微生物实验课件

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1、微生物实验医学微生物学实验综合性实验一v脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三）空气、手指皮肤细菌学检查结果分析菌落特征观察P11细菌纯培养P10（纯培养不得超过18小时）脓汁和粪便标本检验（录像）肠道致病菌的分离与鉴定（录像）油镜使用方法（讲解）微生物实验空气的细菌学检查空气的细菌学检查组号时间地点菌落形成单位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU /m3 50,000NAT 86N(直径7cm平板）N：平板上的菌落数 A：平板面积(38.5cm2)T：采样时间(15分钟) CFU：colony forming unit 微生物实验医院各类房间空气中细菌总数

2、要求 细菌数分级细菌数分级 细菌总数细菌总数/M/M3 3 病房类型病房类型v最低细菌数 10 器官移植、心血管手术室、制剂室。v低细菌数 200 无菌室或其他手术室、婴儿室、产 房、术后恢复室、供应室。v一般细菌数 200500 普通病房、治疗室、放射科、按摩室。注1：以上为世界卫生组织建议标准。注2：我国卫生部要求，手术室、产房及婴儿室空气中细菌总数 不得超过500个/M3。 微生物实验液体或固体标本菌落总数测定v可将标本作十倍、百倍、千倍、万倍稀释。v分别取1ml注入直径9cm的灭菌平皿内。v倾注46营养琼脂培养基大约15ml，混合均匀。琼脂完全凝固以后，37培养48小时。v选择菌落数在

3、30300之间的平板作为菌落总数测定标准测定标准。v将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出cfu/g(ml)。 微生物实验1 3 2 4 1 3 2 4 手指皮肤的细菌学检查第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。 2人1块平板甲、丙常规洗手乙、丁标准洗手甲（丙）乙（丁）丙丁微生物实验手指皮肤细菌学检查结果分析第1格为洗手前：+ 第2格为洗手后 常规(甲、丙)洗手方法：? 标准(乙、丁)洗手方法：?第3格为消毒后：第4格空白对照：-微生物实验细菌在固体培养基中的生长现象v菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。v菌落特征：大小、形状、边缘、颜

4、色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性.v菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）v菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。微生物实验菌落特征P11v大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约13mm)，小(直径约1mm以下)。v形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。v边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。v表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、湿润或干燥。v溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。v色素：一般为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素(菌落本身着色，培养基不着色)和水溶性色素(菌落及培养基均着色)。 微生

5、物实验微生物实验微生物实验微生物实验微生物实验微生物实验微生物实验细菌的纯培养v挑选单菌落:脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落颜色是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落；菌落直径23mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，很淡的粉红色，半透明，直径12mm。选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落，进行接种。微生

6、物实验v斜面接种法P10 （1组4支）甲普通平板黄色菌落1支斜面乙普通平板白色菌落1支斜面丙伊红美蓝紫黑菌落1支斜面丁伊红美蓝粉红菌落1支斜面标记：组号、黄色、白色、紫黑、粉红。培养时间不得超过18小时。微生物实验微生物实验微生物实验微生物实验微生物实验斜面接种法P10甲黄色,乙白色,丙紫黑,丁粉红。标记：组号，颜色微生物实验安全警告v接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。v气溶胶粒径100um沉降很快,50um在0.4s内扩散开,5um通过呼吸道直接到达肺泡。vPike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。v实验时应坐着，在

7、酒精灯半径20厘米范围内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。微生物实验奥林巴斯奥林巴斯 CX21CX21型型 生物显微镜生物显微镜（实验柜内，实验柜内，每人一台）每人一台）注意：只能横放，不得竖放。微生物实验奥林巴斯 CX21型 生物显微镜微生物实验使用须知v显微镜是精密光学仪器，请不要让其受到撞击，请小心操作。v在搬运显微镜时，请按右图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运。如果拿住载物台和镜筒等部位搬运的话，有可能会造成损坏。微生物实验显微镜各部件名称微生物实验开关与调整光强v开或关之前，必须将亮度调整旋钮按箭头相反相反方向转动到最小位置，以免损坏灯泡。v电源开关拨到

