微生物检验食品中细菌总数的测定学习教案

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1、微生物检验食品中细菌微生物检验食品中细菌(xjn)总数的测定总数的测定第一页，共20页。2、检样处理、检样处理（1）以无菌操作将检样）以无菌操作将检样25g（或（或25ml）剪碎，放于含有）剪碎，放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨制成量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨制成1：10的的均匀稀释液。均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000r/min100000r/min的速度处理的速度处理

2、1min，做成，做成1：10的均匀稀的均匀稀释液。释液。（2）用）用1ml灭菌吸管吸取灭菌吸管吸取1：10稀释液稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含，沿管壁徐徐注入含有有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管混合触及管内稀释液），振摇试管混合(hnh)均匀，制成均匀，制成1：100的的稀释液。稀释液。（3）另取）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序的灭菌吸管，按上项操作顺序,制制10倍递增稀释液，倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用如此每递增稀释一次，即换用1支支1ml灭菌吸管。灭菌吸管。第1页/共20页第

3、二页，共20页。（4）根据食品卫生标准要求）根据食品卫生标准要求(yoqi)或对检样污染情况的估计，选或对检样污染情况的估计，选择择23个适宜稀释度，分别在制个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培养基营养琼脂培养基(可放可放置在置在4610C水浴锅内保温水浴锅内保温)注入平皿注入平皿15ml20mL，混合均匀，混合均匀.同时将同时将营养琼脂培养基倾入

4、加有营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。白对照。 （6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（）等琼脂凝固后，翻转平板，置（361）0C恒温箱内培养恒温箱内培养（482）h取出，计算平板内菌落数目取出，计算平板内菌落数目,乘以倍数，即得每乘以倍数，即得每g（每（每mL）样品所含菌落总数。样品所含菌落总数。 第2页/共20页第三页，共20页。3、菌落计算方法、菌落计算方法（1）菌落计数方法）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求

5、出同稀释度的查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。各平板平均菌落总数。（2）菌落计数的报告）菌落计数的报告平板菌落数的选择平板菌落数的选择 选取菌落数在选取菌落数在30300之间的平板作为菌落总数测定标准。之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个一个稀释度使用两个(lin )平板，应采用两个平板，应采用两个(lin )平平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半

6、，而其余的一半中菌落分布又很若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平皿内如以代表全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每条可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。链作为一个菌落计。 第3页/共20页第四页，共20页。稀释度的选择稀释度的选择 应选择平均菌落数在应选择平均菌落数在3030300300之间的稀释度，乘以稀释倍数之间的稀释度，乘以稀释

7、倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在3030300300之间，之间，则视两者之比如何来决定则视两者之比如何来决定(judng)(judng)。若其比值小于或等于。若其比值小于或等于2 2，应报告其平均数；若大于应报告其平均数；若大于2 2则报告其中较小的数字。则报告其中较小的数字。 若所有稀释度平均菌落数均大于若所有稀释度平均菌落数均大于300300，则应按稀释度最高的，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均小于若所有稀释度的平均菌落数均小于3030，则应按稀释度最低，则应按

8、稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1 1乘以最低稀释倍数乘以最低稀释倍数报告之。报告之。第4页/共20页第五页，共20页。 若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。菌落数的报告 菌落数在100以内时，按其实有数报告;大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入(s sh w r)方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。第5页/共20页第六页，共20页。

9、第6页/共20页第七页，共20页。第7页/共20页第八页，共20页。第8页/共20页第九页，共20页。第9页/共20页第十页，共20页。第10页/共20页第十一页，共20页。第11页/共20页第十二页，共20页。第12页/共20页第十三页，共20页。第13页/共20页第十四页，共20页。第14页/共20页第十五页，共20页。第15页/共20页第十六页，共20页。第16页/共20页第十七页，共20页。菌落总数的测定菌落总数的测定 平板菌落计数法平板菌落计数法 菌落总数记录菌落总数记录(jl)(jl)报告报告产品名称生产车间班次生产日期抽样日期检验日期细菌总数检验依据 培养基接种营养琼脂培养基结果

10、报告数（个/g或ml）AB平均数110-110-210-310-410-5空白备注检验员：日期：复核：日期：第17页/共20页第十八页，共20页。第18页/共20页第十九页，共20页。菌落总数的测定菌落总数的测定 出现的实际工作出现的实际工作(gngzu)(gngzu)问题问题做菌落总数检测时,发现稀释倍数大的比稀释倍数小的平皿上生长的菌落数还多,而且空白对照又没长菌,我找不出啥原因？我做的菌落总数的测定，是把浓缩的复合芽孢杆菌进行10-8、10-9、10-10稀释，在涂布法吸取0.1ml的3个浓度的时候，培养皿中长出来的菌2个10-9长了一大片的菌连在一起，10-8也有一个这样，其他的几乎不长，究竟怎么会事？检测菌落总数时,有些菌落难以区别,有没有什么好的试剂,能增加菌落的可见率？我公司做的菌落总数和技术监督局所测的数目存在巨大差别.是这样的:我公司跟客户采购一批的鸡粉，多次检测此批产品菌落总数均在5000左右，超过我司的内控标准。但客户检测数目与我司不符，于是我司把产品送到当地的技术监督局检测，所得(su d)结论是菌落总数为：205个/克。所以我们老总怀疑我们的工作能力，但问题是在其中一次操作中，我们同时化验两种不同品牌的鸡精，一种不符合要求，一种可以。 第19页/共20页第二十页，共20页。