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1、文件编码：SOP-QC-1022SOP-QC-1022起草人：审核人：日期：日期：生效日期於口口颁发部门：质分发范围：质量部、质控部、档案室量部目的：规范计数培养基适用性检查的标准操作程序。范围：本标准适用于计数培养基适用性检查的操作程序。责任：质控部微生物检验人员负责执行，质控部负责人监督实施。正文：1 1概述：培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节，计数培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素。版本号：00批准人：日期：第1 1页,页码共5 5页基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。3试验用菌株大肠埃希菌CMCC(B441(02金黄色葡萄球菌CMC
2、C(B26003枯草芽抱杆菌CMCC(B63501白色念珠菌CMCC(F98001黑曲霉CMCC(F980034试验用培养基4.1菌液制备用培养基营养肉汤培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基4.2适用性检查培养基营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基酵母浸出粉月东葡萄糖琼脂培养基4.3 4.2中培养基的对照培养基5试验用稀释剂0.9%无菌氯化钠溶液含0.05%（ml/ml聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液6试验用仪器设备恒温培养箱（3035C）、霉菌培养箱（2328C）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平锥形瓶、培养皿（9cm）、量筒、试管及塞、吸管（1ml分度
3、0.01,10ml分度0.1）接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、记号笔、灭菌镣子、不锈钢药匙、白瓷盘。7操作步骤：菌液的制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于3035c培养1824h,取3035c培养1824h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、 枯草芽抱杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml,用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50L100cfu的菌悬液,备用。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，于2328c培养2448h,取于2328c培养2448h的白色念珠菌新鲜培养物1ml,用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml
4、含菌数50100cfu的菌悬液备用。接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于2328c培养57天，加入35ml0.05%(ml/ml聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱，然后， 用适宜的方法吸出抱子悬液至无菌试管内， 用含0.05%(ml/ml聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含抱子数50100cfu的抱子悬液备用。菌液的计数(每种菌液制备2个平皿)大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌的菌液1ml接种至营养琼脂培养基上，3035c培养48h,白色念珠菌和黑曲霉菌1ml接种至改良马丁琼脂培养基上，2328c培养72h,计数。培养基的配
5、制：按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠琼脂（被检培养基和对照培养基）以及酵母浸出粉豚葡萄糖琼脂（被检培养基和对照培养基），灭菌后备用。营养琼脂培养基的适用性检查取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50100cfu）,另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于3035c倒置培养48h,计数；被检培养基同法操作。玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查取5个无菌平皿， 分别接种白色念珠菌、 黑曲霉菌各2皿， 每皿接种1ml菌液 （含菌50100cfu） ,另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照玫瑰红
6、钠琼脂培养基，混匀，凝固后于2328c倒置培养72h,计数；被检培养基同法操作。酵母浸出粉豚葡萄糖琼脂培养基的适用性检查取3个无菌平皿，分别接种白色念珠菌2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50100cfu）,另一平皿不接种菌做空白对照，倾注对照酵母浸出粉豚葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固后于2328c倒置培养72h,计数；被检培养基同法操作。7.4结果判断若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%,且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。8附件：计数培养基适用性检查记录/报告书（SOP-QC-1022-R-019变更历史版本号变更控制号更改
7、内容生效日期附件：计数培养基适用性检查记录/报告书SOP-QC-1022-R-01培养基名称规格琼脂培养被检品检验编号：批号生产单位配制批号g/瓶对照品检验日期年月日检验人报告日期年月日复核人中国药典2010年版微生物限度检查法一、主要仪器设备口！温培养箱DHP120上海试验仪器厂匚霉菌培养箱MJ-160BSH-II上海新苗医疗器械制造有限公司2、菌液的制备取备用菌种的新鲜培养物接种至相应的培养基中依法培养， 将培养物用0.9%无菌氯化钠溶液黑曲霉菌的培养物用含0.05%(ml/ml聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,按10倍递增稀释制成含菌数50100cfu/ml的菌悬液。试验用菌种菌种
8、菌种接种至稀释用溶液稀释级计数cfu/ml传代至口大肠埃希菌CMCC(B441021第代营养肉汤培加基0.9%尢菌氯化钠溶液口金黄色葡萄球菌第代营养肉汤培0.9%尢菌氯化钠g/袋检验依据试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置口3335c培养48h/D23-28c倒置培养72h,计数。另取一平皿不接种菌液作为空白对照。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。2、记录：培养温度：C,培养时间：日时分日时分试验菌生长情况记录表试验菌株CMCC(B26003斤壬溶液口枯草芽抱杆菌营养肉汤培CMCC(B63501斤壬0.9%无菌氯化钠溶液口白色念珠菌改良马丁培CMCC(F98001斤壬0.9
9、%无菌氯化钠溶液CMCC(F98003改良马丁琼脂斜面培养基含 0.05%(ml/ml聚山梨酸酯 80 的0.9%无菌氯化钠溶液三、适用性检查:1、操作:取上述菌液(50100cfu/ml)各1ml立即注入无菌平皿中，立即倾注45C苦养琼脂培匚玫瑰红钠琼脂培力母浸出粉陈葡萄糖琼脂培养基15ml,每株平皿号养基养基率基与小肠1埃希菌2平均值匚金黄色葡萄球1菌2平均值国古草芽%对照培养基菌落一致形态大小比较致一致致一致杆菌2平均值M色1致1念珠菌小一致2平均值口！曲霉致1菌小一致2平均值判定标被检培养基上的菌落平均数不小于对准照培养基上的菌落平均数的70%,且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致匚被检培养基符合规定。结论匚被检培养基不符合规定。四、检查报告：本品按照中国药典2010年版微生物限度检查法进行适用性检查检验，结果CW合规定由符合规定。
1022计数培养基适用性检查标准操作规程
