液相基本术语及操作

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1、液相色谱检测1仪器的基本常识及术语1.1仪器结构：液相色谱仪主要包括泵、进样器、色谱柱、检测器；1.2 仪器分类：液相色谱仪属于精密仪器中的色谱仪器；按照分为离机制，吸附、分配、离子交换、亲和色谱，体积排阻色谱； 按照流动相与固定相的极性，分为正相色谱法和反相色谱法；122 高效液相色谱法的应用围：高效液相色谱法适用于高沸点不易 挥发、受热不稳定易分解、分子量大的，不同极性的有机化合物，生 物活性物质和多种天然产物，合成的和天然的高分子化合物等。1.3仪器检定：液相色谱仪检定周期为1年，在两次检定间期进行一次 期间核查，也可以根据情况增加核查次数；1.4维护保养：对于液相维护方式主要是周维护和

2、日维护，其中周维 护包括联机系统及中工作站软件维护、数据库整理备份、检测器自检、维护单向阀、溶剂砂芯滤头、进样器、电机泵检查维护、溶剂瓶清洗 等；日维护包括环境温度、环境湿度、色谱柱温度、压力流速、进样 口是否洁净、进液处的砂芯过滤头是否洁净、流动相交换时是否有沉 淀；1.5色谱法的常用基本术语基线：在色谱操作条件下，没有被测组分通过鉴定器时，记录器所记录的 检测器噪声随时间变化图线称为基线 .死时间，保留时间及校正保留时间：从进样到惰性气体峰出现极大值的时间称为死时间，以td表示.从进样到出现色谱峰最高值所需的时间称保留时间，以tr表示.保留时间与死时间之差称校正保留时间以Vd表示.死体积，

3、保留体积与校正保留体积：死时间与载气平均流速的乘积称为 死体积，以Vd表示，载气平均流速以Fc表示,Vd=tdxFc.保留时间与载气平 均流速的乘积称保留体积，以Vr表示,Vr=trxFc峰面积：流出曲线(色谱峰)与基线构成之面积称峰面积，用A表示. 拖尾因子：是反映峰对称性的指标，计算公式：拖尾因子T=W0.05h/2d1 (其中W0.05h为5%筆高处的峰宽，di为峰顶点至峰前沿 之间的距离)。峰高与半峰宽：由色谱峰的浓度极大点向时间座标引垂线与基线相交 点间的高度称为峰高，一般以h表示.色谱峰高一半处的宽为半峰宽，-般以x1/2表示；1.7色谱检测的特性(1) 灵敏度高；(2) 线性围宽

4、；(3) 分离度与柱效、选择因子、容量因子、分析时间的关系：(4 )分离度与柱效的平方根成正比，选择因子一定时，增加柱效；(5) 分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分离柱温度、柱压的改变而变化：一般通过改变固定相和流动 相的性质和组成或降低柱温，可增大选择因子；(6) 增大选择因子的最有效方法是选择合适的固定液。对于液相色谱，改变流动相的组成，可以有效控制k ；2仪器的操作规程2.1日立液相设备 L-2000/2400操作规程2.1.1使用环境环境温度：4 C 55 C；相对湿度：小于95%RH2.1.2使用前准备检查所用溶液(如流动相，乙腈等)是否足够。 检查线路是

5、否连接正常。2.1.3设备操作方法具体操作如下：(1) 依次开启泵开关，检测器开关，自动进样器开关， 柱温箱开关；(2) 打开软件，点击“i”按钮，出现联机界面，点击initialize ”ni?aiz按钮，当文本框出现文字时，表示联机成功;(3) 检查所用方法是否符合要求。如不符合，进行设置；开泵。检测具体操作如下：(1) 建立所需样品盒；(2) 点击检测按钮，选择刚建立的样品盒；(3) 首先进行走基线；(4) 当基线走平时，点击系列样品检测按钮，进行标样，样品检测;(5) 当标样检测结果出来时，打开结果窗口，选择所需标样结果，点击“ Recalculateri:k ?Ikjuleit进行重

6、新计算，然后点击“ Calibration ” k? librei ?i进行定标；(6) 当样品结果出来时，打开结果窗口，选择所需样品结果，点击“Recalculate ” ri:k ? lkjuleit进行重新计算，然后点击ModifyReport ” m?difai, rip?:t,，出现结果报告，即可查看样品具体结果。2.1.4更换流动相具体操作如下：(1) 当流动相快不够时或异常时，及时更换流动相；(2) 先把泵关闭，将流动相入口放入新流动相中；(3) 将泵阀逆时针旋转，进行排气。大约3分钟后，关闭排气功能；(4) 排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵；(5) 走基线，当基线走平时，

