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1、文档供参考，可复制、编制，期待您的好评与关注！ 血清胱抑素C测定的临床意义及方法学进展在肾小球滤过功能试验中，血清肌酐、尿素及内生肌酐清除率是最常用的指标。由于以上指标尚存诸多不足，故人们一直在寻找新的反映肾小球滤过率变化的指标。胱抑素C是一种低分子量蛋白质，是半胱氨酸蛋白酶抑制物超家族的成员之一，可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。循环中的胱抑素C仅经肾小球滤过而被清除，是一种反映肾小球滤过率变化的理想的内源性标志物。血清胱抑素C浓度在作为肾功能试验时优于血清肌酐浓度。至于胱抑素C测定的方法学，已有快速、简便且可自动化的“颗粒加强免疫比浊法”的最新报道，使血清胱抑素C测定的广泛临床应用成为
2、可能。胱抑素C（Cystatin c）由Grubb等首先报道其血清浓度与GFR密切相关，可作为肾小球滤过功能指标1。近年来有关胱抑素C测定的临床应用及方法报道日渐增多，本文就胱抑素C的结构与功能，作为反映肾小球滤过功能的内源性标志物及方法学进展作一综述。1 胱抑素C的结构与功能胱抑素C，以前也被称为-微量蛋白及-后球蛋白，是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13KDa,由120个氨基酸残基组成，是一种分泌性蛋白质。细胞先合成一个带信号肽的前体蛋白，编码胱抑素C的基因位于人类第20号染色体，大约为4.3Kb，包含3个外显子，基因上游45-50核苷酸处为“TATA盒样”序列（ATAAAA）。
3、胱抑素C基因5-侧翼区GC含量较高，转录起始位点上游400bp序列的G+C70%，富含GC的“岛”也包括外显子1及内含子1、5侧的一部分，整个富含GC“岛”约900bp，G+C含量为73%。此区域CpG/GpC比值接近于1，因此此区CpG是非甲基化的。在胱抑素C基因5侧翼1Kb序列中发现了2个“GC盒”（GGGCGG），此区也发现了增强子核心样序列（GTGGAAGG）。由以上可见，胱抑素C基因5侧翼序列与“看家基因”的启动子区具有相同的特性，即缺乏典型的“CAAT盒”、富含GC、有与转录因子Spl结合的“GC盒”。故可将胱抑素C基因看作是“看家基因”（house-keeping gene），即
4、此基因在所有组织恒定持续地转录及表达。Northernx印迹也发现胱抑素C基因在所有的被观察的组织均表达，包括肾、肝、胰、肠、胃、肺及胎盘2。由于胱抑素C是一种分泌性蛋白质，故广泛地存在于各种体液中，如脑脊液、血液、唾液、精浆等。至于胱抑素C的确切生物学功能目前还了解不多，研究发现胱抑素C是半胱氨酸蛋白酶抑制物超家族的成员之一，是目前发现的对组织蛋白酶B抑制作用最强的抑制物，对木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、组织蛋白酶H及L也有抑制作用，故胱抑素C的一个生理学功能可能是调节半胱氨酸蛋白酶的活性。胱抑素C基因突变可导致遗传性胱抑素C淀粉样血管病（HCCAA），可发生脑动脉血管破裂，这是目前发现的直接与
5、胱抑素C相关的临床疾病。2 胱抑素C作为反映肾小球滤过功能的内源性标志物由于胱抑素C基因属“看家基因”，能在几乎所有的有核细胞表达，无组织学特异性，故机体胱抑素C产生率相当恒定。因胱抑素C是一种低分子量蛋白质，可经肾小球自由滤过，在近曲小管被重吸收并降解，肾脏是清除循环中胱抑素C的唯一器官，所以血清胱抑素C浓度主要由GFR决定，由此可见胱抑素C是一种理想的反映GFR变化的内源性标志物。grubb及Simonsen等1首先研究了血中低分子量蛋白质（2-微球蛋白、视黄醇结合蛋白、胱抑素C）浓度与GFR（51Cr-EDTA清除率）的相关性，发现血清胱抑素C、2-微球蛋白及视黄醇结合蛋白浓度的倒数与G
6、FR的相关系数分别为0.75、0.70及0.39，血清肌酐浓度倒数与GFR的相关系数为0.73。可见胱抑素C是低分子量蛋白质中与GFR最相关的内源性标志物，甚至优于血清肌酐。血清2-微球蛋白浓度由于在炎症、肿瘤及免疫疾病时也可升高，故不是理想的GFR内源性标志物，视黄醇结合蛋白的代谢十分复杂，且部分与前白蛋白结合，不能自由经肾小球滤过，故血清视黄醇结合蛋白浓度的倒数与GFR相关性最差，不能作为GFR的内源性标志物。胱抑素C即使在炎症状态下，其产生率也不会改变，血清浓度受年龄、性别、疾病的病情变化的影响较小。Pergande等用99mTc-DTPA清除率作为肾小球滤过功能的“金标准”（1.36m
7、l/s为肾小球滤过功能受损，分析了胱抑素C、2-微球蛋白及肌酐的血清浓度的诊断敏感性，结果发现它们诊断肾功能异常的敏感性分别为88.2%、64.7%及52.93，4。随后Newman报道5血清胱抑素C、肌酐浓度诊断异常GFR的敏感性分别为78.1%及57.1%，各自浓度倒数与GFR（51Cr-EDTA清除率）的相关系数分别为：0.81、0.50。Kyhse andersen6及Filley7的最近临床应用也表明血清胱抑素C浓度与GFR的相关性优于血清肌酐浓度。ROC（Receiver operating Characteristic）作图分析发现，通过改变“分割限”（cutoff limit）
