感染性疾病与感染免疫检测

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1、第二十二章感染性疾病与感染免疫检测感染是病原体以某种传播形式从传染源传播到易感者，并在宿主体内生长繁殖、释放毒素或导致机体内微生态平衡失调的病理生理过程。大多数病原体是由外界侵入的，受病原体侵袭力、致病力及宿主免疫状态等多种因素的影响，其破坏人体内的微生态平衡后产生各种不同的感染谱，出现感染性疾病。感染性疾病的早期诊断临床上最为常用的是病原体抗原检测和宿主血清抗体检测。IgM类抗体出现早，消失快，常作为感染的早期诊断指标。IgG类抗体出现晚，维持时间长，是流行病学调查的重要根据。第一节细菌感染性疾病的免疫检测细胞免疫是抗细胞内细菌感染的主要效应机制。体液免疫在抗细胞外细菌感染中发挥主要作用。一

2、、链球菌感染（一）链球菌化脓性链球菌是致病力最强的一种链球菌，能产生多种毒素（链球菌溶血素O和S）、M蛋白、脂磷壁酸、链激酶和透明质酸等致病因子，可引起急性咽炎、呼吸道感染、脓疱疮、皮下软组织感染、心内膜炎、脑膜炎和猩红热等。该细菌感染后可致超敏反应性疾病，如风湿热和急性肾小球肾炎等。链球菌感染最常用的免疫学实验室检查是抗链球菌溶血素“O”（ASO）检测。链球菌溶血素“O”（ASO）是一种具有溶血活性的蛋白质，能溶解人类和一些动物的红细胞，且具有一定的抗原性，能刺激机体产生相应抗体。临床上常采用胶乳凝集试验、免疫散射比浊法检测ASO。免疫功能不全或大量使用肾上腺皮质激素时，ASO水平可不升高。

3、（二）猪链球菌猪链球菌感染的主要临床表现包括：普通型表现：急起高热、畏寒、头痛、头晕、腹痛、腹泻、乏力、不适；中毒性休克综合征（TSS）表现：除上述表现外，出现菌血症、败血症、DIC指征，包括皮肤瘀斑、出血，血压下降，脉压缩小，继而肝、肾功能不全，呼吸窘迫综合征（ARDS），软组织坏死；脑膜炎表现：除普通型表现外，有恶心、剧吐、颈项强直、烦躁、昏迷，脑膜刺激征。猪链球菌的实验室检查有细菌培养、鉴定和免疫学检测等方法。分子诊断技术是鉴定分型诊断方法，常用于猪链球菌的快速诊断以及流行病学调查。免疫学技术主要应用患者血清学鉴定。二、伤寒沙门菌感染沙门菌可致多种感染，轻者为自愈性胃肠炎，重者可引起致死

4、性伤寒。伤寒和副伤寒A、B沙门菌引起胃肠炎、菌血症和肠热症等。伤寒沙门菌感染的实验室诊断主要依赖于免疫学检测方法。1.肥达反应为血清凝集试验。产生凝集时抗体效价1：80为阳性，或双份血清效价呈4倍以上增长。2.ELISA（1）以伤寒沙门菌脂多糖（内毒素的主要成分）为抗原，用间接ELISA法检测伤寒患者血清中特异性IgM抗体，该方法有助于伤寒的早期诊断。（2）以高纯度的伤寒沙门菌Vi抗原包被反应板，采用ELISA法测定患者血清中的Vi抗体，有助于检出伤寒带菌者及慢性带菌者。三、结核分枝杆菌感染结核分枝杆菌（TB）进入人体后，可以诱导机体产生抗感染的细胞免疫，也能产生抗结核分枝杆菌的抗体反应。细胞

