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1、微生物实验室菌种保存、运输、使用和销毁操作规程1目的正确保存菌种，防止菌种的流失，达到生物安全防护目的。2范围适用于微生物室。3责任经过培训合格并经授权的专业检验人员可进行本程序操作。4菌种的保存4.1质控菌种的保存在中国菌种保存中心等合法的菌种中心购得标准菌株后，并填写菌种购买记录（附表1）。将菌株转种于相应的培养基上，35培养2448小时后，再转种二次，然后将纯菌种转入EP管（OXOID5g/L的胰蛋白+150ml甘油溶液分装与EP管中，每个EP管中分装菌种保存液1.5ml，高压灭菌后备用）中，菌种的浓度尽量高且研磨均匀。放-80冰箱中冻存.可保存20年左右，并填写质控菌种保存记录（附表2
2、）。4.2临床菌种的保存临床分离株在分离鉴定后，若为非高致病性病原微生物，将纯菌种转入EP管（OXOID5g/L的胰蛋白+150ml甘油溶液分装与EP管中，每个EP管中分装菌种保存液1.5ml，高压灭菌后备用中，菌种的浓度尽量高且研磨均匀。在EP管管壁上写好标本号后放入-80的专用冰柜（配备双锁）中保存，可保存20年左右，并填写微生物室菌种保存原始记录（附表3）。4.3临床疑难菌株的保存 临床分离的疑难菌株在分离鉴定后，若为非高致病性病原微生物，将纯菌种转入EP管（OXOID5g/L的胰蛋白+150ml甘油溶液分装与EP管中，每个EP管中分装菌种保存液1.5ml，高压灭菌后备用中，菌种的浓度尽
3、量高且研磨均匀。在EP管管壁上写好标本号后放入-80的专用冰柜（配备双锁）中保存，可保存20年左右，并填写疑难菌种保存记录（附表4）。做好疑难菌株相关信息的登记。钥匙由专人保管（双人双锁），如其中一名工作人员未在岗应将钥匙交给第三名在岗人员保管。本室不保存高致病性病原微生物，若分离到该类病原微生物，应立即就地高圧灭菌销毁，并通知医院保健科和其他相关卫生防疫部门，严禁将该类病原微生物流传出本室。5 工作用菌种的传代5.1当工作用菌种代数小于5时，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种。5.2也可取用-80专用冰柜保存的菌株，进行复苏，直接作为工作用菌种。6 传代频率6.1细菌每1个月传代一
4、次，酵母菌每2个月传代一次，霉菌及芽孢每3个月传代一次。当超过5代，须用传代用菌种传代。6.2传代时注意无菌操作，使菌种不死亡，不污染，不丢失，同时实验人员也要采取有效的预防措施进行自我保护，如工作时必须穿工作服，佩带无菌操作，实验完成以后消毒实验进行的区域，实验仪器和器具，如发生意外，如菌种泄露或人员受伤，微生物学检验人员应立即向负责人报告以便及时进行处理。6.3传代后，按菌种的编号原则编号，并在每一支菌种管上贴上标签，标签内容包括：名称，编号，代数，传代日期，操作人，有效期，交负责人统一保管。同时及时填写菌种传代记录（附表5）。7菌种的编号 7.1采用字母加数字表示：英文缩写字母代次传代日
5、期顺序号 7.2菌种的英文缩写字母：大肠埃希菌（E.c）、金黄色葡萄球菌（S.a）、枯草芽孢杆菌（B.s）、白色念珠菌（C.a）、黑曲霉菌（A.n）、乙型副伤寒沙门菌（S.p）7.3代数用一位带有下标数字的字母表示：传代用菌种用G表示；工作用菌种用W表示；如G3表示传代用菌种第3代；W3表示工作用菌种第3代。 7.4传代日期用6位数字表示：年份取最后两位数，月、日分别用两位数。 如2012年1月12日传代的第一支大肠埃希菌作为传代用菌种的编号为：E.c-G3-018 菌种的定期检查与鉴定 8.1 在菌种的保存期间，应每天检查保存菌种冰箱的温度、菌种管是否生霉，并及时填写菌种观察记录（附表6），
6、如有异常应及时处理。8.2菌种在保存期间内均应跟据 菌种的特性（工作用菌种没转种两代一次，传代用菌种每三个月一次）检查其菌落性状，革兰染色，显微镜下菌体形态，必要时检查生化特性等项目，若发现与原菌种变异较大，应重新分离，纯化，鉴定，再加以保存。并做好菌种鉴定记录（附表7）。8.3所保管的菌种，不能随意转让其他单位和个人，需要时应有单位证明和批准手续方可供应。 9菌种的运输本室的菌株严禁私自外传。如果因科研需要菌株转移出本室，需经科室和医院有关方面同意。并使用符合传染病防治法等法规规定的专门菌株运输箱进行运输，并登记备案。10 菌种的使用微生物学检验人员领取工作用菌种或传代用菌种，用于日常检验、
7、科研或验证试验，使用后及时填写菌种使用记录（附表8）以便追踪菌种使用历史。11 菌种的销毁保留的临床菌种在一年以上时，可进行集中销毁。一般情况集中销毁一年最多进行一次。将要销毁的菌种先进行登记，然后从冰柜中取出菌种，放入高压灭菌锅中，121灭菌30min，然后将灭菌后的菌种放入医疗垃圾袋（黄色）中，送外焚烧。销毁后填写废弃菌种（物品）销毁记录（附表9）。12 样本与菌毒种发生泄漏或溢出当实验人员在存放、领取样本与菌(毒)种时，不慎将容器或保存管掉在地上或散落时，必须立即用足够量的消毒液喷洒局部，如果内容物溅出，应用浸透消毒液的毛巾或纸巾覆盖局部30min后进行清理，将污染物放人黄色医疗废物包装袋中，然后121 30min高压灭菌处理；用喷雾器喷洒75%酒精对空气进行消毒。
微生物实验室菌种保存运输使用和销毁操作规程
