--过程控制酒精含量检测方法的验证报告

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1、验证报告题目：过程控制酒精浓度检测方法验证报告代码：64-0018页码：25/25文件使用类型：该报告制定参与人：项目人员姓名/职位日期签名起草人唐莉、林森茂/检验员审核人钱欣/质量保证部经理批准人李坦/质量总监该报告存放到以下部门办公室：序号部门名称部门办公室房间编号部门负责人1质量保证部0401钱欣会审批准签名表姓名部门/职务签名日期 钱欣质量控制部经理李坦质量总监注：参加会审的人员：1. 海普瑞公司验证委员会的成员；2. 与该验证方案相关部门的主管（班组长）以上成员。目录1.目的42.范围43.参考44.待验证的检测方法45.验证内容65.1.验证使用的试剂和气体65.2.验证使用的器具

2、、仪器及配件75.3.仪器稳定性检查85.4.方法的专属性验证：105.5.方法的检测限和定量限125.6.方法的线性135.7.方法的准确度.155.8.方法的精密度185.9.范围225.10.耐变性226.结论24 1. 目的1.1. 对于新购的Agilent 6890N气相色谱仪配有Agilent 7694E顶空进样器，为了能在新仪器上使用已经验证过的检验方法（验证方案与报告编号为64-0013），参照曾经验证的检验方法在新仪器上重新验证。1.2. 为制订肝素钠过程控制酒精浓度检测方法提供科学依据。2. 范围验证的方法适用于肝素钠生产中间过程酒精浓度的检测，该溶液中约含有0.01%的氯

3、化钠和0.08%的肝素钠。3. 参考3.1. ICH Q2A（生效日期：1994年10月27日）3.2. ICH Q2B（生效日期：1996年11月06日）3.3. Agilent 6890N气相色谱仪说明书（电子文本）3.4. Agilent 7694E顶空进样器说明书（电子文本）3.5. 美国药典现行版3.6. SOP 51-0008 Agilent气相色谱仪标准操作规程3.7. SOP 60-0002 验证管理制度3.8. SOP 62-0014Agilent气相色谱仪安装/运行确认报告4. 待验证的检测方法4.1. 0.4%乙醇-0.2%正丙醇标准溶液的配制用1ml分度吸管精密量取正丙

4、醇0.50ml，置于装有三分之一注射用水的250ml量瓶中，再用1ml单标线吸管精密量取乙醇1.00ml，置于同一量瓶中，用注射用水定容至刻度，摇匀后静置即为标准溶液。4.2. 0.4%样品-0.2%正丙醇溶液的配制用1ml分度吸管精密量取正丙醇0.50ml，置于装有三分之一注射用水的250ml量瓶中，再用1ml的单标线吸管精密量取样品1.00ml，置于同一量瓶中，用注射用水定容至刻度，摇匀后静置即为供试液。4.3. 色谱条件条件内容名称/指标气相色谱仪主机型号Agilent 6890N色谱柱毛细管柱，DB624，30m250m1.4m（Length I.D. Film）检测器氢火焰离子检测器

5、（FID），范围（Range）0载气氦气（99.99%）色谱柱流量1.0 ml/min（恒流）氢气流量40ml/min空气流量450 ml/min尾吹流量45 ml/min分流比5:1进样口温度120炉温恒温，80检测器温度200顶空进样器型号Agilent 7694E样品瓶20ml/个定量环1ml取样量5.0ml样品瓶温度70定量环温度100传输线温度110运行时间10.0min样品瓶平衡时间20.0min样品瓶加压时间0.50min定量环填充时间1.00min定量环平衡时间1.00min进样时间2.00min谱图采集时间10.0min4.4. 检测步骤标准溶液和样品溶液各分别进样2针，记录