5、免疫与体液免疫在结核感染时可发生分离现象，即活动型细胞免疫功能低下，抗体效价升高。在恢复期或稳定期，细胞免疫功能增强，抗体效价下降。抗结核杆菌抗体无保护作用。细胞免疫在抗感染免疫中起重要作用，即致敏细胞与抗原相遇，释放淋巴因子（主要是IFN-），作用于巨噬细胞。结核分枝杆菌感染的免疫学方法有：1.结核菌素试验 包括针对旧结核菌素（old tuberculin，OT）与结核菌素纯蛋白衍生物（purified protein derivative，PPD）两种菌体蛋白。2.分枝杆菌抗体检测 以分枝杆菌外膜抗原为已知抗原，检测待测血清中的分枝杆菌抗体。可采用胶体金方法进行。其他分枝杆菌感染、麻风病也

6、可呈阳性。3.全血干扰素测定法 当全血与PPD和对照抗原（植物血凝素）共同孵育后，致敏的淋巴细胞可分泌IFN-，通过检测IFN-的含量来鉴定菌种。本试验所得结果与结核菌素试验相当，且具有受BCU接种史影响小、又能与非结核分枝杆菌进行区分的优点，同时还可避免结核菌素试验在操作上与结果判断上存在的多种主观或人为因素的影响。第二节真菌感染性疾病的免疫检验浅部真菌主要侵犯机体皮肤、毛发和指（趾）甲，引起浅部真菌病。深部真菌是指侵犯表皮以外组织器官即皮肤深层和内脏如肺、脑、消化道等的病原真菌和条件致病真菌。一、深部真菌感染（一）念珠菌感染 念珠菌又称假丝酵母菌，是最常见和主要的深部真菌。其中以白念珠菌最

7、常见，临床标本中约占80%。深部念珠菌病常继发于慢性消耗性疾病、严重营养不良、免疫功能抑制宿主或较长时间使用广谱抗生素者等，可发生于消化道、呼吸道、心、肾、脑、肝等处。菌血症中念珠菌的比例近年来也明显升高。（二）隐球菌感染 隐球菌属中的主要致病菌为新型隐球菌。新型隐球菌的感染一般为外源性，但也可为内源性。新型隐球菌是条件致病菌，大多由呼吸道进入，在肺部引起轻度炎症或隐性感染，也可由破损皮肤或肠道传入。当机体免疫功能下降时可向全身播散。新型隐球菌虽为全身性感染，但以中枢神经系统感染、肺部感染最为多见，而皮肤、骨骼或其他内脏的损害则较少见。（三）曲霉感染 曲霉可在身体许多部位引起病变，如皮肤、耳、

8、鼻腔、眼眶、心脏、脑、肾脏、呼吸道和消化道等，其中以肺部病变最为常见，主要包括过敏性肺曲霉病、侵袭性肺曲霉病等。真菌感染的免疫学检测 临床上多数深部真菌感染缺乏特异性症状和体征，而真菌镜检和培养、病理检查等检查手段因取材困难、耗时、阳性率低等而难以满足临床需要。免疫血清学方法具有简便、快速、敏感性和特异性相对较高的优点，为临床提供了更多信息。二、类真菌感染卡氏肺孢菌，又称卡氏肺孢子虫，常见于：早产婴儿和新生儿；血液系统恶性肿瘤，如白血病、淋巴瘤；使用免疫抑制剂的器官移植受者；艾滋病患者；其他原因引起的免疫功能极度低下者。目前病原诊断主要依靠形态学检查，呼吸道分泌物或肺活检组织切片染色见肺泡内泡

9、沫状嗜伊红物质中富含本病原体。支气管灌洗术和支气管肺活检时本病原体发现率可达90%。第三节病毒感染性疾病的免疫检测病毒具有较强的免疫原性，能诱导机体产生免疫应答，有助于病毒的清除并预防再次感染。机体在感染病毒或接种病毒疫苗后，能产生对病毒多种抗原成分的各类特异性抗体。细胞免疫在抗病毒感染中发挥着主要的作用，特别是细胞毒T淋巴细胞（CTL）和相关的细胞因子。特异性抗病毒抗体发挥免疫清除的作用，可通过：中和作用是机体灭活游离病毒的主要方式。促进吞噬。激活补体。通过ADCC作用或通过激活补体，使靶细胞溶解。一、流感病毒感染（一）流感病毒1.病毒的抗原检测：常采用免疫荧光或酶标记技术，以标记抗体检测鼻

