宝生汤对实验性不育小鼠睾丸组织及精子的影响

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1、精品范文模板 可修改删除撰写人：_日 期：_Experimental Study on Influence of Bao Sheng Decoction on Testis Tissue and Sperm of Spermatogenic Lesion Letdown in MiceMajor:Clinical Basis of TCMPostgraduate:Zhou XiaoPingTutor:Prof.Dai JingChengABSTRACTObjective:To investigate the influence of Bao Sheng Decoction (given BCD

2、)on sperm lesion letdown in mice and provided data for further study and clinical practice.Methods:The testises of male mice were taken into the warm bath in 43 within 20 minters changing the spermatogenic lesion letdown model, and those mices were randomly divided into three groups, respective ig B

3、SD,Wu Zi Yan Zong Decoction(given WZYZD)and Normal Saline and having taken medicine for two weeks. Another mices was builted the normal group.The testicular tissue was observed as well and measure the number ,motility of sperms ,the weight of the testicles,epididymis and body.Result: 1.The pathology

4、 of the injured testicular organs were restored remarkably by BSD group and better than that in WZYZD group and Model group in mice.2.The number and motility of sperms could remarkably raise by BSD group than that in WZYZD group(p0.01) in mice.3.BSD group could raise the weight of the testis and Epi

5、didymis better than that in WZYZD group(0.01p0.05) and Model group(p0.01).Conclusions:BSD could remarkably promote the spermatogenetic function of testis and could remarkably restore the pathology of the injured testicular organs in mice. These functions were led by BSD group better than that by WZY

6、ZW group and Model group.MESH: Bao Sheng Decoction /pharmacology Spermatogenic lession letdown, experimental/tcd therTesticular organs/pathTestis number/drug effMotility/ drug effTestis weight/ drug effBody weighy/ drug effEpididymis/ drug effMice宝生汤对生精障碍小鼠睾丸组织及精子影响的实验研究专 业：中医临床基础研究生：周小平导 师：戴锦成 教授摘

7、要目的：研究宝生汤对生精障碍模型小鼠的影响，为临床应用和进一步研究宝生汤提供客观的实验和理论依据。方法：雄性小鼠，把其睾丸浸没于43温水浴20分钟造模，随机分成三组，分别灌服宝生汤（简称宝生组），五子衍宗汤（简称五子组）和生理盐水（简称模型组），连续2周。另设正常组，常规喂养相同时间。处死后，睾丸组织做电镜及光镜病理切片；检测精子密度、活动率；称睾丸、附睾的重量以及动物体重。结果：1、宝生汤能明显促进损伤睾丸病理恢复正常，优于五子衍宗组及模型组；2、宝生汤能明显提高小鼠精子活动率，优于五子组（p0.01）及正常组(0.01p0.05)；增加小鼠精子密度优于五子组(p0.01)；3、宝生汤能增加

8、小鼠睾丸和附睾重量，优于五子组(0.01p0.05)及模型组(p0.01)；结论：宝生汤有明显的促生精、恢复睾丸病理正常的作用，优于五子组与模型组。主题词：宝生汤/药理学 生精障碍，实验性/中药疗法 睾丸组织/病理学 精子数/药物作用 活动率/药物作用 睾丸重量/药物作用 体重/药物作用 小鼠宝生汤对生精障碍小鼠睾丸组织及精子影响的实验研究专 业：中医临床基础方 向：金匮方论治疗男性病研究生：周小平导 师：戴锦成前 言生殖健康1是指与生殖（和性）相关的机体的结构、功能和行为过程中的生理、心理和社会的完满和谐的良好状态，而不仅仅是指一个人没有疾病或不健康。1994年9月在开罗召开的“国际人口与发

9、展大会”上，180多个国家的代表一致认识到男性生殖健康的重要性。明确决定把“生殖健康”作为“全球最优先考虑的问题”。WHO推荐，夫妇婚后同居一年以上，未采用任何避孕措施，由于男性方面的原因造成者称为男性不育症。从全球范围来看1，不育症的发病率达810%，目前全球至少有5000-8000万对不育患者，并有逐渐上升的趋势。我国不育症患病率与国际水平接近。男性不育正在成为一个社会问题。现代中西医学家正在作出自己的努力，双方各自发挥特长，为治疗这一疾病探索各种方法。西方生殖辅助技术异军突起，先后走过了人工授精、体外授精和胚胎移植（IVF-ET）、显微操作助孕技术三个阶段。开辟了人类生殖的全新局面。但是