6、色谱图；并按照以下公式计算样品中乙醇的浓度。以峰面积计算样品中乙醇的浓度，公式如下：样品中乙醇的浓度（v/v）=（A样乙A标丙）（A标乙A样丙）100%式中： A标丙：标准溶液的正丙醇峰面积的平均值；A标乙：标准溶液的乙醇峰面积的平均值；A样丙：样品溶液的正丙醇峰面积的平均值；A样乙：样品溶液的乙醇峰面积的平均值。5. 验证内容5.1. 验证使用的试剂和气体5.1.1. 方案中使用的试剂为色谱级乙醇、色谱级正丙醇、注射级氯化钠，肝素钠（302）、注射用水为本公司自产。记录试剂名称、规格、生产或分装商以及试剂/气体批号等内容。5.1.2. 方案中使用的气体为氦气、空气、氢气，纯度均要求99.99

7、%以上。执行方案时必须检查这些载气的规格、生产或分装商以及试剂/气体批号等内容并记录。5.1.3. 试剂和载气可接受标准 所有在方案执行中用到的试剂和载气必须符合5.1.1.和5.1.2.项下要求。 所有试剂必须在有效期内。5.1.4. 验证结果试剂/载气名称试剂/载气规格供应商试剂/载气批号乙醇色谱级 2.5LMerck K32295627332正丙醇色谱级Tedia Company.Inc304043注射用水_自产041017041020041021氯化钠注射级中盐集团云梦云虹制药有限公司04090005肝素钠302自产3020068030200700氦气纯度99.999%深圳南华气体工业

8、有限公司空气纯度99.999%深圳南华气体工业有限公司氢气纯度99.999%深圳南华气体工业有限公司结论： 结果符合5.1.1.和5.1.2.项下要求。5.2. 验证使用的器具、仪器及配件5.2.1. 检查位于质量控制部仪器室1的Agilent 6890N7694E气相色谱仪（设备编号：QC-GC-02）的型号、生产厂家、校验日期与校验有效期。5.2.2. 检查与气相色谱仪连接的氦气瓶、空气瓶、氢气瓶上的压力表，记录其规格、生产厂、校验编号、校验日期与校验有效期等。5.2.3. 检查实验中使用的容量瓶、单标线吸管、分度吸管记录其规格、校验编号、校验日期与校验有效期等内容。5.2.4. 记录检查

9、结果。5.2.5. 可接受标准 在验证中使用到的所有仪器必须经过校验，并且在有效期内。 在验证中使用的所有压力表必须经过校验，并且在有效期内。 在验证中使用的所有容量瓶、分度吸管等玻璃量器必须经过校验，并且在有效期内。5.2.6. 验证仪器和器具结果：名称数量仪器/器具规格或型号是否校验校验编号校验有效期气相色谱仪1Agilent 6890N是US104250622006.08空气压力表10-25MPa是P00112004.12空气压力表10-2.5MPa是P00012005.08氦气压力表10-25MPa是P00282005.04氦气压力表10-700KPa是P00332005.01氢气压力

10、表10-28MPa是P00102004.12氢气压力表10-700KPa是P00022005.08量瓶1725ml,50ml,100ml,250ml是QFA2007.02单标线吸管11ml是QOA15-0062007.02分度吸管181ml,5ml,10ml是QSA2007.02顶空进样器1Agilent 7694E是US104250622006.08电子天平1BS210S是QC-SCAL-032004.11结论：以上仪器和器具全部经过校验，并确认合格。符合5.2.5项下可接受标准。5.3. 仪器稳定性检查在方法验证开始之前，先检查基线，以确定仪器的稳定状态。5.3.1. 按SOP 51-00

11、08Angilent气相色谱仪标准操作规程打开气相色谱仪、顶空进样器，按照下表设定好仪器条件条件内容名称/指标气相色谱仪主机型号Agilent 6890N色谱柱毛细管柱，DB624，30m250m1.4m（Length I.D. Film）检测器氢火焰离子检测器（FID），范围（Range）0载气氦气（99.99%）色谱柱流量1.0 ml/min（恒流）氢气流量40ml/min空气流量450 ml/min尾吹流量45 ml/min分流比5:1进样口温度120炉温恒温，80检测器温度200顶空进样器型号Agilent 7694E样品瓶20ml/个定量环1ml取样量5.0ml样品瓶温度70定量环温