10、咽分泌物中的流感病毒抗原。该方法具有快速和灵敏度高的优点，有助于早期诊断。阳性结果具有诊断意义，但阴性不能完全排除。2.病毒的抗体检测血凝抑制试验或补体结合试验可以检测急性期和恢复期患者血清总抗体效价，效价4倍升高有助于回顾性诊断和流行病学调查，但不能用于早期诊断。时间分辨免疫荧光技术检测流感病毒抗原。该方法具有敏感性高、特异性强、临床符合率高等特点，一般阳性率可达60%80%。（二）禽流感病毒A型流感病毒（AIV）是一种可引起禽类从呼吸系统疾病到严重的全身性败血症等多种症状的综合病症的病毒，即禽流行性感冒（AI）简称禽流感。AIV感染的免疫学诊断主要包括对AIV特异性IgM和IgG抗体的检测

11、。检测方法包括：禽流感血凝抑制试验、神经氨酸抑制试验、琼脂免疫扩散试验、ELISA法及抗体斑点-ELISA（Dot-ELISA）法等。二、轮状病毒感染人轮状病毒（HRV）是引起婴幼儿胃肠炎和腹泻的主要病毒病原体，也是能引起较大儿童及成人腹泻的主要病原体。1.抗原检测 用ELISA或者免疫酶斑点试验从粪便标本中检测RV抗原，如果结果阳性则可诊断为RV感染。如用单克隆抗RV抗体检测，灵敏度可大大提高，可用于患者诊断和疫情诊断。2.抗体检测 可采用ELISA法检测。感染5天后患者血清中即可测出IgM抗体水平的升高，可用于早期诊断。IgG抗体的检测常采用发病早期和恢复期双份血清进行，如有4倍以上的增长

12、则有诊断意义。三、肝炎病毒感染（一）甲型肝炎病毒感染常采用ELISA和化学发光技术。HAV IgM是感染的特异性标志，有助于区分现症感染和既往感染。HAV-IgM在急性感染时出现较早（发病后14周），上升快，高峰效价高，持续时间短（常于36个月后转阴性），是急性HAV感染或者复发的可靠指标。HAV-IgG一般于感染后4周出现，24周达高峰，可维持多年，甚至终生。（二）乙型肝炎病毒感染HBsAg 抗-HBsHBcAg 抗-HBc HBeAg 抗-HBe 小三阳大三阳1.乙型肝炎表面抗原 血清HBsAg的检测可采用固相放射免疫法、ELISA、反向间接血凝试验等方法，是乙型肝炎患者早期诊断的重要指标

13、。目前可以采用化学发光法对血清中的HBsAg进行定量检测，这对肝炎患者动态疗效观察很有价值。（1）HBsAg为乙肝患者血清中首先出现的病毒标志物，可作为乙肝的早期诊断和普查。在急性肝炎潜伏期即可出现阳性，先于临床症状及肝功能试验异常17周。（2）HBsAg阴性不能完全排除乙型肝炎。（3）同时出现HBsAg和抗-HBs，可能是不同亚型重复感染，即原先存在的抗-HBs不能对另一型HBsAg起中和作用。（4）无论急性、慢性肝炎或HBsAg携带者，只要在血中和其他体液中有Dane颗粒，且有密切接触就有传染的可能。如果仅表现为HBsAg阳性者，传染性较弱。2.乙型肝炎病毒表面抗体抗-HBs是一种保护性抗

14、体，是机体感染或接种乙肝疫苗的标志。目前常用的检测方法是固相放射免疫法和ELISA法。（1）抗-HBs阳性提示急性感染后的康复。在发病后抗-HBs转为阳性或者效价显著升高，亦具有诊断乙型肝炎的价值。临床上一向认为抗-HBs是一种免疫保护性抗体，但是如伴有高效价抗-HBs者，不能排除肝脏有持续性HBV感染的可能。（2）在接受抗-HBs阳性血液的受血者中，可出现短暂性的抗-HBs阳性。（3）在接受HBV疫苗接种后，血中可出现抗-HBs阳性。（4）抗-HBs与HBsAg同时阳性可见于急性重型肝炎或慢性活动性肝炎患者，此类患者为免疫功能低下或不同亚型感染，如同时抗-HBc阳性则应注意预后及发展。（5）