7、开始做标样，做样。2.1.5关机具体操作如下：(1) 先把泵关闭，将流动相入口更换为超纯水；(2) 将泵阀逆时针旋转，进行排气。大约3分钟后，关闭排气功能；(3) 排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵；(4) 用超纯水冲洗管路大约20分钟；(5) 把泵关闭，将超纯水更换为100%甲醇或100%乙腈；(6) 将泵阀逆时针旋转，进行排气。大约3分钟后，关闭排气功能；(7) 排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵；(8) 用100%甲醇或100%乙腈冲洗管路大约30分钟；(9) 关泵，关液相软件，关泵开关，检测器开关，自动 进样器开关，柱温箱开关。2.1.6维护保养、注意事项(1) 进行旬维护检查

8、工作，主要检查事项：软件是否正常、温度、 清洗、进样器、泵单元；(2) 每次测量前进行标样检测，斜率达到99.99%要求才能检测样品，测完样品及时清理。(3) 按要求进行每天2个小时以上的清洗。2.2 Waters 高效液相色谱-2695/2489 2.2.1开机自检具体操作如下：(1) 打开 Alliance ?lai ?ns 2695 和 2489 的电源开关至 ON (1)的位 置，仪器开始进行自检；(2) 仪器将进行大约5分钟的自检过程，待仪器自我测试完毕后，出现以下画面，画面上方的状态显示区会出现“Idle ” aidl状态，表示开机测试正常。2.2.2流动相有机溶剂要求用色谱纯(进

9、口名牌最好)，水或缓冲盐溶液要用超纯 水(电阻率：18.2M Q),每48小时制备新鲜的水相流动相，尤其是100%含 水流动相使用时间不超过两天。6根管子都在液面以下。溶剂的位置必须高于溶剂混合阀(Gradient Proportioning Valve)。greidi?nt pr?p?:?ni? v? Iv清洗柱塞密封垫(Seal Wash) si:i w?的溶液：含5% 10%甲醇的超 纯水。洗针液(Needle Wash) ni：d?iw?|: 50%甲醇：50%水(该比例仅适用 于反相试验)。注：以上溶剂或溶液均需用0.45 pm的膜过滤并超声脱气1分钟，用 洁净的玻璃容器盛放，避免污

10、染，同时玻璃容器应用超纯水来清洗而不 能用自来水。2.2.3灌注柱塞密封清洗清洗操作步骤：回到Menu menju：画面，选择Diag ;(2) 确定Seal Washsi:l w?的管路放在正确的位置；(3) 按 Prime Seal Wash praim si:i w ?习，再按 Start，直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，按Halt; h?:lt(4) 按 Close。注意：密封圈清洗(Seal wash) si:i w?|溶剂，在反相液相色谱中可 使用 Water/MeOH methyl alcohol 甲醇 =90/10 或 Water/Acetonitrile? sit?un

11、aitril乙腈=95/5(根据实际需要使用不同溶剂)。2.2.4灌注针头清洗操作步骤：回到Main mein的画面，选择Diag ,选择Prime praim Ndl Wash。设定值为30秒，若想要多清洗几次时，请按 Start Again。清洗溶剂：50%的甲醇溶液注意：若上述清洗溶剂无法避免进样时的交叉污染，使用较强的 溶剂系统来进行清洗操作。2.2.5打开真空脱气机如液相仪管路干，可进行使用，如管路不干则按照以下步骤进行操作：按“Menu/Status ” steit?s键，进入Status (1)画面；利用方向键将 光标移至“ Degasser ” di：g?s?位置，按Enter

12、 ;利用上下键选择模式为 ON。注意：在开启除气装置时，要确认所有溶剂管路都充满溶剂；若没有溶剂时请执行溶剂的Dry Prime drai praim操作。226执行干灌注确定流动相溶剂的管子放在正确的位置，检测器(Detector ditekt?)废液管及定量环(Sample Loop iu：p)的废液管是否放置于适当的废液容 器中。摇动溶剂瓶的过滤器(Solvent Filter) s?iv?nt fiit ?，防止气泡附着在 过滤器的外表面。将空的针筒插入抽液阀(Prime/Vent value)中，以逆时针的方向旋 转3圈。按 Menu/Status ” steit?s键，进入 Sta

