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1、44XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 文件编号：LABOPMY020第 页，共 页 版本：A/0生效日期：2008-02-01Elecsys E 170/E 411孕酮(PROG )1. 分析原理采用竞争法原理，整个过程18分钟完成。 第1 步：30 l 标本、生物素化的抗孕酮抗体、钌（Ru）标记的孕酮衍生物与达那唑（Danazol）混匀，释放孕酮。标本中的孕酮与标记的孕酮衍生物同时竞争抗体上的结合位点。 第2 步：加入链霉亲和素包被的微粒。形成的免疫复合物通过生物素、链酶亲和素之间的反应结合到微粒上。结合到固相上的标记的孕酮衍生物数量与标本中的孕酮含量成反比。 第3 步：反应
2、混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2 点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。2. 标本要求血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素（锂、纳）、EDTA-K3 、枸橼酸钠或氟化钠/草酸-K 抗凝均可。如用枸橼酸钠抗凝，结果应+10%。标本在2 o C8 o C 可稳定5 天，-20 o C 至少可稳定6 个月。只能冻融一次。含沉淀的标本使用前需离心。不要加热灭活标本。标本和质控液禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放
3、入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1 瓶，6.5ml 。链霉亲和素包被的微粒浓度0.72mg/ml，生物素结合能力：470ng 生物素/mg 粒子。含防腐剂。R1：生物素化的抗孕酮抗体（灰盖），1 瓶，10ml 。生物素化的抗孕酮抗体浓度0.15mg/l，磷酸缓冲液0.025mol/l，pH7.0 。含防腐剂。R2：钌（Ru）标记的孕酮-多肽（黑盖），1 瓶，8ml 。钌（Ru）标记的孕酮-多肽浓度10ng/ml，磷酸缓冲液0.025mol/l，pH7.0 。含防腐剂。其他所需材料
4、：常规实验设备Elecsys E 170/E 411Elecsys 系统清洗液（SysClean）,货号11298500 Elecsys E 170分析仪所需材料:Elecsys 系统缓冲液 （ProCell M）,货号12135019Elecsys 检测池洗液（CleanCell M）,货号12135027Elecsys PC/CC杯,货号03023141Elecsys 清洗液（ProbeWash M），货号03005712Elecsys 反应杯/加针头/废物袋（CUP/TIP），货号12102137Elecsys 系统清洗适配器（SysClean Adapter M），货号03027651
5、 Elecsys E 411分析仪所需材料:Elecsys 系统缓冲液（ProCell），货号11662988 Elecsys 测量池清洗液（CleanCell），货号11662970 Elecsys 系统清洗液（SysWash），货号11930346 Elecsys 适配器 （Adapter for SysClean），货号11933159, Elecsys 反应杯（CUP），货号11706829 Elecsys 加样头（TIP），货号117068024. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批孕酮
6、试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用孕酮定标液定标。定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24 小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求： 一个月（同一批号试剂） 7 天（放置仪器上的同一试剂盒） 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。5. 操作步骤（以E 170为例）5.1 校准操作步骤： 在编缉各项目的参数时，已经在ApplicationCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。进入CalibrationStatus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键
7、）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在CalibrationStatus菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SA
8、VE键，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制Elecsys通用质控品（PreciControl ）1和2或其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验
9、室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法 分析仪自动计算每份标本的测定浓度，单位为nmol/l,ng/ml 或ug/l。 换算方法是： nmol/l 0.314=ng/ml ng/ml 3.18=nmol/l8. 参考范围百分位数5059550595nmol/lng/ml男性331.80.74.30.60.2 1.4女性卵泡期1922.10.64.70.70.21.5排卵期133.92.49.41.20.83.0黄体期158365.386111.727停经后891.00.3 2.50.30.1- 0.8 各实验室应对各自地区人群的孕酮正常
10、值波动范围进行调查，如有必要应自己测定一个参考值。9. 分析性能10. 干扰因素 该方法不受黄疸（胆红素54mg/dl）、溶血（血红蛋白1g/dl）、脂血（脂质720mg/dl）生物素5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8 小时后才能采血。 不受类风湿因子（2000U/ml）的干扰。 17 种常用药物经试验对本测定无干扰,但治疗浓度的保泰松可使孕酮的测定值降低。 偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体的干扰。 Elecsys 孕酮测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。11. 临床意义 孕酮（Progesterone）属于类固醇激素，分子量314.5D，主要在黄体的细胞以及妊娠期的胎盘中形成，孕酮的浓度与黄体的生长与退化密切相关。在月经周期的卵泡期几乎测不出，在排卵前一天，孕酮浓度升高。在黄体期，孕酮的合成增加，在月经周期的后半期，孕酮的主要降解产物，孕烯二醇，从尿中排出。孕酮可以使子宫粘膜转变成腺体丰富的组织（分泌期）。孕酮测定用于生殖诊断：排卵期的检出和黄体期的估计。12参考文献编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日
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