10、，它也带来了一些副作用和社会伦理问题。如结构异常的染色体和突变基因，诸如点突变、微缺失和重排等。使用这些精子通过ICSI技术而出生的下一代就完全有可能在其成年后重演其父辈的悲剧。因为已知如Y染色体微缺失是可以代代相传的2。人类渴望自然妊娠过程，体验由此而带来的和谐与幸福。中医学依靠它得天独厚的理论和药物，在治疗不育症方面显示了勃勃生机。中药物具有疗效确切、稳定、低毒、无创伤、少痛苦、经济方便等优点，符合“人类向自然回归”的科学思潮，符合生物心理社会医学模式的特点，在治疗男性不育方面具有广阔的前景。因此，从依据中医理论、结合现代科技手段的角度出发，研究开发新的治疗不育及促进生殖的药物，具有现实和

11、长远的意义。戴锦成教授的宝生汤即是这方面努力的典型，其在临床用之多验，但缺乏动物试验的支持。本课题即从这一立场出发，从动物试验方面提供客观依据，为它的进一步研究打下基础。材料与方法1、 材料：1.1 动物：清洁级ICR小鼠45只，体重2530克，福建医科大学实验中心提供，医动字23-009（质）号。所用小鼠常规喂养一周。1.2 药物；宝生汤、五子衍宗汤药物均由福建中医学院国医堂提供，由有经验药工验明系正品，其中五子衍宗汤配方按95年中华人民共和国药典法定剂量。两组药物均自煎至2g/ml，4冰箱冷藏备用。1.3 仪器：HH6 数显温控仪 常州国华电器有限公司JEM1200EX 透射电子显微镜 日

12、本OLYMPUSFA1004 精密电子天平 上海天平仪器厂XS212103 生物显微镜 日本JNOEC2.方法：参考文献法3，取体重2530克雄性小鼠45只，随机分为四组，取其中一组11只为正常组，常规喂养。另34只分别先用乙醚麻醉，然后将四肢绑于立式支架上，使阴囊浸没在43温水中20分钟进行造模。造模后第九天，把34只小鼠随机分为三组，一组12只，另两组各11只，分别灌服宝生汤、五子衍宗汤、生理盐水，均8ml/kg体重，每日灌胃一次，连续14天，于最后一次给药后24小时称重，将动物脱臼处死，迅速摘取睾丸、附睾。2.1 双侧睾丸称湿重，然后一侧睾丸用10%福尔马林溶液固定，另一侧睾丸按电镜标本

13、固定要求置入电镜固定液中。2.2 两侧附睾称湿重，迅速置于盛有4ml生理盐水的平皿中适当剪碎，于37温水浴中温浴20分钟，使其充分游离，按红细胞计数法，测得悬液中每毫升精子数4。2.3 精子活动率测定：将上述37温浴20分钟后的精子悬液12滴滴于载玻片上，高倍镜下记录200个精子中活动精子的百分率，整个过程应在2025下进行，并于10分钟内完成。2.410%福尔马林固定标本24小时后，序列酒精脱水，石蜡包埋切片，HE染色，制成光镜病理片。电镜标本2%戊二醛液前固定，1%锇酸后固定，梯度酒精脱水，渗透，苯二甲酸二丙酯包埋后用超薄切片机切成50nm的超薄切片，电镜下观察细胞超微结构。结 果1、实验

14、结果1.1 正常组、宝生汤组（简称宝生组）、五子衍宗组（简称五子组）精子密度与精子活动率的比较。表1：正常组、宝生组、五子组精子密度与精子活动率的比较（X）组别 动物数（只） 精子密度（106/ml） 精子活动率（%）正常组 11 18.182.09 88.872.58五子组 11 16.822.56 80.892.89宝生组 12 20.082.50 91.693.04 *各组经方差齐性检验，满足F检验条件.示与五子组相比，P0.05,有可比性;示与五子组比较P0.01有显著性差异；*示与正常组相比0.01P0.05，有统计学意义。1.2 正常组、模型组、五子组与宝生组体重、睾丸和附睾重量的

15、比较： 组 别 动 物 数 体 重 睾 丸 附 睾 （只） （g） （mg） （mg）正常组 11 41.182.25 23421.3 * 83.1614.05模型组 11 38.354.46 18113.8 67.337.11五子组 11 42.182.46 21327.0 74.9411.64宝生组 12 44.463.45 23916.5 * 8.1211.99各组经方差齐性检验，满足F检验条件。示与模型组比较P0.01有显著性差异；*示与五子组相比0.01P0.05，有明显的统计学意义。2、光镜观察：正常小鼠睾丸组织结构正常（图一）。曲细精管内各级生精细胞层次多在57层，依次为精原细胞

