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1、123456三、实验步骤三、实验步骤( (一一) ) 样品制备样品制备 磨样：将磨样：将1 1克干燥的油菜种子放在研钵中研克干燥的油菜种子放在研钵中研磨成粉状，倒入磨口试管中加入磨成粉状，倒入磨口试管中加入1mLKOH-CH1mLKOH-CH3 3OHOH溶溶液，液，25253030条件下放置条件下放置6 68 8小时（酯化）。小时（酯化）。加入加入1mL1mol/LHCl1mL1mol/LHCl及及1mL1mL石油醚。石油醚。7( (二二) ) 点样点样 在经石腊油处理并晾干的层析纸一端在经石腊油处理并晾干的层析纸一端1.51.5 2cm2cm处用铅笔轻轻划一直线，每隔处用铅笔轻轻划一直线，
2、每隔1.5cm1.5cm用铅笔轻轻点一记号并编号。用铅笔轻轻点一记号并编号。 在层析纸各编号处，用毛细管取样品上清在层析纸各编号处，用毛细管取样品上清液液0.01mL0.01mL，按编号顺序滴入点样处（每个点，按编号顺序滴入点样处（每个点重复点样重复点样2 2 3 3）。）。8( (三三) ) 展开溶剂系统与条件展开溶剂系统与条件 将点好样的层析纸固定，编号端朝下放入将点好样的层析纸固定，编号端朝下放入盛有醋酸溶液的层析缸中，醋酸溶液的多少以盛有醋酸溶液的层析缸中，醋酸溶液的多少以能浸泡层析纸但液面低于点样处为宜。能浸泡层析纸但液面低于点样处为宜。至展层至展层剂上升到距滤纸顶端剂上升到距滤纸顶
3、端2/32/3处为止，取出层析纸，处为止，取出层析纸，吹干。吹干。9( (四四) ) 显色显色 将吹干的层析纸将吹干的层析纸放入醋酸铜溶液中浸泡约放入醋酸铜溶液中浸泡约2020秒，秒，使之生成脂肪酸铜盐。用清水冲洗，再放入使之生成脂肪酸铜盐。用清水冲洗，再放入洁净的瓷盘中，用洁净的瓷盘中，用流水漂洗流水漂洗2020分钟分钟以上。以上。将层析纸小心取出，放置在洁净的吸水纸上，用将层析纸小心取出，放置在洁净的吸水纸上，用电电吹风吹干吹风吹干。 将吹干的层析纸在红氨酸溶液中将吹干的层析纸在红氨酸溶液中一带而过一带而过，层析分离后的脂肪酸立即显出蓝灰色的斑点。层析分离后的脂肪酸立即显出蓝灰色的斑点。1
4、0四四. .结果分析结果分析 根据纸层析色谱上的斑点位置标出根据纸层析色谱上的斑点位置标出5 5种不饱种不饱和脂肪酸。图谱中的顺序由下而上为：芥酸、和脂肪酸。图谱中的顺序由下而上为：芥酸、廿碳烯酸、油酸、亚油酸、亚麻酸。廿碳烯酸、油酸、亚油酸、亚麻酸。五、讨论五、讨论 根据结果比较不同油菜种子中芥酸含量的根据结果比较不同油菜种子中芥酸含量的高低。高低。11亚麻酸亚麻酸亚油酸亚油酸油酸油酸廿碳烯酸廿碳烯酸芥酸芥酸12实验实验04 04 油菜籽中硫代葡萄糖甙总油菜籽中硫代葡萄糖甙总量的快速测定量的快速测定 ( (葡萄糖试纸法葡萄糖试纸法) ) 硫代葡萄糖甙（thioglucoside，简称硫甙）是
5、广泛存在于十字花科植物中的一种含硫化合物，其结构通式如下：13 在植物体内硫代葡萄糖甙葡萄糖水解酶的在植物体内硫代葡萄糖甙葡萄糖水解酶的作用下，会分解产生异硫氰酸酯、噁唑烷硫酮、作用下，会分解产生异硫氰酸酯、噁唑烷硫酮、腈等剧毒物质，是影响油菜籽综合利用的重要腈等剧毒物质，是影响油菜籽综合利用的重要限制因素。限制因素。“双低油菜双低油菜”指的就是指的就是“低芥酸、低芥酸、低硫甙低硫甙”。快速测定油菜籽中硫代葡萄糖甙的。快速测定油菜籽中硫代葡萄糖甙的含量，对于选育、筛选含量，对于选育、筛选“双低双低”油菜具有重要油菜具有重要意义。意义。14一、原理一、原理 十字花科植物种子种含有硫甙和分解硫甙的
6、十字花科植物种子种含有硫甙和分解硫甙的硫甙酶，将油料种子经破碎后，加入适量的水，硫甙酶，将油料种子经破碎后，加入适量的水，硫甙酶便可促使硫甙水解，每分子的硫甙经水解硫甙酶便可促使硫甙水解，每分子的硫甙经水解后产生一分子的葡萄糖，用葡萄糖试纸便可快速后产生一分子的葡萄糖，用葡萄糖试纸便可快速检测水解液中葡萄糖的含量，根据葡萄糖与硫甙检测水解液中葡萄糖的含量，根据葡萄糖与硫甙的定量关系便可知待测样品中硫甙总量的高低。的定量关系便可知待测样品中硫甙总量的高低。15二、材料、仪器设备及试剂二、材料、仪器设备及试剂（一）材料（一）材料 油菜种子（高硫甙、低硫甙品种）油菜种子（高硫甙、低硫甙品种）（二）仪
7、器设备（二）仪器设备 1. 1. 点滴板点滴板 2. 2. 玻棒玻棒 3. 3. 滴管滴管（三）试剂（三）试剂 1. 1. 蒸馏水蒸馏水 2. 2. 葡萄糖试纸葡萄糖试纸16三、实验步骤三、实验步骤 分别取高硫苷、低硫苷油菜种子分别取高硫苷、低硫苷油菜种子20 20 30 0粒放粒放入点滴板中，用滴管各加入入点滴板中，用滴管各加入3 35 5滴蒸馏水，用玻滴蒸馏水，用玻棒捣碎后搅匀，将葡萄糖试纸浸入被测液中，棒捣碎后搅匀，将葡萄糖试纸浸入被测液中，3 3 5min5min后，将试纸取出并与标准色阶进行比较。后，将试纸取出并与标准色阶进行比较。17四、结果分析四、结果分析 记录不同油菜种子中试纸与标准色阶记录不同油菜种子中试纸与标准色阶进行比较的结果。进行比较的结果。五、讨论五、讨论 根据结果，比较不同油菜种子中硫甙根据结果，比较不同油菜种子中硫甙含量的高低。含量的高低。
生化实验03 植物种子中不饱和脂肪酸的分离
