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1、实验九甲醛滴定法测定氨基酸一、目的掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理 和操作要点。二、原理 氨基酸是两性电解质，在水溶液中 有如下平衡：H3N+ R- COO- H2N R- C00 +H+NHL是務酸，完全解离时pH为1112或更 高，若用碱滴定所释放的H+来测量氨基酸， 一般指示剂变色域小于10 5很难准确指示终点 常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生 成疑甲基化合物，使上述平衡右移，促使NH彳释 放H +，使溶液的酸度增加，滴定终点移至酚瞅的 变色域内(PH9.0左右)。因此，可用酚猷作指 示剂,用标准氢氧化钠溶液滴定。R-CH(COO -)-NH 3R-CH(COO-)-NH 2+
2、H +昨中和R-CH(COO -)-NH “RCH(COO)-NHCH 2OH hchoR-CH(COO )-N(CH 2OH)2 如样 品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算 出氨基氮的含量(脯氨酸与甲醛作用生成 不稳定的化合物?使滴定mL数偏低。酪 氨酸的滴定mL数偏高）。如样品是多种氨基 酸的混合物，如蛋白水解液，则滴定结果不能作 为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来 测定蛋白质的水解程度。随水解程度的增加滴定 值也增加，滴定值不再增加时，表示水解作用已 完全。三、器材药25 mL锥形瓶；3mL微量滴定管；吸管；0.1 mol/ L标准甘氨酸溶液300 mL准确称取 750 m
3、g甘氨酸，溶解后定容至100 mL ;0.1 mO1/L标准氢氧化钠溶液500 mL ;（标准氢氧化钠溶液应在使用前标定，并在 密闭 瓶中保存。不可使用隔日贮在微量滴定管中的剩 余氢氧化钠。）酚駄指示剂20mL0.5%酚瞅的50%乙醇溶 a中性甲醛溶液400mL在50 mL 3637%分析纯甲醛溶液中加入1 mL0.1 %酚駄 乙醇 水溶液，用0.1 mol / L的氢氧化钠溶液滴定到 微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂 在临用前配 制。如已放置一段时间，则使用 前需重新中和。四、操作1. 取3个25 mL的锥形瓶，编号。向第1、 2号瓶内各加入2mL0.1 mol / L的标 准甘氨酸 溶液和
4、5 mL水，混匀。向3号瓶 内加入7mL水。然后向3个瓶中各加入5滴酚駄指示剂，混匀 后各加2mL甲醛溶液，再混匀、分别用0.1 mol/ L标准氢氧化钠 溶液滴定至溶液显微红 色重复以上实验2次，记录每次每瓶消耗 标准 氢氧化钠溶液的mL数。取平均值，计算甘氨酸 氨基氮的回收率。甘氨酸氨基氮回收率 =丈入理得量X 100公式中实际测得量为滴定第1和2号瓶 耗 用的标准氢氧化钠溶液mL数的平均值与3号瓶 耗用的标准氢氧化钠溶液mL数之差 乘以标准氢 氧化钠的摩尔浓度，再乘以14.008。2mL乘以标准甘氨酸的摩尔浓度再乘 14.008。即为加入理论量的mg数。2. 取未知浓度的甘氨酸溶液2mL,依 上述 方法进行测定，平行做几份，取平均值。计算每 mL甘氨酸溶液中含有氨基氮的mg数。氨基氮(mg/mL)= (a-m企_Naow*逊式中：A为滴定待测液耗用标准氢氧化 钠溶 液的平均mL数。B为滴定对照液（3号瓶）耗用标准氢氧化钠 溶液的平均mL数。mo“LNaOH为标准氢氧化钠 溶液的真实摩尔浓度。思考题选用酚駄指示剂，为什么滴定的是氨基？注意事项本实验为定量实验，甘氨酸和氢氧化钠的浓 度要严格标定，加量要准确，全部操作要按分析 化学要求进行。
实验九甲醛滴定法测定氨基酸
