宝草锦(Haworthia cymbiformis var. triebnet poelln)组培继代培养的激素优化研究生物学专业开题报告

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1、开题报告书论文题目 宝草锦(Haworthia cymbiformis var. triebnet poelln)组培继代培养的激素优化研究题目来源教师课题主要研究内容本课题以百合科十二卷属宝草锦(Haworthia cymbiformis var. triebnet poelln)的组培苗为试材，研究了不同生长调节剂（6-BA，NAA，KT等）及配比对其增殖培养的影响，旨在为建立一种方便快捷且高效的宝草锦快繁技术体系奠定基础。开题依据（包括相关研究现状、此项研究的理论意义、学术价值、应用前景等）1619年，瑞士科学家琼鲍汉提出多肉植物这个名词的概念。最早主要指具有肥厚多汁的茎、根或叶片的一类

2、植物，园艺上一般还称为多肉花卉。全世界多肉植物达2万多种1，隶属50多个科，但是，仙人掌类植物是个另类，它不仅种类繁多、形态多样，而且栽培更加普遍，同时还具有其他科多肉植物所没有的特殊器官刺座，所以将其单独列出称其为植物。其他多肉植物称为多肉植物或多肉花卉2，3。目前，在国内百合科组培主要应用于芦荟属，其中包括芦荟、木立芦荟、库拉索芦荟等。国外组培芦荟属的植物主要是同时具有药用和使用价值的芦荟，如Aloe pruinosa4、Aloe vera5、Aloe barbadensismiller6等。选择合适的外植体是组织培养工作中的第一步，其种类的选择直接影响组织培养的效果。外植体选择时需要考虑

3、培养目的、外植体的培养能力及取材是否会对母株造成影响等因素。芽、叶片和花径都可以作为多肉植物的外植体诱导再生植株，然而各有各的缺点。因此，多肉植物最适外植体的选择还要根据多肉种类和实际情况而定。外植体消毒灭菌是植物组培重中之重。它既要消除微生物又不能破坏织物表面细胞及组织。往往消毒灭菌是非常严谨的，要根据其生长环境、取材位置、取材时间等等来确定消毒剂和消毒时间。常用的消毒剂有：乙醇、升汞（或二氯化汞）、次氯酸盐等7。那淑芝8用75%的酒精溶液浸泡15s， 然后用0.1%Hg Cl2溶液灭菌5 min，来给库拉索芦荟灭菌。赵娟9等用70%酒精消毒30s， 0.1%Hg Cl2灭菌15 min，来

4、给褐斑伽蓝叶片灭菌。宋扬10采用75%酒精处理冰灯玉露幼嫩花茎10 s， 再用0.1%升汞消毒7 min。目前， 多肉植物外植体消毒比较常用的方法是70%75%的酒精与0.1%的氯化汞以不同时间的组合对外植体进行消毒。第二步就是不定芽增殖，激素种类、浓度及其配比对百合科植物组织的形态发生和形成速度有显著的影响。杨炜茹等11在野生渥丹鳞片的不定芽增殖培养中采用的是6-BA;徐凌飞等12、王芳等13在对兰州百合和玉簪芽进行增殖培养时也采用了相同的激素;而马永红14在野生山丹鳞茎增殖培养中采用了6-BA和2， 4-D;田英翠等15单独使用IAA对郁金香芽进行增殖培养。杨炜茹等在对野生渥丹鳞片的不定芽

5、进行增殖培养的研究中发现， 当6-BA的浓度在0.14.0 mg/L范围内时， 随着6-BA浓度的升高， 不定芽数量增多， 增殖系数显著增加;但当6-BA浓度为4.0 mg/L时不定芽的数量反而降低， 愈伤组织增多， 这与徐凌飞等的研究结果相一致;而庞新霞等16通过对东方百合鳞茎组培芽增殖研究后， 认为当NAA 0.1 mg/L时， 6-BA或KT浓度在1.02.0 mg/L之间会使芽增殖倍数高且生长健壮， 但6-BA或KT浓度过低 (2.0 mg/L) 时， 不利于芽增殖， 芽的生长也缓慢。因此最适激素浓度配比对植物快速繁殖具有重要意义。近年来， 多肉植物由于种类繁多、体态清雅而奇特、花色艳