15、HBsAg含量消失同时伴抗-HBs的出现，是目前临床上慢性乙型肝炎治疗的最终目标。3.乙型肝炎病毒e抗原（1）HBeAg阳性是乙肝传染性的标志，在急性乙型肝炎早期常有HBeAg的检出。（2）乙型肝炎感染早期，HBeAg与HBsAg同时阳性可能性较大；HBeAg阳性尚和HBV DNA复制、肝脏损害程度相关。HBeAg阳性标志着患者有较强的传染性。4.乙型肝炎病毒e抗体 抗-HBe多出现于急性肝炎恢复期的患者中，比抗-HBs转阳要早，常在HBsAg即将消失或已经消失时检出，存在于乙肝恢复期及痊愈的患者血清中，也可出现于慢性肝炎、肝硬化或无症状的HBsAg携带者，并可长期存在。乙型肝炎病毒e抗原的血

16、清学转换，即HBeAg含量消失同时伴抗-HBe的出现，是目前临床上慢性乙型肝炎治疗的近期目标。5.乙型肝炎病毒核心抗原HBcAg能反映血清中Dane颗粒的存在及肝内HBV的复制，并可与其他的HBV血清标志物起互相配合和补充的作用。（1）HBcAg是乙型肝炎病毒存在的直接标志，HBcAg与HBV复制呈正相关，可反映HBV的活动性及复制程度。（2）有助于乙肝病情、疗效和预后的判断。6.乙型肝炎病毒核心抗体-IgM（1）急性乙肝的诊断：抗-HBe-IgM是早期HBV感染的特异性血清学标志。初次感染早期即上升，且稳定表达。（2）预后判断：抗-HBc-IgM效价降低常提示预后较好，迟迟不降至正常范围者，

17、提示有转化为慢性肝炎的可能。（3）有助于区分慢性活动性或非活动性肝炎：慢性活动性肝炎时，抗-HBc-IgM常呈阳性，但一般效价较低。在HBV活动性复制时，可明显升高，以此可作为急性病毒复制和机体免疫应答的标志。（4）急性重型乙型肝炎诊断：此时肝细胞大量坏死，可能影响HBsAg生成，血清中HBsAg浓度较低，HBsAg检测呈阴性。有时抗HBs以及抗HBe也可呈阴性，但抗HBc-IgM对HBsAg阴性的急性重型肝炎有早期诊断价值。7.乙型肝炎病毒核心抗体-IgGHBcAb-IgG出现较早，不是保护性抗体，检测HBcAb-IgG有流行病学调查意义。8.乙型肝炎病毒前S1抗原乙型肝炎病毒（HBV）外膜

18、蛋白包括S、前S2和前S1三种成分。前S1蛋白在病毒侵入肝细胞过程中发挥作用。含有前S1的蛋白主要存在于Dane颗粒和管型颗粒上。前S1蛋白在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应等方面有着十分重要的意义。（1）pre-S1仅在HBV-DNA阳性血清中检出，并随HBeAg消失而消失，其可作为病毒清除与病毒转阴的指标。（2）pre-S1阳性可反映病毒的复制和传染性。且pre-S1阳性常提示急性乙型肝炎向慢性转变。阴转愈早，疗程愈短，预后也愈好。9.乙型肝炎病毒前S2抗原pre-S2抗原上具有一个高免疫性的抗原决定簇和多聚蛋白受体（PHSA-Re），它与HBV的感染和复制有密切的关系，并对临床