13、tus(1)画面，按 Direct Function ” direktf?k?n功能键，选择 Dry Prime，按 Enter。按下面使用的溶剂开启阀门(例如:Open A)，然后将针筒向外拉， 抽出510mL溶剂并完全抽出溶剂管子的气泡，完成后关闭 Prime/Vent 阀门。在 Enter a duration ” djurei ?n中输入 3分钟，按 “Continue ” 键，泵 即以3.0mL/min的流速进行清洗(Purge)。可重复上两个步骤，将所要使用的流动相溶剂Dry Prime。2.2.7执行湿灌注按Menu/Status ”键，进入Status(1)画面，利用方向键将光

14、标移至 Composition ” k?mp?zi?n字段，将欲 Wet Prime 的溶剂输入 100%按 Direct Function ” direkt f?k?n功能键，选择 Wet Prime ,按 Enter。Wet Prime 的原设定值，一般为 Flow Rate:7.5mL/min , Time: 3.0min，然后按下“OK”键，泵即开始进行Wet Prime操作。重复上述的步骤直到所有溶剂Wet Prime进行完毕。2.2.8设定流动相平衡色谱柱按Menu/Status ”键，进入Status (1)画面，利用方向键将光标移 至Composition ” k?mp?zi?

15、n字段，利用仪器面板右侧的数字键设置试 验要求的溶剂组成比例，此时会在原溶剂比例表的下方出现新编辑溶 剂比例表(New Composition)。设定好新的溶剂组成比例后，按Change Comp ” t?eind? k?mp功能键(改变溶剂组成比例change composition),此设定的溶剂组成比例即为当前的比例。利用方向键将光标移至“ Flow” fi?u字段，利用仪器面板右侧的数 字键设定流速，此时仪器即设定的溶剂组成比例和流速来平衡色谱柱。特别提示：对于常规的反相色谱试验至少要用30倍柱体积来平衡，而对于离子对色谱的平衡可能需要多达500柱体积的流动相来平衡。229冲洗进样器溶

16、齐 管理系统的前处理 (Prime the solvent management system) 要求如下：(1) 改变溶剂；(2) 发现注射针头有气泡；(3) 每天开机的时候。冲洗进样器执行步骤：(1) 按Menu/Status ”键，进入Status(1)画面，在设定溶剂的画面中 设定适当的流速与溶剂比例；(2) 按 Direct Function ” direkt f?k?n键，选择 Purge Injector p?：d? ind ?ekt?，按 Enter;(3) 输入Sample Loop体积清洗的倍数(原定值为6倍)，按Enter;(4) 压缩测试(Compression Che

17、ck)请先不需要测试，设定完成后按 0K。2.2.10 放入样品盘打开计算机，运行Empower impau?软件，选择存放数据文件的Project，运行 Run Samples ; 按 Develop Methods divel?p me b?按钮， 建立方法；按Monitor m?nit?按钮，观察基线，待基线平稳，可准备进 样。2.2.11 关机首先关闭检测器电源；在 2695溶剂槽中换上适当的清洗溶剂，清 洗系统约60分钟(针对离子对试验，建议 50%乙腈：50%水 1mL/min流速 冲洗色谱柱2小时以上)；按2695面板Diag键，选择Prime SealWash , 清洗泵头约1

18、分钟；再选择Prime NdlWash，清洗进样针12次；按 Menu/Status 键进入手动控制模式，按Direct Function direkt f ?k?n键，选择Purge Injector p?:d? ind?ekt?，冲洗进样器(针对离子对试验，建议 设定50%乙腈：50%水的溶剂来冲洗进样器)；降低流速至0,待系统压 力回零后，关闭2695电源，关闭计算机及显示器电源。2.3岛津LC-20AT液相色谱仪操作规程2.3.1准备工作在开机之前，根据所做样品的方法要求，准备好所用流动相，标 样及样品。流动相抽滤后超声脱气15分钟，标样和样品0.45um膜过滤。打开 LC-20A X

19、2SETS,CT0-lOASvp , SPD-M20A（或 RF- 10AXL）电 源，待自检通过。打开SCL-10Avp电源，检查开机屏幕应显示各单元，如果某单元 没有显示，则不能控制该单元，需按键取消屏幕Fixed标志即可显示并控制该单元。否则检查通讯设置。打开计算机电源或重新启动计算机，待正常进入WINXP操作系统。排空操作：打开LC-20AT泵排空阀（逆时针180度以上），按Purge 键，泵开始排空运行。检查流动相入口 Teflon管路没有气泡后，再按Purge |键停止排空。 压力调零：如果purge时，压力不为零，需要进行压力调零，按LC-20ATvp泵|Func |键选择 CO

