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1、人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中 NOTCH-1 信号通路的调控作者： 于春泳;魏学忠 ;薛洪利;尹吕林 ;吕胜青 ;杨辉作者机构： 解放军全军神经医学研究所 ,解放军沈阳军区总医院神经外科 ,辽宁 省,沈阳市,110015; 解放军全军神经医学研究所 ,解放军沈阳军区总医院神经外 科,辽宁省,沈阳市,110015; 解放军全军神经医学研究所 ,解放军沈阳军区总医院 神经外科,辽宁省,沈阳市,110015; 解放军第三军医大学新桥医院神经外科 ,重庆 市,400037; 解放军第三军医大学新桥医院神经外科 ,重庆市 ,400037; 解放军第三 军医大学新桥医院神经外科 ,重庆市 ,40003
2、7来源： 中国组织工程研究ISSN ：2095-4344年： 2009卷：013期：010页码： 1853-1858页数：6中图分类： R394.2正文语种： chi关键词： NOTCH-1; 胶质瘤干细胞 ;增殖 ;分化摘要： 背景:研究发现 NOTCH-1 信号通路在神经干细胞或种经前体细胞的自我 更新、增殖及分化中起重要作用 .目的 :探讨 NOTCH-1 信号通路在人脑胶质瘤 干细胞增殖和分化过程中的调控作用 .设计、时间及地点 :开放性实验 ,于 200501/2007 03 在解放军第三军医大学新桥医院完成 .材料:人脑胶质瘤组织、正常 成人脑组织由解放军第三军医大学新桥医院神经外
3、科提供 .U251 胶质瘤细胞株 由解放军第三军医大学新桥医院神经外科吕胜青副教授惠赠 :CHG-5 胶质瘤细 胞株由解放军第三军医大学西南医院病理研究所卞修武教授、姚晓红博士惠赠方法:取人脑胶质瘤组织、正常成人脑组织、U251及CHG-5胶质瘤细胞株，采用免疫磁珠法分选获得 CD133+ 脑胶质瘤干细胞 ,加入 DMEM/F12 无血清培养 基进行增殖培养 ,形成细胞克隆后 ,加入含体积分数为 1 0%胎牛血清的培养液 ,2 h 后行抗 CD133 和抗巢蛋白免疫荧光双标染色 .主要观察指标 :人脑胶质瘤十细胞 的生长和鉴定 ,采用 WST-8 法、免疫组化实验、流式细胞仪、免疫荧光双标实
4、验检测 NOTCH-1 信号通路蛋白的表达 .结果 :在无血清培养基中 ,细胞呈悬浮生 长，培养2448 h可见单个细胞开始分裂生长，形成肿瘤球，将肿瘤球转入含胎牛 血清的培养基后 ,4 h 周边细胞伸出突起并逐渐分化 ,24 h 后肿瘤球迁移出的细胞 增多,形成单细胞层肿瘤球能同时表达干细胞标志物 CDI33和巢蛋白，CD133脑 胶质瘤干细胞核浆比例达 2/3 3/4, 突起少 ,胞浆中线粒体等细胞器较少 ,核糖体 丰富,未见胶质丝等分化结构 ,符合干细胞超微结构特点 .NOTCH-1 蛋白在人脑 胶质瘤组织中的表达明显强于正常成人脑组织 （PV 0.01）,在CDI33+U251及 CH
5、G-5胶质瘤细胞中有很强的表达，在GFAP+和MAP2+U251 及CHG+5胶 质瘤细胞中的表达强弱不等，在MBP+U251及CHG-5胶质瘤细胞中早弱表达 或不表达 .在脑胶质瘤干细胞增殖过程中能检测到较强的NOTCH-1 信号通路关键基因 NOTCH-1,CBF-1,HES-1 mRNA 及 NO 和 TChH-1,HES-1 蛋白表达;而 在细胞分化时 NOTCH-1 信号通路关键基因 NOTCH-1,CBF-1,HES-1 mRNA 和HES-1蛋白表达逐渐减弱.结论:NOTCH-1信号通路的关键蛋白分子 NOTCH-1 在人脑胶质瘤组织和胶质瘤细胞株中均有表达 ,而在正常成人脑组织 中仅微弱表达 .NOTCH-1 信号通路关键基因 NOTCH-1 和 HES-1 的表达强弱 可能参与了胶质瘤干细胞增殖和分化的调控 .
人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中NOTCH-1信号通路的调控