8、使胱抑素C的诊断敏感性下降至70%时，其诊断特异性仍可达75%；而通过改变血清肌酐浓度的“分割限”，使其诊断敏感性下降至50%时，才能获得100%的特异性，使敏感性增加至100%时，其特异性接近于零。各自ROC曲线下面积相差显著（P0.001），说明胱抑素C的诊断准确性明显优于血清肌酐。表1 各种测定方法比较方 法检测限g/LCV%测定时 间参考范围xSD（范围），mg/L分析样品 数RID3001138h1.30.26(0.721.7)46EIA3010 1216h1.10.42(0.632.5)30RIA1.3n.d.1621h0.960.20(0.61.7)100FIA1n.d.lor3
9、hn.d.EIAn.d.n.d.4.5h1.10.1520EIA1.9455h0.750.65(20岁)851.340.95(20岁)189EIA0.195481.5h1.250.22(0.861.7)50EIA0.9392h1.780.26(女)332.140.31(男)33PETIAm1502.03.27min(0.611.21)27PETIA27355min1.25PENIA170356min(0.641.04)303 血清胱抑素C测定的方法学由于血清中胱抑素C浓度较低，故其测定方法需较高的分析灵敏度及特异性。Lofberg等首先用单向免疫扩散法（RID）及酶免疫测定法（EIA）对胱抑素
10、C含量进行测定，按照目前的标准，当时报道的这两种方法不仅费时，而且检测限也差（分别为300、30g/L）。随后，又有较简单且更灵敏的放射、荧光及各种酶免疫测定（RIA、FIA及EIA）的方法报道，以改善胱抑素C测定的可靠性。 1993年Pergande等3报道了一种夹心酶免疫测定方法，其检测限虽然很低（0.9g/L），但测定时间仍较长，无法常规应用，更无法用于急诊测定。以上各种测定方法均属非均相测定方法，很难自动化，因此限制了胱抑素C的广泛临床应用。胶乳免疫测定是一种均相测定方法，在胶乳颗粒上包被抗体，与抗原结合时颗粒发生凝集，此方法很容易自动化。Kabanda等于1994年报道的测定胱抑素C
11、的胶乳颗粒凝集法是一种颗粒计数免疫测定法8。Kyhse andersen等6于同年报道了一种颗粒增强透射免疫比浊法（particle-enhanced turbidimetric immunoassay, PETIA），使胱抑素C测定的时间缩短至5min左右，且可在自动生化分析仪上进行，使胱抑素C测定的常规应用成为可能。随后，Newman等也报道了类似方法9。1997年，Finney等报道了一种能快速自动测定胱抑素C的颗粒增强散射免疫比浊法（particle-enhanced nephelometric immunoassay, PENIA），其测定结果与PETIA法相关性良好10。各种胱抑素
12、C测定方法的比较见表1。从表1可见，单纯就检测灵敏度而言，RID法最差，而EIA、RIA及FIA法1114均优于PETIA及PENIA法。由于RIA法存在放射性污染，FIA法需昂贵的仪器，以及RIA、FIA、EIA法测定时间长，且不能全自动化，无法用于临床大批量标本的测定。PETIA及PENIA法虽然检测灵敏度差些，但仍可达150g/L左右，远远低于健康人血清胱抑素C浓度的下限值，可满足临床需要；这两种测定方法基本上不受血红蛋白、胆红素、类风湿因子、甘油三酯的影响，回收率可达95%109%，批内及批间变异系数均较小（4.5%）；加上这两种方法可全自动化，故在血清胱抑素C测定的常规临床应用中可首
13、选PETIA或PENIA法。各位研究者所报道的血清胱抑素C浓度的参考范围有一定的差异，这一方面是由测定方法不同所致，另一方面与所用胱抑素C标准品的来源不同有关，现应用的胱抑素C标准品有3种类型：从人尿中纯化的胱抑素C；纯化的人类胱抑素C，并用重组胱抑素C定值；重组胱抑素C，并溶于马血清。Pergande等用一种尿蛋白标准品，发现血清胱抑素C浓度存在性别差异，其它研究者利用其它标准品时未发现性别差异。因此，应制定有关标准品制备的统一标准，以便进行方法比较及参考范围的建立。4 小结在肾脏疾病治疗中已涌现出许多新方法，如抗炎药物、肾移植及透析等。在应用这些方法的过程中，肾移植后排斥反应的监测及肾毒性药物肾毒性监测等。均需一种快速、简单且能准确地反映GFR变化的指标15。无论从理论上还是实践中，血清胱抑素C的测定均优于血清肌酐的测定，加上能自动化的检测的PETIA及PENIA方法的建立，已使胱抑素C的广泛临床应用成为可能。在今后的实践中，应注意测定方法的标准化问题；观察血清胱抑素C浓度在不同肾脏疾病状态下的变化规律；应在更大的人群内测定血清胱抑素C浓度，以分析是否存在年龄及性别相关的差异；从而最终确定胱抑素C的敏感性及特异性。3 / 3
血清胱抑素C测定的临床意义及方法学进展