8、 侧为开，拨到侧为关闭。v按箭头方向转动亮度调整旋钮变亮，相反方向转动则变暗。微生物实验放置标本v按箭头方向转动粗调旋钮降下载物台。v按箭头方向拉开载物台标本夹 ，自前向后将标本片放入平台，标本夹 轻轻放回原位。v转动上侧垂直移动杆和下侧水平移动杆，移动标本至光路中间。微生物实验载物台位置刻度v载物台上的刻度方便确定标本位置，标本移动后可以快速回到原位。水平刻度的标识位置以机械载物台的位置来读取。垂直刻度的标识线以的位置来读取。微生物实验聚焦v从显微镜的侧面观察，按箭头方向转动粗调旋钮，使物镜尽可能接近接近标本。一边看目镜，一边慢慢逆逆箭头方向转动粗调旋钮， 使载物台下降下降。v看到标本以后，

9、用微调旋钮来正确对焦。10倍物镜的工作距离工作距离（WD，从物镜到标本的 距离）为10.5mm。 油镜的WD为0.13mm。微生物实验调整瞳距v调整瞳距是调整双目间的距离，使两眼同时看到一个显微镜像，能防止观察时的疲劳。v方法：一边看目镜，一边移动双目镜筒，让左右的视野一致。v标识的位置表示瞳距。请记住自己的瞳距值，以便下次观察时调整。微生物实验调整屈光度数v调整观察者左右视力。以右眼看右侧的目镜，旋转粗微调粗微调旋转盘，对好焦距。以左眼看左侧的目镜，旋转屈光度屈光度调整环，对好焦距。微生物实验调整聚光镜位置和孔径光阑v用聚光镜上下移动旋钮，将聚光镜转到最上面。v在孔径光阑环上刻有物镜倍率（1

10、0倍，100倍等），观察时将与使用物镜相对应的倍率放到正面。微生物实验转换物镜v旋转物镜转盘，将希望使用的物镜（10倍、100倍）转到标本的上方。微生物实验100倍浸油物镜使用方法v油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油。v旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。v如果浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜来回通过12次浸油，排除油内气泡。微生物实验显微镜油镜的使用P13v10物镜标本位置滴加香柏油100油镜浸泡油中,几乎与标本接触（工作距离0.13mm）细调节调焦，观察物像记录结果关闭电源。v油镜处理：擦镜纸拭去香柏油 擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）混

11、合液擦拭擦镜纸擦拭油镜。v显微镜罩上防尘罩 横放在实验柜内。实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请使用离你最近的电源插座。 微生物实验细菌的显微镜检查法v显微镜：光学显微镜v目镜：10倍v物镜：油镜头（90或100倍）v放大倍数：1090或100900或1000v镜油：香柏油或石蜡油v香柏油折射率（n1.515），玻片折射率（n1.52），石蜡油（n1.46），空气（n1.00）。油镜使用完毕必须擦拭油镜头。微生物实验油透镜光线载玻片微生物实验思考题v在微生物学实验中,怎样才能避免杂菌的污染?v空气的卫生标准规定如何?v你的实验结果说明了什么问题?v怎样从医务人员手指上分离和鉴定金黄色葡萄

12、球菌?v菌落特征主要描述哪几方面问题？任何挑选单菌落？ 微生物实验医学微生物学实验综合性实验一v脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三）空气、手指皮肤细菌学检查结果分析菌落特征观察P11细菌纯培养P10（纯培养不得超过18小时）油镜使用方法（讲解）脓汁标本检验 （录像）肠道致病菌的分离鉴定（录像）微生物实验常用器材摆放顺序：电源插座常用器材摆放顺序：电源插座试管架试管架酒精灯酒精灯污物盘。污物盘。试管架上器材：按接种针、试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔和打火接种环、油性笔和打火机的顺序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源机的顺序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源插座一侧，使用以后必须放回原处，依次摆整齐。插座一侧，使用以后必须放回原处，依次摆整齐。 微生物实验实验室器材实验室器材 整齐有序整齐有序