12、度100传输线温度110运行时间10.0min样品瓶平衡时间20.0min样品瓶加压时间0.50min定量环填充时间1.00min定量环平衡时间1.00min进样时间2.00min谱图采集时间10.0min5.3.2. 待仪器达到所设定的条件，进入Sample Info，设置Sample Name为“steadybaseline”，根据所需时间确定采集数据时间（约10分钟），打印谱图。5.3.3. 向右下拖动鼠标，使基线放大，判断谱图中的基线波动范围是否超过10pA。5.3.4. 可接受标准基线波动范围不超过10pA。5.3.5. 填写仪器稳定性检查基线记录。检查内容检查结果基线稳定性合格检查

13、时间10分钟响应值显示范围最大值：5.0pA 最小值：-1.0pA谱图名称steady-baseline谱图编号00180000结论：基线波动范围10pA，仪器稳定性合格。5.4. 方法的专属性验证：5.4.1. 空白实验：检查确认注射用水的色谱行为，确认是否会对酒精的检测造成影响。5.4.1.1. 在仪器稳定性检查合格后，进样注射用水1针，监测10分钟。设置Sample Name为“water”，打印谱图。5.4.1.2. 向右下拖动鼠标，使基线放大，判断谱图中注射用水空白基线波动是否超过15pA，并且是否有明显的色谱峰出现。5.4.1.3. 可接受标准 空白基线波动范围不超过15pA。 没

14、有明显的色谱峰。结论：在仪器稳定性检查合格后，进样注射用水1针，监测10分钟。见图00180001。 没有明显的色谱峰，空白基线电信号波动幅度范围15pA。符合可接受标准。5.4.2. 专属性实验：分别对乙醇溶液、正丙醇溶液以及乙醇和正丙醇的混合溶液进样分析，判断乙醇和正丙醇是否互相干扰，方法的专属性是否符合规定。5.4.2.1. 取3个洁净的250ml量瓶，记录量瓶的校验编号；再分别编号1#、2#、3#，作为配制试剂专用。5.4.2.2. 溶液配制：5.4.2.2.1. 0.4%乙醇标准溶液：用1ml单标线吸管移取1.0ml乙醇，注入装有三分之一注射用水的1#250ml量瓶中，用注射用水稀释

15、并定容至刻度，充分混匀备用。5.4.2.2.2. 0.2%正丙醇标准溶液：用1ml分度吸管移取0.50ml正丙醇，注入2#250ml容量瓶中，用注射用水稀释并定容至刻度，充分混匀备用。5.4.2.2.3. 0.4%乙醇-0.2%正丙醇混合标准溶液：用1ml单标线吸管移取1.0ml乙醇，注入3# 250ml量瓶中，再用另一支1ml分度吸管移取0.50ml正丙醇，注入同一个装有三分之一注射用水3#250ml量瓶中，用注射用水稀释并定容至刻度，充分混匀备用5.4.2.3. 进样分析：5.4.2.3.1. 分别向气相色谱仪中进样乙醇标准溶液、正丙醇标准溶液和乙醇-正丙醇混合标准溶液各1针，进行检测。方

16、法和仪器条件见4.3。5.4.2.3.2. 各针的Sample Name分别设置为“ethanol”、“propanol”和“ethanol+propanol”。5.4.2.4. 可接受标准 色谱图中乙醇峰与正丙醇峰的分离度不得小于2.0。 色谱图中乙醇峰与正丙醇峰的理论塔板数均不得小于5000。5.4.2.5. 实验结果见图00180002至00180004和下表：分离物质检测项目乙醇溶液正丙醇溶液乙醇与正丙醇混合溶液保留时间2.8min3.7min分离度14.7理论塔板数4065750681谱图编号001800200180030018004结论：乙醇峰与正丙醇峰的分离度14.72.0；乙醇