6、丽而多姿和果实硕大而鲜艳等特点， 越来越受到广大消费者的关注和喜爱17， 新一轮的多肉植物研究和开发利用高潮正在兴起18。由于多肉植物耐旱耐瘠薄的特性， 在种植管理时相较于其他园林植物更加节水节肥， 正符合了我国可持续发展的战略思想， 是值得大力推广新型园林植物19。我国是多肉植物原产地之一， 但由于起步较晚， 研究经费投入较少， 资源开发力度不足， 也没有形成规模化的生产， 因此多肉植物的新品种主要靠国外进口20。因此，研究宝草锦快速高效的繁殖生长在我国具有非常不错的应用前景。起止时间和进度安排（包括外出调研）2017年10月 1 日2018年1月31日 完成毕业论文题目论证及双选工作，并下

7、达任务书。2018年 2 月 1 日2018年 3 月 31 日 查找宝草锦组培增殖的相关文献，撰写文献综述，制定（实验）方案，撰写开题报告。2018年 4 月 1 日2018年 4 月 18 日 上交开题报告，完成开题。确定实验方法，进行宝草锦组培增殖培养预试验等。2018年 4 月 19 日2018年 4 月30日 在宝草锦组培增殖的过程中对激素进行控制变量，比较系统的筛选出适合宝草锦组培增殖的激素配比。 2018年5 月1 日2018年5月10日 整理分析实验数据，撰写并完成毕业论文初稿。 2018年 5 月11日2018年 5月14日 修改初稿，定稿。2018年5 月15日2018年

8、6月1日 提交毕业论文，教师及专家评阅，进行论文答辩。 预期结果及成果形式1.预期结果：筛选出培养基中诱导宝草锦组培增殖培养的最佳激素的配比。2.成果形式：毕业论文。可行性分析（已具备的条件和待解决的问题；拟采取的研究方法、技术路线、快速增殖实验方案等）1.已具备的条件和待解决的问题实验材料充足，实验设备完全，生物科学系设有专门的组培实验室，有足够的研究空间；前期实验已经进行了一段时间，搜集文献资料采取下一步计划。2.拟采取的研究方法高压蒸汽灭菌法，固体培养法，数据分析法。3.拟采取的技术路线培养基配制培养基灭菌选取宝草锦分化的不定芽增殖培养不同种类、浓度及配比的植物激素对宝草锦丛芽的影响NA

9、AA6-BAAAAAAAAAAAA数据记录及分析（计算增殖系数和记录不定芽生长状况）4.实验前期准备 母液的制备：配制四种母液，母液大量元素(稀释20倍)、母液微量元素（稀释100倍）、母液铁盐（稀释100倍）、母液有机物质（稀释100倍），植物激素类物质母液配置，生长素类NAA，细胞分裂素类6-BA，细胞分裂素类KT。配制MS培养基：配制1000ml的培养基，分别量取四种母液50ml、10ml、10ml、10ml，激素类使用6-BA、KT、NAA，称取琼脂7g，蔗糖30g，蒸馏水定容到1000ml，加热至沸腾并呈透明状，调PH到5.66.0，分装到洗净的锥形瓶中。培养基灭菌：培养基灭菌一般采