16、、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞、精子。精原细胞紧贴生精上皮基膜，圆形或椭圆形，核圆形或椭圆，核染色深；初级精母细胞位于精原细胞近腔侧，体积稍大，此期处于细胞分裂期，核大圆而色淡染，可看到分裂的染色体；次级精母细胞位置靠近管腔，核圆，染色稍深，此期染色体已发生分离，由于次级精母细胞存在时间短，在生精小管切面内不易见到。精子细胞位近管腔，体积稍小，染色质致密；精子形似蝌蚪，头部为高度致密的细胞核，其后为长长的尾巴（图二）。支持细胞轮廓不清，核常呈不规则形，核染色质稀疏，染色浅，核仁明显。间质细胞成群分布，圆形或多边形，核圆居中。温水浴造模后第九天睾丸病理组织切片示（图三、四）：曲细精管生精

17、上皮变薄，只剩精原细胞，偶见初级精母细胞，未见精子细胞与精子，管腔内偶见分解脱落的生精细胞。模型组病理切片示（图五）：曲细精管萎缩，生精上皮变薄，管腔内可见到23层生精细胞，数量明显减少，未见成熟的精子，曲细精管间有大量的间质细胞生成。五子组病理切片示（图七、八）：曲细精管结构接近正常，生精上皮大多完整，生精细胞层次在45层，但精子数不多。宝生汤组病理切片示（图九、十）曲细精管结构基本正常，生精细胞在67层，排列较密，管腔内成熟精子较多。3、电镜观察：正常组不同发育阶段的生精细胞包括精原细胞、精母细胞、精子细胞及精子均可见（949-1）。精原细胞与基底膜接触，细胞核圆形或椭圆形，核仁可见，细胞

18、浆内细胞器较少，有少量的线粒体及粗面内质网；精母细胞核呈圆形，胞浆内细胞器较多，见较多的线粒体、粗面内质网及高尔基体，还有一些核糖体及糖元；精子细胞随着其发育阶段的不同，其形态也发生变化直至精子形成（951-1）。支持细胞也可见，其核多有切迹，胞浆内线粒体、内质网、高尔基体均可见，细胞表面有突起，细胞间有紧密连接；模型组生精上皮变薄，各个发育分阶段的生精细胞明显减少，有些区域见生精细胞之间间隙扩大，生精细胞内细胞器有不同程度肿胀，甚至有部分生精细胞坏死，其核溶解（953-2），核膜及胞膜不完整，有些坏死的生精细胞脱落，局部残留较大的空隙（954-2），精子生成偶见，支持细胞也有水肿；五子组生精

19、上皮略有增厚，精原细胞、精母细胞及早期精子细胞均有不同程度增多（978-1），晚期精子细胞及精子渐多，细胞间及细胞内水肿均有改善，坏死少见（956-1），支持细胞形态结构未见异常；宝生汤与模型组相比较，生精上皮明显增厚，精原细胞、精母细胞、精子细胞均有明显增多，精子多散在分布，也有呈簇分布（982-2、980-1），细胞间及细胞内未见水肿，未见有坏死的生精细胞，支持细胞形态结构未见异常（983-1）。讨 论1、中医对男性生殖的理论探讨中医二千多年前的黄帝内经奠定了“肾主生殖”的人生殖的理论基础，但未出方，稍后张仲景的金匮要略继承内经遗旨，并拟定肾气丸、天雄散等方，在治疗男性不育的实践中发挥了重

20、要作用。在此基础上，后世医家不断发展，逐渐形成了以“肾精学说”为核心的治疗男性不育的理论体系。也就是说“肾精”与男性的生殖有密切的关系。1.1“肾精学说”是中医男性生殖的核心学说中医理论认为，肾主藏精，主生殖与生长发育，与天癸的关系密切，说明肾所藏之精对人体的生长发育，人类的繁衍方面都有至关重要的作用。1.1.1肾藏精，主生殖肾藏精包括先天之精、天癸和后天濡养之精。生殖之精来源于父母先天，是“生之来谓之精”。其精得之于父母先天，父母之精决定了子代之禀质。如灵枢经脉篇曰：“人始生，先成精，精成而后脑髓生，骨为干，脉为营，筋为刚，肉为墙，皮肤坚而毛发长。”就说明了这一点：如果男精壮，女精强，则子代