19、早期诊断、了解预后及制备乙肝高效疫苗有重要意义。（1）在急性乙型肝炎时，pre-S2蛋白的出现同HBeAg一样可作为HBV复制标志之一。在慢性肝炎中，pre-S2蛋白的出现提示慢性肝炎有活动。pre-S2的逐步下降，提示HBeAg即将消失以及抗-HBe的产生。（2）Pre-S2的长期存在，提示患者易转慢性化，pre-S2蛋白的检出与HBV-DNA活动呈正相关。但与疾病的严重程度无关。（三）丙型肝炎病毒感染特异性抗体HCV-IgG和HCV-IgM的免疫学检测是临床常用的诊断方法。抗HCV抗体不是中和抗体，没有保护性，但它却是HCV感染的标志性物质。HCV-IgM阳性可作为HCV活动性复制的血清学

20、标志，且常与慢性丙肝患者的急性发作有关。目前认为HCV-IgM有助于临床对治疗反应性的判断。一次阴性并不能否定HCV的诊断。HCV ELISA阳性反应者，特别是那些不具明显危险因素者，需要确认试验来排除假阳性反应。（四）丁型肝炎病毒感染丁型肝炎是由丁型肝炎病毒（HDV）引起的急、慢性肝病。HDV是一种缺陷病毒，只有在HBV已存在于肝内或与HBV同时侵入肝内才可能造成感染。HDV与HBV的同步感染可引起典型的急性肝炎，部分病例可发生急性重型肝炎。在已有慢性HBV感染的基础上又发生HGV感染，称为重叠感染。重叠感染可引起HBV慢性携带者的急性肝炎症状，甚至引起急性重型肝炎。HDV重叠感染也可导致患

21、者肝炎的慢性化。HDV感染的实验室检查包括免疫学及分子生物学检测。目前免疫学检查主要针对HDVAg、抗HDV总抗体、HDV IgG、HDV IgM。1.抗HDV-IgM的检测：常用捕获法ELISA。2.抗HDV-IgG的检测：常采用竞争抑制法。（五）戊型肝炎病毒感染戊型肝炎是一种由戊型肝炎病毒（HEV）引起的经胃肠传播的肝脏疾病。戊型肝炎的流行绝大多数是因水源污染所致，特别是因暴雨的冲刷将粪便冲入河流或饮水井中，导致暴发流行。HEV感染为自限性，一般无慢性化过程，也无慢性HEV携带者HEV感染的实验室免疫学是针对HEV-Ag、HEV-IgG、HEV-IgM的检测。HEV-Ab检测：HEV-Ig

22、M出现和消失均较早，持续时间短，是HEV急性感染的诊断指标。HEV-IgG被发现常与HEV-IgM同时出现，且具有较高的检出率和抗体效价。四、冠状病毒感染1.免疫荧光技术 用于检测血清中的IgM抗体，约在疾病开始后的10天出现阳性结果。该方法也可用于IgG抗体的测定。2.ELISA技术 可用于SARS患者血清中IgM和IgG抗体混合物的测定。感染早期，上述抗体有可能无法测出，检测阳性提示既往的病毒感染。急性期到恢复期的阳转或者是抗体效价的4倍增长，提示有近期感染。第四节先天性感染的免疫检测一、弓形虫感染人类感染弓形虫（TOX）是因食用未煮熟的感染了弓形虫的肉或接触被感染的猫的粪便。1.循环抗原

23、（CAg）检测2.特异性抗体检测 以全虫抗原检测患者血清中抗虫体表膜的抗体，可采用染色试验、直接凝集试验和间接荧光抗体技术。当初次感染弓形虫后，此种抗体很快出现，23个月后达高峰，可持续6个月，然后效价缓慢下降，23年后保持在低效价稳定期，或一生都可检出，当再次感染时抗体又可再次升高。用虫体裂解后的提取物质为抗原，检测针对细胞质成分的抗体，使用的技术有间接血凝试验、ELISA、补体结合试验及其改良方法。以滋养体为抗原，采用间接免疫荧光试验检测特异性抗体，包括弓形虫IgG和IgM。可采用染色试验、直接凝集试验和间接荧光抗体技术、间接血凝试验、ELISA、补体结合试验及其改良方法。TOX IgM主

