅助因子运输到脱辅舉的特上，从而有效地激沾了的参与代谢反应.瘠金属娥缶白基因工程笛(pGEXZjMTB)该荫是M彩厶、等.以从枣树的cDU文咋中荻得的坯邓p
7、uiJ-MT为鞭板.用PCR方浓扩增出HT基因225bp特异片段，将只亚克隆入pBluescipll1ISK-T敬休用用制性内切前Btnli和Hind川分别U切重组pBLuescip讥SK-T质粒和原核表达载体FET28dCH,然后格MT基因片段和&达較体PET28a(卜)通过T4DNA連接橱迸行定向连殘用阪制性内切酚Badl丨和Hind山胡切和PCR力法双巫鉴定璽组农达殛粒.具体方法如下=BluGscipiIISK-MT构建诞燥械法捺取戎体pBhiesc讽IISK/m.训行琼脂旅融胶M汰确认6取1.5畑的倾杓用Snwll进行厲醐切，少量电泳证明焰切完全JS,将闘切体系纯化后进行pBluesc
8、iptllSK-Ttt体的制备.塑片用DNA连接酶将制备好的pBluesciptllSKT找体与纯化后的MTPCR片段进行连接，将连接产物转化入制备好的人肠杆菌DH3感受态细胞，转化液在含贺节肖霉素3叩的LB區体培养垒上生长，37U静置培养过轧从培养板随机挑选单克鑫凿逬行PCR阳性履定，将签定为阳性的转化体用BamHI和Hindi进行取爾切鉴定(3) 僦切、冋收MT片段取如gX可克陟雀体pBhjcsciptllK-MT的质锁用BamHI利Hindi】进行双侶切，将酹切后的MT片段从琼腼樋凝胶切割后采用柱式DNA離胶回收试剂盒回收.表达按体PET28a(+)匍切与纯化戢2pg的PET2血质粒用HamHI和HiMlll双開切，纯化购切体系用CIAP进行脱懾酸处理后再次纯化体系，备用.(5) PET28a+)-MTt达我体的构建用I4DNA连接悅将回收后的I的片用MT定向克:降至曲BamHI和Hind川酶切后的殺达銭WPET23a(+)k,转入大肠杆商DH5a中，犊种于含卡那布索(Kan)LB平板，3兀培养过夜.(6) 重组质粒的鉴览从培养板随机挑选申克降的迟厅PCR阳件益足.挑取叱R鉴足出的阳性克隆国注，划线培养.同时提取出亜组质机经BanHl、Hindlll蔚切,琼脂糖凝胶电泳后验证片段的大小.
基因工程在环境学中的应用