20、NTROL项，按|FUNC |键直至屏幕显示 *ml ZERO ADJ |项，按Enter |键，再按 CE键，即完成调零。然后关 紧排空阀（顺时针旋紧）。在计算机中双击 LC SOLUTION图标，进入工作站。再双击 Operation Analysis 14进入实时分析窗口 （根据不同的 检测器选择）。在开机画面中，User ID选中Admin，不需输入 Password，点击 OK（可听到峰鸣一声），在下面操作中A B表示在A菜单下选择B，以 此类推。选中表示在中打号。在左侧助手栏给出了引导顺序操作的图标，自上而下顺序执行即 可（可以跳过执行）:（System configuration

21、 系统配置（第一次安装或更换检测器时配 置，通常跳过不操作）;（2）System Check编辑仪器检查参数：并且RUN运行检查。通常不操作（跳过）;（3）点击Data acquisition进入采集数据编辑方法界面 点击Instrument Parameter 进入仪器参数设置界面：选中Normal（通用简单）或 Advanced（高级详细）项，分别设定 Pumps泵参数，Oven柱箱参数，Detecter检测器参数，Controller系 统控制器参数，Time Program时间程序参数等。仪器配置不同，控制 单元项的数目多少不同；Pumps泵参数:Mode控制方式，Flow流速，B，C

22、，DConc 各项浓度，P Max最大压力；Oven柱箱参数：Oven设定温度，T Max最大保护温度；Detecter检测器参数：Cell设定池温。Wavelength设定波长； Controller系统控制器参数；Data acquisition 选中 Acquisition Time 后，设置分析时间， 等等；LC Time Prog时间程序参数：编辑泵梯度洗脱程序，也可以控制柱箱，检测器等等；（4）点击 Method Data Analysis Parameter 编辑积分参数：设置 Width峰宽,Slope斜率，Min Area最小峰面积等等。新建方法推荐 使缺省值，待分析完样品后

23、再设置此项参数，得到优化的色谱数据结 果后，将参数保存在当前方法中；（5）保存方法：点击 File Save Method as如图：起文件名*保 存后，该方法即作为当前运行的方法（6 ）下载方法：点击 Down Load键，向仪器传送参数。2.3.2运行方法可以观察Detecter检测器吸收变化，点击如图图标（Instrument On/Off系统 开/关）系统开始运行，检 查各单元参数应与方法设定一致。等待系统平衡。一般情况下，由于 流动相不同，交换平衡时间不定如果吸收值稳定不变，即认为接近平衡，可以调零等待，确认不变后，准备进样分析。可以通过改变衰减或予览基线观察基线变化，待基线 平稳（

24、初始化显示时与横轴平行），准备进样操作。2.3.4进样分析如下：(1) 单针进样分析：如图点击Single Start图标：出现如下采样对话 框；(2) 编辑样品参数：Sample ID样品信息，Method Name 方法文件 名，Data Path 数据存储路径，Data Name 数据文件名，Vial样品瓶 号(无)，Tray#架号(无)，Injection进样量等；(3) 点击OK后，开始进样操作(重复单针进样，重复执行第7步 骤即可)；(4) 每个样到时间分析结束，根据方法中的积分参数，所有色谱数 据会自动进行积分处理。235报告予览和打印O点击Top返回上级引导操作栏。点击Post

25、 Run Analysis进入数据后处理界面：点击report进入报告界面：点击 report format进入格式界面：调入报告格式文件也可以自己编辑报告格式，然后点击 Data打开数据文件，将左侧数据文件拖入右侧报告栏即可。关于报告 格式，可以通过容选择图标，在报告中确定位置后，添加即可。右键 功能很强大，用户可以参考说明书灵活使用。选择快捷图标的预览或 打印图标执行报告预览或打印。236关机步骤如下：(1) 更换洗液清洗流路系统(如用缓冲液，先用水清洗1小时，再用 有机溶剂清洗30分钟以上)，最后用有机溶剂封存；(2) 清洗结束后，停止系统运行，在LC SOLUTION工作站中，按Ins

26、trument on/off 键即停止所有单元工作；(3) 退出LC SOLUTION可听到峰鸣一声)，再完全退出；(4) 关系统控制器SCL-10Avp电源开关；(5) 关主机 SPD-M20A(或 RF-10AXL)检测器，LC-20AT 泵， CTO- 10ASvp柱箱电源开关。237清洗流路系统要求如果使用缓冲液，先用水更换缓冲液，清洗1小时，然后更换甲醇清洗40分钟；如果使用有机溶剂(水)，直接更换甲醇清洗 40分钟 即可。2.4安捷伦高效液相色谱操作规程2.4.1开机打开计算机，进入Windows XP（或Windows 2000）画面，并运行 Bootp Server 程序。打开