17、峰与正丙峰的理论塔板数均大于5000。符合可接受标准。5.5. 方法的检测限和定量限5.5.1. 方法的噪音5.5.1.1. 从5.3项下实验得到的色谱图中，记录基线噪音最高处和最低处所对应的响应值分别为H大、H小，其差值为Np-p，即：Np-p=H大-H小。5.5.1.2. 噪音计算公式：RMS Noise=1/5Np-p。见下表项目结果谱图名称谱图编号基线波动幅度最大处的响应值H大5.0pASteady-baseline00180000基线波动幅度最小处的响应值H小-1.0pANp-p=H大-H小6.0pA噪音RMS Noise=1/5Np-p1.2pA结论：方法的噪音为1.2pA。5.5

18、.2. 检测限和定量限的确定5.5.2.1. 将5.4.2.2.3项下的0.4%乙醇-0.2%正丙醇标准混合溶液稀释成一系列浓度的溶液，进样分析，当被测溶液中乙醇的色谱峰高为基线噪音的3倍时，此溶液的浓度就是乙醇的最小检测浓度，即检测限。5.5.2.2. 当被测溶液中乙醇的色谱峰高为基线噪音的10倍时，此溶液的浓度就是乙醇的最小定量浓度，即定量限。记录实验结果。5.5.2.3. 定量限溶液的配制：精密量取1.00ml 5.4.2.2.3项下 溶液到50ml容量瓶中,用注射用水稀释至刻度，摇匀，得到乙醇浓度为0.008%(V/V) 的溶液。5.5.2.4. 检测限溶液的配制：精密量取6.00ml

19、 5.5.2.3项下溶液到25ml容量瓶中,用注射用水稀释至刻度，摇匀，得到乙醇浓度为0.00192%(V/V)的溶液。结果见下表： 项目结果谱图名称谱图编号检测限峰高3RMS Noise3.1pAjiancexian00180006定量限峰高10RMS Noise12.5pAdingliangxian00180005检测限乙醇的浓度0.002%(V/V)定量限乙醇的浓度0.008%(V/V)结论：检测限乙醇的浓度为0.002%(V/V)；定量限乙醇的浓度为0.008%(V/V)。5.6. 方法的线性配制乙醇浓度为5.4.2.2.1项下0.4%乙醇标准溶液浓度的10%、20%、30%、35%、

20、40%、50%（v/v）的乙醇与正丙醇混合标准溶液，进样分析并建立标准曲线，以确定本方法的线性是否符合相关要求。 5.6.1. 标准溶液的配制：5.6.1.1. 取250ml量瓶6个，分别编号A、B、C、D、E、F；记录量瓶校验编号；一支1ml的分度吸管，乙醇专用；一支1ml的分度吸管，正丙醇专用。5.6.1.2. 按照下表配制系列标准溶液： 编号试剂ABCDEF乙醇（ml）0.100.200.300.350.400.50正丙醇（ml）0.500.500.500.500.500.50注射用水（ml）定容至250定容至250定容至250定容至250定容至250定容至250溶液中乙醇浓度（%）0.

21、040.080.120.140.160.205.6.2. 进样分析：分别向气相色谱仪中进样标准溶液A、B、C、D、E、F各1针，各针的Sample Name分别设置为line-A-10%、line-B-20%、line-C-30%、line-D-35%、line-E-40%、line-F-50%.项下。5.6.3. 记录每个谱图的名称及谱图编号。5.6.4. 计算：5.6.4.1. 计算每次进样后乙醇与正丙醇的峰面积之比，记录结果。5.6.4.2. 以乙醇与正丙醇峰面积之比的值为纵轴，乙醇标准溶液浓度为横轴作图。对数据进行线性回归，作出线性方程，命名为“乙醇浓度检测的线性方程”，计算回归的相关

22、系数。5.6.4.3. 通过计算判断方法的线性是否符合要求。5.6.5. 可接受标准线性回归系数不得低于0.9990。5.6.6. 结果见下表：线性溶液乙醇峰面积正丙醇峰面积乙醇与正丙醇的峰面积比乙醇的配制浓度%谱图编号A-10%144.067631327.187620.108550.0400180007B-20%266.127961241.675290.214330.0800180008C-30%414.801821292.832150.320850.1200180009D-35%487.647611298.945560.375420.1400180010E-40%537.245301252