10、用湿热灭菌法，即将分装好的培养基放在高压灭菌锅中，加热，待压力上升到0.5kg/cm2时，打开放气阀排净冷空气，关闭放气阀继续加热使压力稳定在1.11.2kg/cm2，温度为121摄氏度的条件下，维持20分钟，培养基灭菌时间不宜过长，以防引起培养基成分的变化，灭菌后的培养基置于室温下贮存。5.拟采取的实验方案选取宝草锦分化的不定芽。不定芽增殖培养：首先将不定芽取出放到滤纸上，用解剖刀小心将不定芽周围的愈伤组织剔除，然后将不定芽慢慢裁成芽块。将芽块种到具有不同激素配比的培养基上（见表1），每组处理10瓶，每瓶接种3个。把接种好的培养基放到组培室进行培养。表1 宝草锦继代培养培养基1L激素用量表（

11、单位：mg）组别6-BA NAA1 0.50.12 10.13 0.50.154 10.15观察芽块生长状况，计算增殖系数，最后得出宝草锦在增殖培养中最佳的激素配比方案。 增殖系数=增殖芽数/接种芽数主要参考文献1 危梦妮. 多肉植物在中国城市园林景观化应用的探讨J. 美与时代城市, 2015(8): 39-40.2 谢维荪, 徐民生. 多浆花卉M. 北京: 中国农业出版社, 1999: 5-12.3 陈俊愉. 中国农民百科全书(观赏园艺卷)M. 北京: 中国农业出版社, 1990: 248,308.4 PONNUSAMY BASKARAN, ALOKA KUMARI, DEVASHAN NA

12、IDOO, JOHANNES VAN STADEN. In vitro propagation and biochemical changes in Aloe pruinosaJ. Industrial Crops & Products, 2015, 77.5 HASHEMABADI D, KAVIANI B. Rapid micro-propagation of Aloe vera L. via shoot multiplicationJ. African Journal of Biotechnology, 2008, 7 (12): 1899-1902.6 MARFORI E C, MAL

13、ASA A B. Tissue culture forthe rapid clonal propagation of Aloe barbadensis MillerJ. Philippine Agricultural Scientist, 2005, 88 (2): 167-170.7 梁芳, 蒋素华, 王洁琼, 等. 树兰组织培养外植体消毒方法初探J. 中国农学通报, 2015, 31(16): 115-120.8 那淑芝, 张东豪, 甄占轩. 库拉索芦荟的组织培养和植株的快速生根J. 植物生理学通讯, 2003, 39(5): 470.9 赵娟, 王玉国, 尹美强, 等. 植物激素对褐斑伽

14、蓝叶片分化的影响J. 激光生物学报. 2009, 18(2): 200-205.10 宋扬. 冰灯玉露的组织培养与快速繁殖技术的研究J. 现代农科技, 2014(18): 164-166.11 杨杨, 姜虹, 傅华龙, 等. 风信子组织培养研究进展J. 江苏农业科学, 2009(5): 69-27.12 徐凌飞, 庞勇, 周连霞, 等. 兰州百合微繁的研究J. 中国农学通报, 2005, 21(5): 113-115.13 王芳, 沈岚, 朱红芬, 等. 玉簪组培规模化快繁技术研究J. 中国农业信息, 2008(5): 30-31.14 马永红. 野生山丹组培快繁的研究J. 园林科技, 200

15、7(1): 11-14.15 田英翠, 袁雄强. 郁金香组织快繁研究J. 安徽农业科学, 2006, 34(2): 227, 232.16 庞新霞, 岑秀芬, 陈国建, 等. 不同激素组合对东方百合鳞茎组培芽增殖的影响J. 广西园艺, 2008, 19(2): 3-5, 14.17 谢维荪, 徐民生. 多浆花卉M. 北京: 中国林业出版社, 1999, 8-12.18 谢维荪, 徐民生. 多浆花卉M. 北京: 中国林业出版社, 1999, 8-12.19 王成聪. 仙人掌与多肉植物大全M. 武汉: 华中科技大学出版社, 2011: 1-5.20 郭毓敏. 打造中国多肉植物产业J. 中国花卉盆景, 2004(6): 27-29.指导教师审查意见 指导教师（签名）： 年 月 日系论证意见系主任（签名）： 年 月 日二级学院院长审查意见 二级学院院长（签名）： 年 月 日