27、1100 /1200LC 各模块电源。待各模块自检完成后， 双击Instrument 1 Online 图标，化学工作 站自动与 1100LC/1200LC。从 View ”菜单中选择“ Method and Run controI ”画面，单击” View ”菜单中的 Show Top Toolbar ”，Show status toolbar ”，System diagram ”Sampling diagram ”使其命令前有标志，来调用所需的 界面。把流动相放入溶剂瓶中。打开Purge阀。单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump 选项，进入泵编辑画面。设 Flow :

28、 5ml/min，单击 OK。单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击 Pump control选项， 选中On，单击OK，则系统开始Purge ,直到管线（由溶剂瓶到泵入口） 无气泡为止，切换通道继续Purge ,直到所有要用通道无气泡为止。单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off,单击Ok关泵，关闭Purge valve。单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入Pump编辑画面，设 Flow : 1.0mL/min。单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入 停泵的体积，单击Ok。2.4.2关机关机前，用1

29、00%的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系 统10分钟（如 ACN），然后关泵（适于反相色谱柱，正相色谱柱用适当 的溶剂冲洗）。退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut down 关）。关掉 Agilent 1100/1200 电源开关2.5 C8柱修复操作规程2.5.1目的为节约检测成本，同时统一操作方法，特制定本作业指导书。2.5.2适用围本标准适用于爱杰尔、天津兰博生产的C8柱修复方法（其它厂家可以尝试使用）。C8柱使用一段时间后， 会出现柱压高、峰变形问题， 大部分的原因为 C8柱污染，通过对污染 C8柱柱头过滤网进行超声清 洗，然后再生，解决问题。2.5.3工具、试剂

30、2个扳手，1把钝剪刀。乙腈（色谱纯）、异丙醇（色谱纯）。2.5.4修复过程（1）将故障C8柱柱头处拧开用2个扳手将C8柱两柱头拧开，取下两端柱头。用钝的剪刀夹住塑料封口，取下塑料封口，过滤网就在封口处。观察C8柱填料是否有污染，如有污染，用干净的滤纸轻轻擦掉污染物。注意：只能擦去表面一层填料，不能太多，否则会损坏柱子两端端口图1： C8柱图2： C8柱部塑料封口，有过滤网（2）对两端柱头进行超声清洗（或者对另一支旧C8柱的后端柱头进行清洗，并代替此C8柱前端柱头）准备小烧杯，倒入10%乙腈，然后将第一步取出的两端柱头 （包括 过滤网）放入烧杯，超声半小时；然后将 10%乙腈更换为100%乙腈超

31、 声半小时；最后将100%乙腈更换为超纯水，超声半小时。或者将以前O（3 ）安装柱子将过滤网放入塑料封口处，安装塑料封口，用扳手拧紧柱子。（4 ）连接柱子，进行再生然后将C8柱装到液相色谱仪，等基线走平后，进标品。观察峰形、柱压等是否正常，如果正常则可以不进行此步骤，否则进行再生：（1 ）用10%乙腈冲洗30分钟，流速为 0.6ml/min。（2）用100%乙腈 冲洗2小时。流速为1.0mlmin。（ 3）用100%异丙醇冲洗2小时。流速 为0.5mlmin。（4）用100%乙腈冲洗 2小时。流速为 1.0mlmin。（5） 用10%乙腈冲洗30分钟，流速为0.6ml/min，然后换上流动相，

32、然后 走流动相，等基线走平后，进标品。（5）验证修复效果验证方法（1 ）观察柱压，柱压正常。（2）观察标品出峰情况，峰形良好。（3 ）进行回收率验证，回收率达到85%-105%通过以上方面，说明修复成功，此C8柱可以继续进行使用。（6 ）注意事项拆装C8柱注意事项清洗手，防止污染柱子部。拆装柱子时，防止柱头部螺纹变形。2.5.5连接C8柱与液相色谱仪注意事项连接C8柱入口与液相色谱仪，打开泵，使C8柱出口流出液体，冲5分钟，连接C8柱与液相色谱仪检测器端。防止有异物流入检测 池。3色谱检测的项目和关键控制点3.1样品检验流程图f核实出具结果LJ再次核实记录检令验结检验计划4输入unliab核实

33、出具结果r上机检测样品（1）核实检验计划认真核实检验计划，明确检验项目和批次， 核实可以开展的项目。（2 ）样品接收经相关检验人员对送检信息及样品的符合性确认后在送检单上签 字，检验人员即可进行样品的检验。（3 ）样品确认注意检查样品规格、型号、商标、批次等级容是否清楚，状态是 否完好、变质、污染等。如发现有任何问题，要询问送检单位。（4）记录样品信息将样品名称、批次、送样日期等信息完整的记录到带有编码的原 始记录上，要尽可能的保证信息的完整性，和可追溯性。（4）样品前处理按照相应的检验方法进行处理，并做好记录。（5）上机检测样品待仪器平衡完毕后，装满洗瓶的清洗溶剂（清洗溶剂要当天用当 天配置