23、.478030.428950.1600180011F-50%679.080261275.655520.532340.2000180012以乙醇与正丙醇峰面积之比为纵轴，乙醇标准溶液实际配制浓度为横轴作图。由以上实验得：直线斜率： b = =2.6568截距 ： a = =0.0024线性回归系数：r = =1.0000线性方程： y = a + bx = 0.0024 + 2.6568 x结论：线性回归系数大于0.9990。5.7. 方法的准确度.配制乙醇含量为4.2项下“0.4%样品（样品中乙醇含量按30%计）溶液” 的 50%、80%、100%、120%系列溶液和4.1项下“0.4%乙醇标

24、准溶液”，判断方法的准确度。5.7.1. 取250ml量瓶14个，分别编号A1、A2、A3、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3、S、E；100ml量瓶1个，编号F，其中编号S为标准溶液，编号F为0.025g/ml氯化钠溶液，编号E为0.020g/ml肝素钠溶液。5.7.2. 溶液配制：5.7.2.1. 0.025g/ml氯化钠溶液的配制：称取氯化钠2.50g，置100ml容量瓶中，加注射用水溶解并定容至刻度，摇匀即得。5.7.2.2. 0.020g/ml肝素钠溶液的配制：称取肝素钠5.00g，置250ml容量瓶中，加注射用水溶解并定容至刻度，摇匀即得。按照下表配制系列溶液：

25、编号 试剂标准溶液A-50%B-80%C-100%D-120%A1A2A3B1B2B3C1C2C3D1D2D3乙醇ml1.000.150.150.150.240.240.240.300.300.300.360.360.36正丙醇ml0.500.500.500.500.500.500.500.500.500.500.500.500.500.025g/ml氯化钠01.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.001.000.020g/ml肝素钠0101010101010101010101010水定容体积ml250250250250250250250250250

26、2502502502505.7.3. 系统适用性实验5.7.3.1. 进样分析标准溶液5针，记录乙醇峰与正丙醇峰的分离度和理论塔板数并计算乙醇和正丙醇峰面积之比的RSD。5.7.4. 可接受标准 乙醇峰与正丙醇峰的分离度不得小于2.0。 乙醇峰与正丙醇峰的理论塔板数均不得小于5000。 乙醇和正丙醇峰面积之比的RSD不大于5%。5.7.5. 进样分析A1、A2、A3、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3溶液各1针，各针的Sample Name分别设置为STD-1、STD-2、accuracuy-A1-50%、accuracuy-A2-50%、accuracuy-A3-50%以此

27、类推。5.7.6. 记录每针的谱图名称及谱图编号。5.7.7. 计算每张谱图中乙醇与正丙醇的峰面积之比。5.7.8. 将峰面积之比的数据带入（A样乙A标丙）（A标乙A样丙）100%中，计算出A1、A2、A3、B1、B2、B3、C1、C2、C3、D1、D2、D3各点的乙醇浓度。5.7.9. 将计算得到的浓度与实际配制的浓度进行比较，计算回收率；计算公式如下：回收率（%）= 计算得出的乙醇的浓度实际配制的乙醇的浓度100%5.7.10. 记录计算结果5.7.11. 可接受标准 回收率在98%102%之间。 溶液中氯化钠和肝素钠对乙醇峰无影响。5.7.12. 实验结果如下：5.7.12.1. 系统适

28、用性实验：结果见下表：标准溶液编号12345谱图编号0018001300180014001800150018001600180017分离度15.415.415.415.415.4乙醇理论塔板数3947539477394883949339486正丙醇理论塔板数5287852882528905408252889乙醇与正丙醇峰面积之比1.062891.064751.065551.062811.06385RSD（%）0结论：根据实验结果，乙醇峰与正丙醇峰的分离度大于2.0，二者的理论塔板数均大于5000且峰面积之比RSD5%，符合可接受标准。5.7.12.2. 准确度结果见以下表1和表2：表1溶液编号

