传代培养及细胞计数

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1、动物细胞工程实验传代培养及细胞计数传代培养及细胞计数实验目的掌握传代培养的一般方法和步骤以及培养过程中的无菌操作技术。熟悉培养细胞的观察方法。学习血球计数板的计数方法。实验原理u细胞在培养皿长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。u传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分皿就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分皿。实验用品u仪器：培养箱（调整至37）、培养皿、超净工作台、倒置相差显微镜。u材料：卵巢癌细胞HO-8910。u试剂：1640培养基（含血清10%）、0.25%胰蛋白酶、7

2、5%消毒酒精。实验步骤实验前将无血清培养基和含血清培养基分装并进行温育（37）。以温度计实际显示温度为准！实验步骤将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。实验步骤用不含血清1640培养基冲洗细胞。实验步骤将无血清培养基吸出，加入0.25胰蛋白酶溶液1ml，使细胞都浸入溶液中。实验步骤消化30-40s后，弃去胰酶，加入含血清1640培养基2ml，终止消化，并充分吹打。吹打后将悬浮起来的细胞转移到15ml离心管中，1000rpm离心5min。实验步骤离心后，弃上清，加含血清1640重悬，混匀，取50ul用于细胞计数。实验步骤血球计数板的计数原理实验步骤根据细胞计数的结果，用含血清的培养基调整细胞浓度

3、到1X105个/ml。分至两个培养皿中，做好标记，继续培养。实验完毕，将培养基瓶口迅速过酒精灯火焰消毒，拧紧后，封口膜密封。拿出超净台，放入冰箱。实验后，请将超净工作台内擦拭干净，酒精喷洒消毒，并将酒精擦干净，打开紫外灯灭菌。用过的离心管和血球计数板须清洗干净。各个实验小组的同学负责将垃圾带走，值日生打扫实验室卫生。实验步骤：9、实验后的整理工作实验报告试述传代培养的步骤和注意事项，并指出哪些是关键步骤。l传代培养时要注意严格的无菌操作，并防止细胞之间的交叉污染。l酶解消化要适度，消化过度会对细胞造成损害，消化不够则难于将细胞解离下来。l传代后第2-3天观察细胞生长情况，了解细胞是否健康生长：健康细胞的形态饱满，折光性好。l掌握好代传代时机：健康生长的细胞生长致密，即将铺满瓶底时，即可传代。思考与讨论细胞传代培养的目的是什么？判断细胞健康的标准是什么？