34、），根据作业指导书或者国标，走标准曲线或者单点，上机即可（6）记录检验结果仪器走完样品后，根据峰的保留时间定性，峰面积定量，如实记 录检验结果于原始记录中， 原始记录按方法要求进行实际记录检测值。（7）核实出具结果对于外部样品的检测，记录好检验结果后，核实无误后即可出具 检验结果。（8）核实检验计划对于部样品的检测，输入结果前需再次核实检验计划，保证没有 漏检后方可输入检验结果。（9）输入 unliab打开unliab系统，选择正确的样品类型和业务类型，创建样品， 创建完毕后如实填写 unliab系统中的信息卡，正确分配检测项目，输 入结果。结果报出时，检测结果在检出限以下时，均报未检出；检测

35、 结果在检出限以上时，报实测值。如检验处均使用程序输单，则要求各岗位的输单密码不能外漏； 结果输入后不允许随意改动，如需修改则上报直属领导同意后则 进行修改，其他人员无权修改；所有过程检验结果均在出具结果的当班下班前提交系统或输入固 定文件夹中；按照规定的程序进入预定的表格，不允许输入的容和文件名称不 对应、存在相同或能引起误解的名称，不能保证储存的唯一性。检验报告储存要求：如使用Unilab系统出具结果，由于起系统有自动保存功能，故不需要对其进行下载保存，其他电子版检验报告要 求每半年进行备份刻盘一次。3.2三聚氰胺检测原理：试样用三氯乙酸溶液-乙酸铅提取，经阳离子固相萃取柱净化后，用高效液

36、相色谱法测定，外标法定量。三聚氰胺检验方法流程图：接样-称量样品-加0.1%三氯乙酸50mlt加0%乙酸铅2ml 超声20min 离心10min (8000r/min )过混合型阳离子交换柱净化氮吹 20%甲醇溶液定容 1ml 0.45um 过滤 上机。3.1.1称量样品：严格按照天平的使用规程操作即可。具体如下： 天平使用前检查：(1) 准备使用天平时观察周围是否存在震动的情况，如果存在应在震动 结束后再称取样品。检查天平的使用环境是否符合温度1030 C、湿度2585 %的要 求，水平泡是否处于中央位置 打开天平，待天平完成自检显示“ 0.0000 ”时，可以使用(4)对于过冷、过热和含有

37、挥发性及腐蚀性的物体，不可放入天平称量，被测物不得超过天平最大的负载。322称量(1) 将被测物放在称盘中央，待显示器左侧边的“O”标志熄灭后，该数 字即为被称物的质量；(2) 如称量需盛放物质，先称量容器，按TAR键，显示为零即去皮，再置被称物质于容器中，这时显示的是被称物的净重；(3) 每次称量时都应将天平门关闭，称量样品过程中，避免出现抽拉抽屉、人员走动、倚靠实验台等对结果有影响的动作；(4) 称量完毕后关闭天平开关，但不必断掉电源；(5) 称样时所使用的离心管等要编号与样品一一对应，并且记录下样品 的质量；3.2.3加药品3.2.3.1加入药品时注意要边加边摇，让药品与样品充分接触，使

38、粉末 状样品充分的溶解在药品中。3.2.4超声处理：超声样品时执行超声波操作规程即可。具体如下：3.2.4.1工作前准备：(1) 检查电源连接线是否有破损，电源插头是否插入220V的三芯电源插座并连接牢固；(2) 检查清洗槽是否有异物；(3) 检查排水阀门是否关闭；3.2.4.2超声处理：(1) 样品在超声时要求超声波清洗机中的液面一定要高于样品的液面(2) 时间控制符合要求；(3) 样品超声处理完成后，关闭电源开关，将槽水放净，并将机体擦洗干净；断开电源，让机体自然散热；3.2.5离心样品：样品离心时执行离心机的操作规程即可。如下：(1)检查电源及数据线连接是否牢固，打开仪器电源，设定所需温