21、禀质必强；反之，则禀质不足。先天之精还须在天癸的作用下，充溢化生精液，才具有生殖机能。“天癸5是来源于父母而贮藏于肾的一种物质”。它随胎元的发育而发展，随肾气的充实而至，随着肾气的衰竭而枯竭，这是一般规律。如素问上古天真论篇说：“丈夫八岁，肾气实，发长齿更；二八，肾气盛，天癸至，精气溢泻，阴阳和，故能有子；三八，肾气平均，筋骨动强，故真牙生而长极；七八，肝气衰，筋不能动，天癸竭，精少，肾藏衰，形体皆极；八八，则齿发去”。天癸的这一功能与现代医学的下丘脑垂体性腺轴大致相当。即其具有促进性征及生殖器官的发育成熟；维持性、生殖功能；参与生殖之精的化生以繁衍后代。6但是，另一方面，先天之精必赖后天之精

22、的濡养。素问上古天真论篇说：“肾者主水，受五脏六腑之精而藏之。故五藏盛乃能泻”。就是说，肾还藏五脏之精，与先天之精共同构成肾中精气。进而提示：7五脏之精转化为肾中精气后，它们不仅是一种营养物质，而且各自带着本脏的生命信息及阴阳盛衰特征，生殖之精正是在天癸的作用下，将这些特征集中储存起来，作为遗传信息，推动子代的生长和发育。这也从另一侧面看出，五脏之气血阴阳的变化，亦必引起肾精的变化，影响生长发育与繁衍子代。由此可见，“肾精学说主要是强调肾精在男科性生殖的重要作用，认为肾藏精，主生殖，肾精的盛衰决定男子的生育能力。生理上，男性生殖以精为本；病理上，肾精亏虚为男性不育的重要因素。其它脏腑与肾主生殖

23、的关系生殖不仅与肾关系密切，亦与其它四脏有密切关系1.2.1肝肾同源，精血互生肝主藏血，主疏泄。一方面，肝调控着全身血流的流量、血量以及血液的贮藏。如素问五藏生成篇说：“人卧则血归于肝，肝受血而能视，足受血而能步，掌受血而能握，指受血而能摄”。因此，外肾（睾丸）受血则能生精。另一方面，肝主司气机的畅和条达，气机顺，血脉和，则人不受病。若肝失疏泄，气血失调，则百疾丛生。在外肾则为气郁、气结、血瘀、痰阻。因为足厥阴经过阴器（为宗筋 ，肝所主）。肾藏精，五行属水；肝藏血，五行属木。水生木，木涵水。两者在五行相生。诸病源候论虚劳精血出候说：“肾藏精，精者，血之所成也”8。是说肾藏之精受血的影响和制约。

24、黄帝内经素问集注上古天真论说：“血乃肾之液”9。是说精可以化血，血亦受精的影响和制约。由此，精血同源，精生血，血养精。共同调理着人类的生殖（生殖之精是在天癸的作用下由外肾化生、贮藏属于精室。肾受五脏六腑之精而藏之）。由于肝肾同源，精血互化，肝血能滋养肾精，故肝血的盛衰对肾精的化生有重要作用。肝血充足，则肾精生化无穷；反之，如果肝血不足或肝血瘀滞，则肾精生化无源。临床上对某些不育病从补肝血或疏肝化瘀治疗，往往能收到明显效果。1.2.2脾肾为本，化气血养精脾主运化，统摄气血。脾胃的运化腐熟水谷精微，通过经络运行全身，濡养人体，亦濡养外肾及生殖之精。灵枢决气篇说：“中焦受气取汁，变化而赤是谓血”。素

25、问痿论篇说：“阳明者，五脏六腑之海，主润宗筋”。都说明脾胃化生的气血对肾有濡养的作用。生殖之精是在天癸的作用下，由精血化生而成。天癸、生殖之精虽靠肾气的作用才能充实和成熟，但亦赖后天水谷精微化生的气血不断滋养。景岳全书杂证谟说：“人之始生，本乎精血之源；人之既生，由乎水谷之养。非精血，无以立形体之基；非水谷，无以成形体之壮。精血之司在命门，水谷之司在脾胃，故命门得先天之气，脾胃得后天之气，是以水谷之海本赖先天为之主，而精血之海又必赖后天为之资”10。故脾胃健运，则肾精、天癸得养，生精有力；若脾胃失运，气血不足，则天癸、肾精无以养，则生精减少或精子活动无力。另一方面，脾胃化生的水谷精微可以充养天