29、名称谱图编号乙醇峰面积正丙醇峰面积乙醇与正丙醇峰面积比A1-50%accuracy-A1-50%00180018205.206341251.026610.16403A2-50%accuracy-A2-50%00180019199.998441264.574710.15815A3-50%accuracy-A3-50%00180020196.826661225.905880.16056B1-80%accuracy-B1-80%00180021326.176821269.378170.25696B2-80%accuracy-B2-80%00180022314.716191231.377560.255

30、58B3-80%accuracy-B3-80%00180023311.706241221.665160.25515C1-100%accuracy-C1-100%00180024399.294401251.857180.31896C2-100%accuracy-C2-100%00180025397.882481240.535280.32073C3-100%accuracy-C3-100%00180026392.655941215.580570.32302D1-120%accuracy-D1-120%00180027484.078701236.140750.39160D2-120%accuracy

31、-D2-120%00180028475.929051216.597780.39120D3-120%accuracy-D3-120%00180029477.064791242.888310.38384表2溶液编号计算得到乙醇浓度C%配制乙醇溶液浓度C0%回收率%（CC0100%）平均回收率%A1-50%15.4215.00102.78101A2-50%14.8615.0099.10A3-50%15.0915.00100.60B1-80%24.1524.00100.63100B2-80%24.0224.00100.09B3-80%23.9824.0099.92C1-100%29.9830.0099

32、.93101C2-100%30.1530.00100.48C3-100%30.3630.00101.20D1-120%36.8136.00102.24102D2-120%36.7736.00102.13D3-120%36.0836.00100.21结论：回收率在98%102%之间。溶液中氯化钠和肝素钠对乙醇峰无影响。符合可接受标准。5.8. 方法的精密度5.8.1. 由同一位检验员根据5.7项下的检测结果计算各组溶液的乙醇浓度的平均值、标准偏差S、相对标准偏差（RSD），从而确定方法的精密度。记录计算结果。5.8.2. 计算公式如下：每个浓度的平均值： =（C1+C2+C3）/3；每个浓度的标

33、准偏差S = 每个浓度的相对标准偏差RSD=（S/）100%5.8.3. 可接受标准每个浓度项下相对标准偏差RSD不大于2%。5.8.4. 结果见下表溶液编号公式计算得到的乙醇浓度C%浓度平均值（）%标准偏差S相对标准偏差（RSD）A1-50%15.4215.120.00282%A2-50%14.86A3-50%15.09B1-80%24.1524.050.00090%B2-80%24.02B3-80%23.98C1-100%29.9830.160.00191%C2-100%30.15C3-100%30.36D1-120%36.8136.550.00411%D2-120%36.77D3-120

34、%36.08结论：每个浓度项下的相对标准偏差均不大于2%。5.8.5. 方法的中间精密度5.8.5.1. 由不同的检验员，在不同的日期，重复以上实验，计算相对标准偏差，判断方法的中间精密度是否符合要求。5.8.5.2. 注意：该实验必须由不同的检验员，在不同日期进行。5.8.5.3. 实验步骤与5.7. “方法的准确度”项下内容一样；由另外一名检验员，从配制乙醇-正丙醇混合溶液开始，重复5.7. 项下内容。5.8.5.4. 计算步骤与5.7项下一样，各针的Sample Name分别设置为STD-3、STD-4、repeat-A1-50%、repeat -A2-50%、repeat -A3-50

35、%以此类推。5.8.5.5. 记录由另外一名检验员做的“方法的准确度”的实验谱图和计算结果。5.8.5.6. 记算由另外一名检验员测得的各个浓度的相对标准偏差，并与原检验员测得的结果比较，记录结果。5.8.5.7. 可接受标准每个浓度项下的相对标准偏差RSD不大于2%。5.8.5.8. 系统适用性实验：结果见下表：标准溶液编号12345谱图编号0018003000180031001800320018003300180034分离度15.415.915.415.415.4乙醇理论塔板数3948242754395203951139517正丙醇理论塔板数540665663854105529135292