39、度 待温度达到设定温度时，打开仪器上盖，将需离心的样品对称放入 离心机，关闭仪器上盖，设定转速，设定运转时间，点击开始离心(3) 离心结束后将样品取出，如暂时不使用，需将仪器上盖盖好，如长 时间不使用，需将腔体冷凝水清理后，关闭仪器电源；3.2.6过混合型阳离子交换柱样品离心时准备好所需要的阳离子小柱和试管并一一编号。离心结束 后活化阳离子小柱、上样、淋洗等。整个萃取过程要求衔接紧密不可 以使小柱干燥，并且每一种液体按要求控制流速在1ml/min左右;3.2.7氮吹:执行氮吹仪操作规程即可，具体如下：3.2.7.1用前检查(1) 检查电源线路是否正常；(2) 检查氮气连接管路是否正常；检测氮吹

40、针是否清洁，并进行必要的清洁工作；3.2.7.2 使用(1)连接电源，打开氮吹仪开关，调节温度，准备升温；将针头放置好，调节氮气流路畅通。将氮气开关打开，使用调压阀调节氮气流速适合；(3) 待温度和压力达到检验要求，则放置样品；调节针头位置(距离液面1-2cm)，使氮气开始吹干样品；样品吹干后，关闭氮气。关闭氮吹仪开关，取下电源插头；(6) 取出样品；327.3注意事项(1)注意保持氮吹仪清洁，氮气管路一定要连接紧密；三聚氰胺要求氮吹的温度是50 5 (C)，并且吹针要用甲醇擦拭干净，防止样品间交叉污染，氮气流量以液面有轻微的波动即可，不可 以吹的液面飞溅。并且所使用的试管是玻璃的，在氮吹时小

41、心不要发 生强烈得磕碰，以免碰碎试管；3.2.8浓缩完全的吹干后用所需的溶液 1毫升定容，漩涡1分钟，过相应的 0.22um或0.45um针头过滤器(针头过滤器分水系和有机系)缓慢地过 滤样品到已经一一编号的进样瓶中准备上机。3.2.9上机仪器参考条件：流动相：离子对缓冲盐：乙腈=90:10流速：1.0ml/min柱温：40 C检测器：紫外检测器。波长;240nm进样量：20ul备注：以上仪器条件是参考条件，在实际操作过程中可以根据样品特性和仪器状态做适当调整；3.2.10此方法的检出限 2mg/kg3.3山梨酸、苯甲酸3.3.1山梨酸、苯甲酸检测原理：去除试样中脂肪和蛋白质，甲醇稀释，过滤后

42、，采用反相液相色谱法奋力测定。3.3.2方法检测流程图：称量样品-加入0.1M氢氧化钠溶液25ml -超 声水浴15min -调节PH到8-分别先后加入2ml亚铁氰化钾溶液和乙 酸锌溶液-剧烈振摇，静止15min -用甲醇定容，静止15min -过0.45um滤膜过滤取清液上机3.3.3色谱参考条件：色谱柱：C18,250mm*4.6mm , 5um流动相：甲醇：磷酸盐缓冲溶液=1 : 9流速：1.2ml/min检测波长：227nm柱温：室温进样量：10ul3.3.4山梨酸、苯甲酸检出限1mg/kg3.4安赛蜜、糖精钠3.4.1安赛蜜、糖精钠检测原理：样品中安赛蜜、糖精钠经高效液相反相柱C18

43、分离后，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。3.4.2方法流程图：称量样品加入氢氧化钠溶液25ml宀超声15min-调节PH到8 (用0.5mol/l的硫酸)-分别先后加入 2ml亚铁氰化 钾和乙酸锌溶液振摇静止 15min 加入40ml甲醇定容到 100ml -静止15min 0.45um有机滤膜取清液过滤上机检测。3.4.3仪器参考条件：柱温箱：30-40 C紫外检测器：230nm进样量：20ul和10ul色谱柱：C18 或 C8 (250*4.6mm,5um )流速：1.0ml/min备注：以上仪器条件是参考条件，在实际操作过程中可以根据样品特性和仪器状态做适当调整。3.4.4安赛蜜、糖精

44、钠的检出限3mg/kg3.5对羟基苯甲酸乙丙酯3.5.1对羟基苯甲酸酯类检测原理：试样用甲醇超声波提取，取上清液 过滤，以高效液相色谱分离，二极管阵列检测器检测，外标法定量。3.5.2 依据 DB37/T1100-20083.5.2方法检测流程图：称取样品于25ml比色管加入15ml甲醇漩 涡2min 超声10min 用甲醇定容至 25ml 静止分层，取上清液经 0.2um有机滤膜过滤上机检测。3.5.3仪器条件：色谱柱：C18 柱，250*4.6nm流动相：甲醇：0.02mol/l乙酸铵溶液=60:40流速：1.0ml/min 柱温：35 C进样体积：10ul检测波长扫描围：210nm-40