26、癸及生殖之精。若偏嗜有害食物或药物，可损伤肾的生精功能，如偏嗜烟酒、辛辣刺激物，可酿生湿热、变移它证，影响生精及精子的结构和功能。此外，脾气主升，有统摄作用。肾精之闭虽在肾，但又需脾气的统摄。若脾虚气陷，统摄失职，可导致精无所固而泄下，出现遗精、滑精、尿浊等。1.2.3心肾水火，相济相克心为君主之官，司君火，藏神，主血脉，主神明。心司君火，主血脉，具有推动全身血脉运行、输送精微物质到达全身的作用。外肾亦需要心血的濡养。若心藏血的功能正常，则百脉诸脏得以充养；若心气血不足，则或为虚，或为瘀：在外肾则导致生精功能受到影响，或为数量减少或为活动力不足。心藏神。神明既是人体生命活动的外在表现，又是意识

27、活动。对人体的行为具有支配作用。在生殖方面就是对性生活的影响和对天癸与生殖之精的化生起支配作用。仁斋直指方说：“精之主宰在心，精之藏制在肾”11。格致余论阳有余而阴不足论说：“心，君火也，为物所感则惕动。心动则相火亦动，动则精自走，相火翕然而起，虽不交合，亦暗流而疏泄也”12。素灵微蕴卷三说：“精根于神”13。这些都说明：若心神功能正常则生殖之精不被扰乱，性功能正常；反之，则生殖之精与天癸俱受影响，性活动失常，从而导致生精紊乱、阳痿、早泄等症。1.2.4肺朝百脉，金水相生肺具有主气、司呼吸，主治节、朝百脉，宣肃气血的作用。并进而治理、濡养、调节全身的功能。“肺主气，朝百脉”，肺把吸入的自然界清

28、气，与朝百脉的水谷精微之气，通过治节作用运达全身，营养人体，亦濡养外肾。如果肺的这些功能的任何环节出现失调，则都会影响全身。如肺气亏虚，不能宣肃气血津液，则会生痰、生湿、生瘀，最终影响到外肾，影响生精功能。血证论发渴说：“肾中天癸之水，至于胞中，循气冲，随呼吸，而上于肺部，肺金司之，布达其气，是以水津四布”14。素灵微蕴卷三13说：“肺主呼吸，而呼吸之气直达肾水，故肾水之中亦有肺气”、“肺为气之主，肾为气之根”。这些说明了肺肾在生理方面的密切关系，其在病理方面亦必相互影响和制约。1.2.5冲、任、督、带脉与生殖冲、任、督三脉一源三歧皆起于精室，与生殖关系十分密切。冲脉为血海、十二经之海、五脏六

29、腑之海。是与它的经络走行密切相关的。灵枢逆顺肥瘦篇说：“夫冲脉者，五脏六腑之海也，五脏六腑皆禀焉。其上者，出于颃颡，渗诸阳，灌诸精；其下者，注少阴之大络，出于气街，循阴股内廉，入膕中，伏行骭骨内，下至内踝之后属而别。其下者，并于少阴之经，渗三阴；其前者，伏行出跗属，入大趾间，渗诸络而温肌肉”。灵枢五音五味篇说：“冲脉任脉，皆起于胞中，上循背里，为经络之海，其浮而外者，循腹右上行，会于咽喉，而别络唇口”。因此，冲脉与任脉、胃经、肾经、督脉等相通，与肝经相络，受到胃经运送的水谷精微的供养，得肾经先天之精气的资助，受肝经气血的疏泄充养。反之，它起于精室，会全身气血，运行天癸，滋生精液，充养外肾。任脉

30、，起于精室，主一身之阴经，为阴脉之海。任脉有通行天癸，促进生精的作用。“男子二八，肾气盛，天癸至，精气溢泻，阴阳和，故能有子”。一方面是任脉畅通，天癸极至，到达肾，肾气盛；另一方面，任脉运行从阴脉而来的气血精微，到达肾，充溢肾气，滋养天癸，促进肾的生精。督脉亦起于精室。如素问骨空论篇说：“督脉者，起于少腹以下，骨中央，女子入系廷孔。其孔，溺孔之端也。其络循阴器，合篡间，其男子循茎下至篡，与女子等”。督脉对生殖之精有资助调节的作用。“阴阳和，故能有子”。就是指任脉为阴脉，督脉为阳脉，任督二脉的经气调和，阴中有阳，阳中有阴，阴平阳秘，才能精气溢泻，受孕而生育。若阳气虚，则为精少、精冷、阳痿，均影响