36、8乙醇与正丙醇峰面积之比1.068551.053791.054921.068831.07009RSD（%）1结论：根据实验结果，乙醇峰与正丙醇峰的分离度大于2.0，二者的理论塔板数均大于5000且峰面积之比RSD5%，符合可接受标准。5.8.5.9. 中间精密度结果见表3表5。表3溶液编号名称谱图编号乙醇峰面积正丙醇峰面积乙醇与正丙醇峰面积比A1-50%repeat-A1-50%00180035200.865071249.072270.16081A2-50%repeat-A2-50%00180036197.901811257.921750.15732A3-50%repeat-A3-50%001

37、80037198.081601277.645870.15504B1-80%repeat-B1-80%00180038319.400481268.321410.25183B2-80%repeat-B2-80%00180039320.439761262.190060.25388B3-80%repeat-B3-80%00180040323.524811278.320430.25309C1-100%repeat-C1-100%00180041307.00223990.670170.30989C2-100%repeat-C2-100%00180042363.266511157.532590.31383C

38、3-100%repeat-C3-100%00180043396.299901261.020510.31427D1-120%repeat-D1-120%00180044473.767551245.984130.38024D2-120%repeat-D2-120%00180045473.508611252.111820.37817D3-120%repeat-D3-120%00180046471.815951250.154170.37741表4溶液编号计算得到乙醇浓度C%配制乙醇溶液浓度C0%回收率%（CC0100%）平均回收率%A1-50%15.1115.00100.7499A2-50%14.78

39、15.0098.56A3-50%14.5715.0097.13B1-80%23.6624.0098.6099B2-80%23.8624.0099.40B3-80%23.7824.0099.09C1-100%29.1230.0097.0798C2-100%29.4930.0098.30C3-100%29.5330.0098.44D1-120%35.7336.0099.2599D2-120%35.5436.0098.71D3-120%35.4736.0098.51表5溶液编号公式计算得到的乙醇浓度C%浓度平均值（）%标准偏差S相对标准偏差（RSD）A1-50%15.1114.820.00272%A

40、2-50%14.78A3-50%14.57B1-80%23.6623.770.00100%B2-80%23.86B3-80%23.78C1-100%29.1229.380.00231%C2-100%29.49C3-100%29.53D1-120%35.7335.580.00140%D2-120%35.54D3-120%35.47结论：不同人员不同日期检测得的不同乙醇浓度溶液的平均回收率均在98% 102%之间，且RSD均不大于2%。5.9. 范围根据方法的专属性、检测限和定量限、线性、准确度、精密度的验证结果，确认本方法的范围是：适用于乙醇含量为15%36%（v/v）的中间过程酒精浓度的检测。

41、5.10. 耐变性调整方法的检测条件以确定气相色谱法对中间过程酒精浓度检测结果的影响。根据耐变性实验计算出相对标准偏差（RSD），判断这些条件的改变对方法的影响。5.10.1. 调整检测条件：5.10.1.1. 将气相色谱仪进样口温度调整为115和125；5.10.1.2. 将检测器温度调整为195和205；5.10.1.3. 将顶空进样器加热平衡时间调整为15min和25min。5.10.2. 溶液的配制：配制0.4%乙醇-0.2%正丙醇混合标准溶液：用1ml单标线吸管移取1.0ml乙醇，注入装有三分之一注射用水的250ml量瓶中，再用另一支1ml分度吸管移取0.50ml正丙醇，注入同一个2

42、50ml量瓶中，用注射用水稀释并定容至刻度。5.10.3. 操作步骤：5.10.3.1. 配制5.10.2.项下“0.4%乙醇-0.2%正丙醇混合标准溶液”。5.10.3.2. 以4.3项下的色谱条件，向气相色谱仪中进样0.4%乙醇-0.2%正丙醇混合标准溶液2针，记录色谱图，作为对照溶液的色谱图。5.10.3.3. 其他条件不变，将气相色谱仪进样口温度分别调整为115和125，每种温度条件下向气相色谱仪中进样0.4%乙醇-0.2%正丙醇混合标准溶液3针，各针的Sample Name分别设置为resist-INJ-1、resist-INJ-2 、resist-INJ-3、resist-INJ-

