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1、2022-4-812022-4-82本次课程学习要求掌握：革兰染色原理、方法、结果观察和影响因素。培养基的概念、种类和定义。细菌分离接种方法及意义。细菌培养方法和不同培养基上的生长表现。熟悉：显微镜种类及作用。其他染色方法意义。培养基的组成和制备过程。临床标本检查时培养基的选择。2022-4-83微生物分离鉴定流程2022-4-842022-4-85革兰染色镜下结果2022-4-86返回2022-4-87普通光普通光学显微学显微镜镜2022-4-88临床使用不多临床使用不多2022-4-89悬滴法检查细菌的动力2022-4-810常用NS2022-4-811不染色标本镜下结果观察：不染色标本镜
2、下结果观察：动力（动力（+ +），动力（），动力（- -）观察时观察时注意注意：用普通光学显：用普通光学显微镜微镜高倍镜高倍镜观察，调小显微观察，调小显微镜的光栅。镜的光栅。有动力(+)：可看到细菌自一处移至另一处，有明显的方向性位移。无动力(-)：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无位置的改变。2022-4-8122022-4-8132022-4-814背景着色菌体着色2022-4-815革兰染色镜下结果2022-4-816（1）细菌的涂片制作方法 菌悬菌悬液：液：直接直接涂布涂布固体培养基上细菌固体培养基上细菌：先：先加加NS至载玻片再加菌落（苔）至载玻片再加菌落（苔）涂匀涂匀2022-4-
3、817（2 2）涂片的干燥）涂片的干燥（3 3）涂片的固定）涂片的固定2022-4-8182022-4-819革兰阳性球菌革兰阴性杆菌2022-4-820革革兰兰阴阴性性球球杆杆菌菌2022-4-821革兰阳性菌和阴性菌细胞壁组成不同革兰阳性菌和阴性菌等电点不同革兰阳性菌和阴性菌体内含有的核糖核酸镁盐不同2022-4-8222022-4-8232022-4-8242022-4-8252022-4-826抗酸染色结果2022-4-827结核分枝杆菌金胺结核分枝杆菌金胺O染色片染色片2022-4-8282022-4-829不需要干燥和固定2022-4-8302022-4-8312022-4-832
4、2022-4-8332022-4-8342022-4-8352022-4-8362022-4-837常用指示剂：溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、酚红等底物：各种糖、苷、醇类、氨基酸等溴甲酚紫溴甲酚紫： 酸性酸性 碱性碱性2022-4-838溴麝香草酚蓝溴麝香草酚蓝在酸碱环境中的颜色变化在酸碱环境中的颜色变化 酸性酸性 中间过渡中间过渡 碱性碱性2022-4-839酚红酚红 碱性碱性 酸性酸性2022-4-840甲基红：酸pH4.4红色 碱pH6.2黄色中性红：酸性pH6.8红色，碱性黄色厌氧指示剂： 亚甲蓝和刃天青 （无氧：都是无色， 有氧：亚甲蓝蓝色，刃天青红色）2022-4-841 刃天青刃天青
5、亚甲蓝亚甲蓝2022-4-842双糖铁(KIA)培养基斜面观察：乳糖底层观察：葡萄糖、硫化氢、产气指示剂：多用酚红（酸：黄，碱：红）2022-4-843SS平板平板2022-4-844肠道强选择性培养基：SS琼脂底物：乳糖指示剂：中性红（酸性红色，碱性淡黄色酸性红色，碱性淡黄色）抑制剂：胆盐抑制革兰阳性菌生长；枸橼酸盐和煌绿对大肠埃希菌生长有一定抑制2022-4-845肠道弱选择性培养基：麦康凯琼脂底物：乳糖指示剂：中性红（酸性红色，碱性淡黄色酸性红色，碱性淡黄色）抑制剂：胆盐（抑制革兰阳性菌生长）大肠埃希菌（红色菌落）和福氏志贺菌（淡黄色菌落）在麦康凯（Mac)平板上2022-4-84620
6、22-4-8液体培养基半固体培养基固体培养基不含琼脂含0.3%-0.5%琼脂含1.5%-2.0%琼脂2022-4-8482022-4-849没有没有无菌技术就没有微生物检验的质量可言！无菌技术就没有微生物检验的质量可言！2022-4-8504半固体穿刺接种法5涂布接种法6倾注平板法掌握上述分离接种方法和目的（二）细菌的接种与分离方法2022-4-8511. 平板分区划线法2022-4-8521. 平板“之”字形划线法2022-4-853分区划线培养后结果平板划线的目的：分出单个菌落2022-4-8542. 液体培养基转种方法2022-4-8552. 液体接种法 （目的：鉴定、增菌）3. 固体斜
7、面接种法（目的：双糖铁-观察初步生化反应。保存菌种）4. 半固体穿刺接种法（目的：观察动力、保存菌种）2022-4-856半固体穿刺接种后动力（半固体穿刺接种后动力（+）和动力（）和动力（-）结果）结果 阳性阳性 阴性阴性 空白对照空白对照2022-4-8575. 涂布接种法（目的：药敏试验、菌落计数）将标本经适当稀将标本经适当稀释后，取一定量加释后，取一定量加入已灭菌的平皿内，入已灭菌的平皿内，倾入已溶化并冷却倾入已溶化并冷却至至4545左右的定量左右的定量培养基，混匀，待培养基，混匀，待凝固后倒置、培养。凝固后倒置、培养。根据培养基内的菌根据培养基内的菌落数和稀释倍数，落数和稀释倍数，即可
8、即可计算出标本的计算出标本的细菌数。细菌数。测定牛乳、饮水和测定牛乳、饮水和尿液尿液等标本细菌数（菌落计数）等标本细菌数（菌落计数）2022-4-859大气环境大气环境5%-10%CO210% H10% H2 2 10% 10%CO2 85%N25% O5% O2 2 10% 10%CO2 85%N22022-4-860各种菌落各种菌落2022-4-862菌苔细菌生长现象观察细菌生长现象观察表面superficial growth 沉淀precipitate growth对照contrast混浊turbid growth细菌在半固体中生现象动力动力+ -+ -2022-4-8642022-4-8652022-4-8662022-4-8672022-4-868
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