31、生育。带脉，有约束上下走行的经脉、起连络和协调作用。故有“诸脉皆属于带”之说。带脉约束“冲、任、督”三脉，协调其经气对外肾的作用。其一，束养宗筋；使宗筋驰张得宜。其二，约固精关；使精关的开启与关闭调和适宜，有利于蓄养精气。如果其功能失常，则会出现遗精、早泄等病症，从而影响生育。综上所述， 生殖之精主于肾，而其生发成熟和功能正常则受到脏腑经络的共同影响。因此，中医对生殖男性的正确认识应该是以肾精为核心，以脏腑经络为整体的体系。2.关于模型的讨论一般小鼠睾丸的温度低于腹腔温度84。睾丸温度过高会影响生育力。利用这一原理造模，有其科学根据：精子发生要有一个低于自身体温数摄氏度的微环境，当这一微环境遭

32、到破坏时，精子的发生就会障碍，精子的质量、数量就会下降，直接影响生育力。本实验模型是通过用43即高于睾丸温度数度的温水浸泡小鼠睾丸20分钟造成睾丸的生精障碍。通过预试验，我们在组织学上已经直观地看到了造模后的曲细精管横截面（见图四）绝大多数曲细精管管腔内只见一层精原细胞，而精原细胞以上的各级生精细胞及精子均已破坏，说明造成了小鼠睾丸生精障碍。（生精障碍一般属于中医肾虚范畴。）生精障碍要持续自造模起50天内，即损伤在热作用50天后开始恢复。我们在造模第九天开始灌服药物煎剂，时间为两周，与造模时间相加只有24天，远远低于它的自然恢复过程，说明这一模型在时间上有其可行性。睾丸具有特殊的血管结构逆流交

33、换装置15。使睾丸保持了较低的温度。睾丸局部透热16可破坏这一环境，使睾丸血管扩张，血流停滞，引起睾丸组织缺氧，缺氧又使某些蛋白质的合成受障（见图六）。热也可以作用于溶酶体膜，使溶酶体膜破裂、细胞自溶。这些特点符合中医瘀血范畴。因此，该模型具有中医肾虚血瘀的病机特点。3.关于宝生汤、五子衍宗汤药物组成及机理探讨宝生汤由紫河车、仙灵脾、枸杞、黄芪、丹参、当归、菟丝子等组成。方中紫河车：味甘咸，性温，入肝肾经。功效补气、养血、益精。本草逢原说：“紫河车禀受精血结孕之余液，得母气之血居多，故能峻补营血”。现代药理研究17发现其“含有绒毛膜促性腺激素、雌激素及孕激素成分，因而具有这些激素的药理作用”；

34、“紫河车提取物给哺乳动物幼兔注射，对甲状腺、睾丸等有促进作用”。仙灵脾：味辛甘，性温，入肝肾经。功效补肾壮阳，祛风除湿；本草纲目说：“淫羊藿，性温而不寒，能益精气，真阳不足者益之”。本草经疏说：“淫羊藿，其气温而无毒，辛以润肾，甘温益阴气”。现代药理研究17“有雄激素样作用”。枸杞：味甘平，入肝肾肺经。功效滋补肝肾，润肺。本草正说：“枸杞，味重而纯，故能补阴，阴中有阳，故能补气。所以滋阴而不至阴衰，助阳而能使阳旺”。现代药理研究18“服枸杞后血浆睾酮含量显著升高，但在正常范围内，说明枸杞有一定程度上提高睾酮水平”。黄芪：味甘，性微温，入肺脾经，功能补气升阳，益卫固表，托毒生肌。本经逢原说：“黄

35、芪，能补五脏诸虚”。黄芪现代药理研究17“有增强细胞生理代谢作用”、“有抗缺氧作用”。丹参：味苦，性微寒，入心肝经；功能活血化瘀。本草纲目说：“丹参能破宿血，补新血”。本草正义说：“丹参主入血分，其功在于活血行血，内之达脏腑而化瘀滞，外之利关节而通脉络”。丹参现代研究17示其“有增加微循环血流的作用”、“有抗凝血及抗血小板凝聚作用”。当归：味甘辛，性温，入心肝经脾经；功能补血和血，调经止痛。本草备要有“血滞能通，血虚能补，血枯能润，血乱能扶”之说。现代药理研究17显示有“降低血小板聚集和抗血栓作用”、“促进血红蛋白及红细胞的生成”、“抗氧化和清除自由基的作用”。菟丝子：味辛甘，性平，入肝肾经；

