光明液对视网膜光损害模型大鼠的疗效观察(1).

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1、光明液对视网膜光损害模型大鼠的疗效观察（1）】 目的：探讨光明液对实验性视网膜光损害大鼠模型的治疗作用。方法： SD 大鼠 32 只随机分为 4 组：光明液组、模型组、正常组和 VitE 组。采用手术显 微镜光源（Lux为30 000 50）照射SD大鼠右眼30 min，建立急性光损伤模 型。分别采用光明液、VitE滴丸及等量蒸馏水进行灌胃治疗 7d,观察细胞凋亡 率、Caspase-3活力、NO含量变化及视网膜外核层厚度改变。结果：光明液可 以明显降低视网膜细胞的凋亡率，有效地抑制细胞凋亡中的关键酶 Caspase-3 蛋白酶的活力，还可一定程度减缓视网膜外核层厚度的改变，对具有细胞毒性 和

2、氧化作用的NO也有较强的降低作用。与抗氧化剂 VitE相比，光明液的疗效 优于前者。结论：复方中药光明液是一种治疗视网膜光损害性疾病的有效的中 药复方制剂。关键词】 视网膜 损害 细胞凋亡 光明液 中药0 引言视网膜是人体重的光感受器官，特别容易受到各种可见光或人工光源 的损伤，高强度的光照射会导致视网膜的急性损伤。此概念早在柏拉图时代就 已提出，但直到上世纪 60 年代， Noell 等1 才开始实验研究。 1966 年 Noell 曾报道，一定量的光，即使低于热损伤的阈值，也可引起小鼠的视网膜损伤。 近年来，随着眼科光学诊疗器械和显微手术应用的增多，人们不仅对自然光， 而且对各种器械的光源

3、所导致的视网膜损伤等问题进行了深入的研究。另外， 重复的光照射，即使强度较低，也可因光的蓄积作用而对视网膜产生损伤 2 ， 所以对视网膜光损伤的深入研究有着重的临床和理论价值，但目前对此类疾病 的治疗尚无理想的措施。为积极寻找能有效改善视网膜光损伤程度的、临床使 用方便的、副作用较少的中成药注射液，我们利用显微手术的光源造成大鼠急 性视网膜光损伤模型，来观察复方中药光明液对其的治疗作用，以期为对此类 疾病的治疗寻找有效的防治方法。1 材料和方法1.1材料 成年SD大鼠32只，雄性，体质量180220 g，由广州中医 药大学实验动物中心提供（粤检证字 2003A028随机分为4组：正常组，模型

4、组，光明液组，维生素 E 组，每组 8 只。低温冷冻离心机（ universal 16R型，美国Hettich Zentrifugen公司）；分光光度计（UV-1601型，日本shimadzu公司）；NO分析试剂盒（南京建成生物工程研究所）；流式细胞仪（美国Bekman Coulter公司Epics Elite 型）。光明液（党参15g、白术 15g、茯苓20g、甘草8g、丹参30g、川芎30g）购于广州荔湾药材公司，煎取 成 1kg/L 药液备用。 VitE 滴丸胶囊由广东中山市三才医药集团有限公司生产。 光明液组及 VitE 组均按成人临床用量（光明液 4.5g/d ； VitE 200m

5、g/d ）经折 算后3的剂量进行灌胃治疗，其余两组灌等量蒸馏水，1次/d，7d为1个观察 周期。到期后取材观察各项指标。1.2 方法 大鼠 10g/L 戊巴比妥钠 30mg/kg ip 结合乙醚间断性吸入全 麻4 ，复方托品酰胺充分散大右侧瞳孔，用苏州产 YE-1 型手术显微镜光源 （150Vy 21V），光照度30 000 50Lux （光照度检测仪，上海），垂直照射大 鼠瞳孔，照射时间为30min。在光照过程中，确保角膜完全暴露，不断滴生理 盐水湿润眼球表面，工作温度保持在 25C左右。Ann exin V联合PI染色 视 网膜组织剪碎后，加入 PBS离心5min，然后加入2卩L Anne

6、xin-V-fluorescein 和100卩L Hepes buffer，在25C孵育15min,再离心5min后，弃上清加入 2卩L PI和100卩L Hepes buffer，上流式细胞仪（美国 Bekman Coulter公司 Epics Elite 型）检测。Caspase-3活力测定取视网膜后按试剂盒（Pharmi ngen产品，深圳晶美公司提供）求进行，视网膜组织剪碎后，PBS清洗，置于冷的Cell Lysis Buffer 中冰浴30min，然后加入 AC-DEVD-AM及 HEPES BUFFER37C水浴1h后用日本Shimadzu公司RF-540型荧光分光光度计 测定活力

7、，激发波长为380nm发射波长为420460 nm。NO的检测脱颈椎 法处死动物，迅速摘除眼球，在冰环境下剥离视网膜，以精密分析天平称视网 膜湿重，再用双蒸水配成 20g/L，匀浆。匀浆液3 000r/min离心15min,取上 清液测NC含量按试剂盒操作说明，将 NO转化为NO2-,显色法测定其含量。 视网膜外核层厚度测量 脱颈椎法处死动物，迅速摘除眼球，标本常规固定、脱 水、包埋、修蜡，经视乳头颞侧旁开 1mm纵向做5卩m厚的切片，在显微镜下观 察摄片，采用全自动图象分析系统（KONTRON IDA公司2.0型，德国）测量外 核层厚度。统计学处理：数据均以表示，两组间均数差异采用t检验，S