24、要用于急性感染的诊断，TOX IgG则用于既往感染的诊断。双份血清IgG抗体效价4倍以上增高或单份血清IgG抗体效价1：512，提示近期感染的可能性大。二、风疹病毒感染1.RUV总抗体效价 常采用血凝抑制试验、中和试验或补体结合法来进行。取病初及恢复期双份血清进行比较，抗体效价4倍以上增高有诊断意义。2.RUV IgG检测 几乎可与RUV IgM同时出现，并持续升高，持续时间可长达数十年，甚至终身。RUV IgG的测定尚可帮助了解人群风疹隐性感染水平及观察疫苗接种的效果。3.RUV IgM检测 常采用ELISA方法。婴儿出生时如有特异高效价IgM抗体，可确诊为先天性风疹。RUV IgM阳性常提

25、示有近期感染，对早期诊断RUV感染以及决定患风疹孕妇是否需要终止妊娠有临床指导意义。三、巨细胞病毒感染1.HCMV抗原检测早期抗原免疫荧光检查（DEAFF）：通过测定DNA合成前产生的早期抗原（EA）来确定HCMV的存在。HCMV抗原血症诊断：可帮助早期诊断免疫抑制或免疫缺陷患者的活动性HCMV感染。该方法直接定性或定量检测外周血白细胞中HCMV抗原的表达，一般在活动性感染前1周即出现阳性。2.HCMV抗体检测通过检测血清中特异性IgG和IgM抗体，诊断HCMV的感染。HCMV IgM阳性提示有活动性感染。常用的检测方法包括：补体结合试验、间接血凝试验、免疫荧光试验、免疫印迹试验、ELISA及

26、放射性免疫试验等。四、单纯疱疹病毒感染单纯疱疹病毒感染是由单纯疱疹病毒（HSV）所致。HSV可分为HsV-1和HSV-2两个亚型。1型主要引起生殖器以外的皮肤、黏膜（如口腔黏膜）和器官（如脑）的感染。2型主要引起生殖器部位皮肤黏膜的感染。1.HSV抗原检测 采用HSV特异性单克隆抗体，以免疫荧光或ELISA方法直接检测患者组织或分泌物中的HSV抗原。2.HSV抗体检测 是临床上用来检测HSV感染的一种最常见手段。主要采用间接免疫荧光法和ELISA法检测特异性HSV IgM和IgG抗体。第五节寄生虫感染的免疫检测一、疟原虫感染1.抗原检测2.抗体检测 间接荧光抗体试验：是目前国内外应用最为广泛的

27、一种检测方法。一般认为受检测血清阳性在1：20以上才有意义。间接红细胞凝集试验：这种方法测定的抗体只有属特异性，因此一般多采用诺氏疟原虫作为抗原。血清效价大于1：16时具诊断意义。ELISA法：国内包被酶标板的抗原多为恶性疟原虫或食蟹疟原虫的粗提物，重复性有待提高。斑点免疫结合试验：包被抗原为恶性疟原虫可溶性抗原。二、血吸虫感染1.环卵沉淀反应（COPT）是一种抗原-抗体反应。当虫卵内成熟毛蚴分泌物与人血清内相应抗体结合后，在虫卵周围会形成泡状、指状或条状具有明显折光性的特异性沉淀物，即为阳性。2.间接红细胞凝集试验（IHA）3.乳胶凝集试验（LA）4.ELISA5.酶联免疫印迹技术三、丝虫感染ELISA法检测丝虫抗体。以微丝蚴作为固定抗原，检测待测血清中的特异性抗体。四、华支睾吸虫感染Dot-ELISA法检测的特异性抗体。【习题】提示乙肝病毒正处在复制阶段的抗体是A.抗-HBsB.抗-HBeC.抗-HBC IgMD.抗-HBC IgGE.抗-HDV 正确答案C答案解析提示乙肝病毒正处在复制阶段的抗体是抗-HBC IgM。