36、功能补肝肾，益精髓。本草逢原说：“菟丝子，其功专于益精髓，坚筋骨，止遗泄，主茎寒精出”。现代药理研究证实“有促性腺激素样作用”19；“对用糖皮质激素造成的阳虚小鼠的虚证症状有一定的恢复作用，并对果蝇性力有不同程度的增强”20。全方从现代药理既能对生精的性激素方面产生影响，又影响现代血液循环：或清除自由基或抗血栓、抗血小板聚集。从中医方面来说就是取“精血互生，阴中有阳，阳中有阴”之义。诸药合用，以肾为核心，阴阳并补，气血共治，走五脏六腑，渗经络奇恒，既补肾又活血，全方有补有泻，阴中求阳，此亦即金匮要略血痹虚劳病篇肾气丸之组方特点。五子衍宗汤有枸杞子、菟丝子、车前子、五味子、覆盆子组成。方中枸杞、

37、菟丝子性味归经及功能如上所述。五味子：味酸，性温，入肺肾心经；功能敛肺滋肾，生津敛汗，涩精止泻，宁心安神。本草纲目：“五味子酸咸入肝而补肾，辛苦入心而补肺，甘入中宫益脾胃”。现代药理研究21示：“五味子有加强睾丸RNA合成，改善组织代谢，促进生殖细胞增生的作用”。车前子：味甘性寒，入肾、肝、膀胱、肺经；功能利水通淋，止泻清肝明目 。本草汇言说：“车前子，行肝疏肾，畅郁和阳，同补肾药用，令强阴有子”。现代药理研究22示：“有延缓衰老的作用”。覆盆子：味甘酸性平，入肝肾经；功能 补肾缩尿，固精明目。本草述说：“覆盆子，方书用之治劳倦虚劳等症，或补肾元阳，或益肾阴气，或专滋精血，随其所宜之方，皆能相

38、助为理也”。现代药理研究23示：“覆盆子其提取液能升高睾酮水平”。五子衍宗汤全方研究24示“有类似性激素和促性腺激素的效果，能使睾丸组织曲细精管间质细胞得到改善和恢复，增强了生精和分泌激素能力”。全方具有补肾生精的作用。4、对实验动物的影响41 增加精子密度，提高精子活动率男性不育主要表现在男性的形异、性异和精异三个方面25。尤以精异为主，精异又以精少、精子活动率低下处于首位。精子数量及活动率是衡量精液质量的两个重要指标。使女方受孕的重要的条件是有足够数量的形态正常活跃的精子。本实验证实，宝生汤能够明显提高精子的活动率，优于五子组（P0.01）和正常组(0.01P0.05):对精子密度有比正常

39、组增加的趋势但统计学无显著差异而明显优于经典补肾生精治疗不育的名方五子衍宗汤组(P0.05)。4.2 增加睾丸重量睾丸曲细精管约占睾丸总体积的9826。因此，睾丸的质量间接反映睾丸曲细精管的质量。睾丸曲细精管是精子产生的地方，其为有形之质，属中医阴精范畴，其重量的增加反映了肾气的充溢。宝生汤对生精障碍模型小鼠睾丸的增重优于模型组(P0.01)与五子组(0.01P0.05)，而与正常组相比有增重的趋势。对附睾重量的影响宝生组明显优于模型组，与五子组、正常组相比无统计学意义。说明宝生组对附睾的影响不是很明显，而对睾丸的影响明显。宝生组对动物体重的增加与各组相比无统计学意义，但有增重的趋势。43 有

40、恢复病理，促进生精的作用产生精子需要正常的良好的睾丸微环境，即内分泌正常与结构完整的睾丸微细结构。从实验数据及组织学观察，说明宝生汤有明显的恢复病理、促生精作用，接近正常组，明显优于五子组、模型组。从电镜观察，五子组睾丸组织的炎症反映还很明显，有些生精细胞的炎症反应还处在修复阶段；而宝生组改变十分明显炎症反应已消失。模型组炎症反应十分明显，睾丸萎缩。模型组在光镜下观察到淤血27征象，表现为小静脉和毛细血管扩张，充满血液（见图六）。淤血可使睾丸相对缺氧，代谢机能因而减弱；长期淤血由于氧和营养物质供应不足和代谢中间产物堆积，还可引起实质细胞的萎缩和变性，其间质细胞却可增生，这在模型组严重存在（见图

41、五）。因此，宝生汤改变模型病理的可能的机理是，一方面，生精过程受下丘脑垂体性腺系统的调控，主要是其分泌和合成的激素类物质。激素类物质作用于其敏感细胞，维持和促进这些细胞的功能的正常发挥。宝生汤与五子衍宗汤中均有影响性激素变化的成分。如宝生汤中的紫河车，淫羊藿，菟丝子，枸杞；五子衍宗汤组中的枸杞、菟丝子等。可以推测，宝生汤、五子衍宗汤的促生精作用是与下丘脑垂体性腺轴的功能分不开的。但是，从五子衍宗汤对精子数量、活动率及其电镜观察提示，单单补肾法有促进生精功能 ，但是其作用是有限的，其逆转病理的结果是不能令人满意的。根据中医“精血同源”的理论，生精障碍不育单纯从补肾方面治疗是片面的。应该认识到“血