45、0nm，定量波长256nm。3.5.4本方法检出限为 1mg/kg3.6山梨酸、苯甲酸、安赛蜜、糖精钠、对羟基苯甲酸乙丙酯的前处理 很相似，注意事项统一为：3.6.1超声时液面应高于样品的液面。3.6.2亚铁氰化钾和乙酸锌的位置不能调换。3.6.3用力振摇。3.7食品中合成着色剂的测定3.7.1食品中合成着色剂的测定原理：食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。3.7.2检测方法流程图：样品称取20.0g-40.0g于100ml烧杯中-加柠檬酸溶液调PH到6t加热至60 C将1g聚酰胺粉加少许

46、水调成粥状后加入式样溶液中-搅拌片刻-用 G3垂融漏斗抽滤-用 60 C PH=4的水洗涤3-5 次 甲醇-甲酸混合溶液洗涤3-5次用水洗至中性用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3-5次，每次5ml -收集解吸液-加乙酸中和-蒸发至近 干-加水溶解-定容至5ml -经0.45um滤膜过滤-取10ul进高效液相色谱仪3.7.3仪器条件：3.731 柱：YWG-C18 10um 不锈钢柱 4.6mm (i.d) *250mm3.7.3.2流动相：甲醇：乙酸铵溶液(PH=4,0.02mol/l )3.7.3.3 梯度洗脱：甲醇：20%-35% 3%/min； 35%-98% 9%/min ； 98% 继续

47、6min。3.7.3.4 流速：1ml/min。3.7.3.5紫外检测器：254nm波长。3.7.4方法检出限：新红5ng、柠檬黄4ng、苋菜红6ng、胭脂红8ng、 日落黄7ng、赤藓红18ng、亮蓝26ng、当进样量相当 0.025g时，检 出浓度分别为 0.2mg/kg ； 0.16mg/kg ； 0.24mg/kg ； 0.32mg/kg ； 0.28mg/kg ； 0.72mg/kg ； 1.04mg/kg。3.8色谱仪器检测器使用注意事项：3.8.1不要挡住检测器散热风扇和通风孔；3.8.2不要随意更改检测器进、出口管路；3.8.3检测器使用前、后均应充分清洗参比池(Purge )

48、;3.8.4长时间停用检测器时，应在检测池中充满甲醇或乙腈;3.8.5必要时密封检测器进、出口管路；3.8.1打开样品仓盖后，等待样品盘停止转动后再取出；3.9 进样器使用注意事项3.9.2关机前取出所有样品瓶，或将样品盘全部取出；3.9.3注意保持样品仓和样品盘清洁；3.9.4请使用Waters公司认可的样品瓶；3.9.5使用微量进样瓶请设定正确的针尖高度值( Depth of Needle3.9.6进样瓶垫损环后，请勿使用其它替代品；3.9.7称量前的检查同三聚氰胺的检测；4岗位安全4.1前处理所使用的药品包括甲醇、乙腈、三氯乙酸、乙酸铅、氨水等， 这些药品有的易燃易爆，有的属于毒害品，有

49、的具有腐蚀性，所以在 使用相关的药品时要了解 MSDS上对该药品的理化性质的描述以及相 应的防护措施，通风厨操作规程如下：(1) 检查电源连接是否牢固；(2) 使用时打开开关键，开始工作；(3) 工作台面上禁止存放不必要的物品，以保持工作区的气流不受干扰；(4) 新安装的或长期未使用的通风橱，必须认真进行清洁工作。长期不 使用的通风柜应断开电源；(5) 禁止在工作台面上记录书写，工作时应尽量避免作明显扰动气流的动作；使用完毕后关闭开关键即可。5 常见的问题5.1.1三聚氰胺标准峰出现异常、拖尾，未及时进行解决均直接给予样品的检测。解决措施：通常标准峰型出现异常时针对以下方面进行排查：(1)当时

50、使用的药品是否存在问题。(2 )软件设定是否有变化。(3 )色谱柱是否使用寿命到期进行更换。5.1.2检测结果计算错误。解决措施：严格按照作业指导书及国标的计算公式进行计算。5.1.3防腐剂的检测原始记录体现峰面积与实际谱图峰面积存在不 符，苯甲酸与山梨酸样品在标品保留时间执行不一致，致使检测结果 准确性存在隐患。解决措施：当时检测当时给予记录。5.1.4苯钾酸、山梨酸检测过程中，乙酸锌药品配置错误解决措施：仔细查看国标并以此为检测依据，不得随意更改 国标。5.1.5三聚氰胺回收率检测纯奶本底未使用液相法进行检测 解决措施：回收率检测要求样品本底与加标的样品采用同种检测方法 检测，即均使用液相法进行检测。