8、PSS计软件协助处理2 结果我们采用流式细胞仪检测细胞凋亡率，光明液对大鼠光损伤模型细胞 凋亡率的影响，见表1。光明液可降低Caspase-3蛋白酶的活力，光明液对大 鼠光损伤模型Caspase-3活力的影响，见表2。经光明液、VitE治疗后，NO改 变较为明显，光明液对大鼠光损伤模型 NO影响，见表3。经过光明液和VitE 治疗后外核层厚度变薄程度减缓，光明液对大鼠光损伤模型外核层厚度的影 响，见表 4。3 讨论视网膜光损伤最早已有 Noell 等 1 观察并报告。在不同条件下，视 网膜的光损伤可有不同的表现类型。但一般来说，在光镜下的表现主累及视网 膜的光感受器细胞和色素上皮细胞 4,5

9、。我们利用手术显微镜的中等强度光源 来制作大鼠光损害的模型，较逼真地模仿了临床实际。视网膜光损伤的成因一 般包括如下 3 个方面，即热损伤、机械损伤和光化学损伤。据文献报道 6-8 ， 光照后 6h 就已出现眼内外节结构紊乱及淡染区，随后由于光感受器细胞的坏死 而导致外核层、色素上皮细胞层细胞数减少，厚度变薄。光照后7d,由于坏死细胞大部分被吸收，外核层损害加重，表现为细胞核排列紊乱，部分消失及空 泡出现，核层进一步变薄，仅留 35层。所以外核层的厚度变化可以作为疗效 观察的一个敏感指标。NO乍为内皮细胞依赖性的调节物质，主起着充当神经递 质、增强机体非特异性免疫功能的作用，其毒性作用可能是细

10、胞毒性作用，它 可通过与超氧自由基的结合，分解出毒性更大的羟基自由基，从而对邻近细胞 产生毒性作用。NC这个指标也可较精确地反映视网膜光损害后体内的变化情况 9,10 。最新的一些研究表明，由接受光照而引起的视网膜变性是一种细胞凋 亡的改变，其机制很可能是由于致伤因子通过某些细胞凋亡基因的激活，从而 导致细胞的变性、死亡。现在大多数理论认为细胞凋亡是受细胞内源性基因、 酶类和信号传导途径调控的一个“瀑布式”激活过程，而Caspase家族是一切凋亡信号传导的共同通路，正由于此家族的激活最终导致内源性核酸酶的激活 和细胞骨架重新组合所致的细胞结构解体，形成不可逆的凋亡。其中 Caspase- 3则

11、由于其所具有的凋亡执行、承上启下的作用而成为Caspase家族中的核心成员，其活力的高低直接影响到视网膜细胞凋亡的进程 4,11 。作者：王萧，胡世兴 , ，林少春，麦细焕，郭学军，邹移海【摘】目的：探讨 光明液对实验性视网膜光损害大鼠模型的治本篇论文是由3COM文档频道的网友为您在网络上收集整理饼投稿至本站 的，论文版权属原作者，请不用于商业用途或者抄袭，仅供参考学习之用，否 者后果自负，如果此文侵犯您的合法权益，请联系我们。光明液是一种治疗缺血性视网膜疾病的验方，临床应用效果屡佳。该 方主由四君子汤加上川芎、丹参组成。脾胃之气健旺，运化正常，才能资生气 血，气运血行。所以光明液以人参为主，

12、甘温大补元气，健脾养胃；又配以苦 温之白术为臣，健脾燥湿；茯苓甘淡渗湿健脾，与白术合用则健脾祛湿之功更强；配以川芎、丹参，活血行气、祛风安神，既补中有行，又使补而不滞；再 加上炙甘草甘温补中，调和诸药。全方合用，共奏益气健脾、活血祛湿、行气 祛风之效。现代药理学认为，四君子汤可有效提高机体的免疫力和活动机能， 促进吞噬细胞的清除能力，对细胞膜的稳定性、特别是细胞核核膜的稳定性均 有一定的加强作用。而丹参则因为其良好的活血化瘀和理气开窍的功效而对人 体的自由基有着良好的清除作用。另有研究表明，丹参酮 II-A 磺酸钠和丹参素 均可降低LPO含量，稳定生物膜，并可提高 SOD舌性，具有抗自由基作用

13、。川 芎的有效成份川芎嗪亦可抑制环核苷酸磷二脂酶活性，抑制血小板聚集，改善 微循环，从而具有防止血栓形成和钙通道阻断剂作用。从以上研究可以看出， 光明液可以减缓视网膜外核层变薄的程度，并且可以对抗由NC所引起的细胞毒性及抗氧化作用，降低视网膜细胞的凋亡率，抑制细胞凋亡途径中的关键酶 Caspase-3 酶的舌性，这一切都表明光明液此中药复方对视网膜光损害模型 大鼠的治疗作用是通过保护细胞核层、抗氧化、抗细胞毒性和减缓细胞凋亡程 度等多途径综合作用来实现的。 VitE 亦为临床常用的抗氧化剂之一，与 Vit E 的对照研究也从另一个侧面证实了光明液的疗效，但从各项指标结果来看，光 明液的疗效优于

14、 VitE 滴丸。这为今后进一步研究此药治疗临床视网膜光损害性 疾病奠定了良好基础，也为临床治疗此类疾病提供了一个有力的选择。【参考文献】1 Noell WK, Organisciak DT, Darrow RM. Hyperthermia accelerates retinal light damage in Rats. Invest Ophthalmol VisSci ,1995;36(6):997-1007 2 Organisciak DT, Darrow RM, Barsalou L. Light history and age- related changes in retinal

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