42、”在生精、益精方面的重要作用：血养精。血为生精过程创造了良好的微环境，任何破坏这一微环境的因素都将影响生精过程。因为按现代解剖和病理探索，睾丸需要一个良好稳定的内环境，血液循环在构成这一环境中作用举足轻重。它一方面提供给睾丸生精的精微物质，并把睾丸在代谢过程中的代谢物不断地带走；另一方面，它要促进血液循环，维持使睾丸有一个适宜的温度环境，已知人的睾丸温度比腹腔温度低2428，才能有利于生精。宝生汤除对精（现代性激素之类）的影响外，还对血（即现代血流变及微循环之类）有影响。如方中当归、丹参、黄芪等改善血循环，清除氧自由基，对形成睾丸的稳定内环境有重要作用。微观病理也证实了这一点。综合以上作用，宝

43、生汤既补肾生精，又活血益血生精。并得到了病理组织明显恢复及实验数据的支持。说明补肾活血法优于补肾法。查之临床，肾虚血瘀在男性不育病机中占有主要地位。首先，男性不育病患者病史较长（国内多以男女双方同居2年以上，性生活正常、未采取避孕措施而致女方不能生育由男方引起者）。这个定义只是诊断不育病，但未能概及病史全部，即不育并非由结婚后而形成，而只能说是由于结婚而发现了不育。对同居之前的男性的生活、行为状况知之不多，而正是在这一段时间至同居，是病因作用、形成不育病机病理的过程，这一段时间的长度最短在2年以上。久病入络，病久易瘀。第二，青春期后，性生理成熟，不规律、不正确的性活动频繁，比如手淫，手淫常使精

44、液的排出不畅，更重要的是形成败精淤滞精室。第三，生殖系统的慢性炎症或不明原因的疼痛，是指生殖系的慢性充血性（非细菌性的）炎症和疼痛，如慢性非细菌性前列腺炎，前列腺痛。其病理是前列腺的长期慢性充血（血瘀）引起。第四，药石之误。补肾法是治疗不育的有效的重要的治法。但“所当戒者，不可一法贯彻始终，一味温补肾阳或滋填阴精”29。“虚损之证，早宜培补，但尤易壅滞，因之，每少佐活血通络、辛香行滞之品，意在静中有动，阴中寓阳，以使补而不滞”29。第五，阴部血流不畅。现代社会职业繁多，求美之心善滋：或因职业久立久坐、或久处高温环境、或追求美丽，穿紧身裤，这些可使阴部血流受阻，睾丸供血不良，温度增高，缺氧及有害

45、物质聚集，产生精瘀。第六，情志不畅。不育患者往往求子心切，而又不能速达，精神情志忧郁，心情不畅，可使气血失和，精液的生成受阻。以上因素又常常交互影响，互为因果。青春期不规则的性活动如手淫，往往引起或加重生殖系的慢性充血，慢性炎症久治不愈，使人情志不畅，情志不畅又引起药力受限，最终使病史更长，病情加重，而又频投医问药，致妄补阴补阳，阴阳失调，气血失和。即“殊不知药石杂投，实其所实，瘀滞胶结，气机不畅，致病势愈陷愈深，用逐瘀法，恰可拔乱反正，扭转病势，药到病除”29。因此，不育既要注意肾虚的一面，又要注意血瘀的一面，在治疗中，需要补肾活血。小 结本文通过温水浴生精障碍小鼠模型，部分探讨了宝生汤的作

46、用机理以及与五子衍宗汤的对比，通过光镜观察大体，电镜观察微观结构变化以及相关精子检验指标：1、宝生汤能明显促进损伤睾丸病理恢复正常，优于五子衍宗组及模型组；2、宝生汤能明显提高小鼠精子活动率，优于五子组（p0.01）及正常组(0.01p0.05)；增加小鼠精子密度优于五子组(p0.01)；3、宝生汤能增加小鼠睾丸和附睾重量，优于五子组(0.01p0.05)及模型组(p0.01)；4、不育症既要注意肾虚的一面，又要注意血瘀的一面，在治疗中，需要补肾活血。参考文献1. 陆仁康，谢雁鸿.应重视和加强男性生殖健康的研究.中国男科学杂志,2001；15（1）：3-62. 夏蓉西，刘红潮，等.肾气丸恢复受

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