43、4、resist-INJ-5 、resist-INJ-6。计算乙醇回收率和乙醇含量相对标准偏差RSD，判断检测结果是否符合要求；记录实验结果。5.10.3.4. 其他条件不变，将气相色谱仪检测器温度调整为195和205，其他条件不变，每种温度条件下向气相色谱仪中进样乙醇-正丙醇混合标准溶液3针，各针的Sample Name分别设置为resist-DET-1、resist-DET-2 、resist-DET-3、resist-DET-4、resist-DET-5 、resist-DET-6。计算乙醇回收率和乙醇含量的相对标准偏差RSD，记录实验结果。5.10.3.5. 其他条件不变，将顶空进样器

44、每针的样品瓶平衡时间调整为15min和25min，其他条件不变，每种平衡时间条件下向气相色谱仪中进样乙醇-正丙醇混合标准溶液3针，各针的Sample Name分别设置为resist-EQ-1、resist-EQ-2 、resist-EQ-3、resist-EQ-4、resist-EQ-5 、resist-EQ-6。计算乙醇回收率和乙醇含量的相对标准偏差RSD，记录实验结果。5.10.4. 可接受标准 乙醇峰与正丙醇峰的分离度不得小于2.0。 乙醇峰与正丙醇峰的理论塔板数均不得小于5000。 回收率在98%102%之间。 相对标准偏差RSD不大于2%。5.10.5. 如果改变检测条件得到的实验结

45、果符合以上标准，在以后的检测实验中，只要仪器条件的变化在“耐变性实验条件”的范围内，可以认为结果是可靠的。5.10.6. 如果改变检测条件得到的实验结果不符合以上标准，说明在以后的检测实验中不充许改变该检测条件。5.10.7. 实验结果见下表：图谱号名称乙醇塔板数正丙醇塔板数分离度回收率%平均回收率%RSD%00180047STD-11377065079415.000180048STD-12367885190115.000180049resist-INJ-1368495087114.9101100100180050resist-INJ-2368675089114.910000180051res

46、ist-INJ-3359865088714.810000180052resist-INJ-4368335084214.9101100100180053resist-INJ-5368595088114.910000180054resist-INJ-6359655086014.810000180055resist-DET-1368545198115.0100100100180056resist-DET-2368555087414.910100180057resist-DET-3368525086714.910000180058resist-DET-4368755200115.01001001001

47、80059resist-DET-5359704978714.810100180060resist-DET-6387715316915.39900180061resist-EQ-1378125199615.199100100180062resist-EQ-2359795087214.810000180063resist-EQ-3359824979514.810100180064resist-EQ-4359865088214.8101100200180065resist-EQ-5368625087014.910100180066resist-EQ-6378335317415.298结论：乙醇峰与正

48、丙醇峰的分离度不小于2.0。乙醇峰与正丙醇峰的理论塔板数均大于5000。回收率在98%102%之间。相对标准偏差RSD不大于2%。因此如果在以后的检测中实验条件在上述范围内变化，可以认为结果还是可靠的。6. 结论6.1. 本法专属性良好，乙醇峰与正丙醇峰的分离度大于2.0，理论塔板数大于5000。6.2. 本法检测乙醇含量从10%50%范围内线性良好，相关系数为1.0000。6.3. 准确度：两名检验员的回收率范围分别在100%102%和98%99%。6.4. 精密度：方法的相对标准差小于2%。6.5. 本方法耐变范围宽，因而有利于今后的分析。特别是样品瓶的平衡时间可以缩短为15min，有利于样品的快速分析。6.6. 验证得到的方法适用于乙醇含量在15%36%（v/v）范围的肝素钠生产中间过程 酒精浓度的检测。版本号：0000生效日期：批准人页签：