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1、金利油软胶囊微生物限度检查法的验证StraitPharmaceuticalJournalVol19No.6200740);检测波长:28Onto;流速:1.OmL?min;柱温:30C;进样量:lOp.L;理论板数按延胡索乙素计不低于4000.2.2对照品溶液的配制精密称取延胡索乙素对照品4.68mg,放人100mL的量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,制成46.8p.g?mL的溶液即得.2.3供试品溶液的制备2.3.1将延胡索与川楝子药材进行粉碎至颗粒,分别精密称取延胡索30g与川楝子15g置于大烧杯中加入10倍量的水(即单味延胡索加300mL水,配伍后的加入450mL的水)重复煎煮2次,每次1
2、h,用纱布过滤后合并滤液,分别浓缩至1:1的液体(即单味药浓缩至30mL,配伍药45mL)用已标化的量筒盛取.2.3.2精密量取上述两种溶液各5mL,分置25mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀.滤过,弃去初滤液,取续滤液,即得.2.4线性关系的考察精密称取延胡索乙素对照品6.28mg,置25mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度.分别精密吸取上述溶液1mL置于25mL的量瓶中,再精取lmL,2mL,3mL,4mL,5mL,置于10mL量瓶中,均用甲醇稀释至刻度.取上述6种溶液各10进样,依照上述色谱条件,以峰面积为纵坐标,进样量(g?mL)为横坐标,得到标准曲线,其线性范围为10.05125.6g?m
3、L,回归方程:Y=9416X一6996,r=0.9999.2.5精密度试验取2.2项下的溶液,按2.1色谱条件分析,连续进样5次,测得峰面积值的RSD=1.4%.2.6样品测定分别精密吸取对照品溶液和样品溶液各10,注入液相色谱仪,测定峰面积,计算含量.延胡素水煎液含延胡素乙素0.3713mg?g,金铃子散水煎液含延胡素乙素0.4369mg?g一.结果表明延胡索与川楝子配伍后的水煎液中的延胡索乙素较单味延胡索水煎液高0.0656mg?g.色谱图(见图ilB(图1A.延胡索乙素对照品B.延胡索水煎液C.金铃子散水煎液3讨论3.1采用高效液相色谱法测定水煎液的含量,操作简单,结果更灵敏准确.流动相
4、开始选用甲醇_o.1%的磷酸溶液(三乙胺调pH至6.0)(55:45),延胡索乙素在35min出峰,保留时间相对较长,后调流动相的比例为(60:40),保留时间提前到约22min,样品的分离效果也很好,最后用现在的流动相比例.3.2对于水煎液中延胡索乙素的提取,采用加甲醇溶解至刻度与加适量甲醇进行超声处理10min,20min,30min的试验,结果显示,不进行超声提取的测定结果与超声10min,20min,30min没有明显差异.故样品不进行超声处理,直接加甲醇溶解测定.3.3延胡索与川楝子配伍在中医临床上称为金铃子散.金铃子散在临床上应用较多.通过用高效液相色谱法,对单昧延胡索及其与川楝子
5、配伍的水煎液中延胡索乙素含量的测定,得出结论:配伍后延胡索乙素含量较单味延胡索有明显提高,可能是因为延胡索与川楝子配伍后能够提高延胡索中延胡索乙素的溶出率.这也进一步印证了古人在中医方剂配伍上的科学性和合理性.参考文献1刘生西,刘喜平,董钰明.延胡索与川楝子配伍中总生物碱含量变化的研究J.中医儿科杂志,2006,2(5).2国家药典委员会编.中华人民共和国药典s.北京:化学工业出版社,2005,一部:94.金利油软胶囊微生物限度检查法的验证严素芬(福建省漳州水仙药业有限公司漳州363000)摘要:目的确认金利油软胶囊的检验条件,保证微生物限度检查方法的科学性和检验结果准确性.方法采用中国药典2
6、005年版一部附录微生物限度检查法项下方法的验证.结果确认了金利油软胶囊微生物限度检查的操作方法.结论用常规法检查金利油软胶囊中的细菌,霉菌及酵母茵;用常规法检查金利油软胶囊中的大肠埃希茵,结果可靠.关键词:金利油软胶囊;微生物限度检查法中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1006-3765(2007)06-0057-02金利油软胶囊为一中药品种,其处方组成较复杂,因此应作者简介:严素芬,女(1979.1一),毕业于福建卫生学校药剂学专业,药师,从事药品检验工作.联系电话:05962301797采用适宜的方法进行微生物限度检查.我们采用常规法检查金利油软胶囊中的细菌,霉菌及酵母菌;
7、常规法检查金利油软胶囊中的大肠埃希菌,结果可靠.1验证材料?57?海峡药学2007年第l9卷第6期1.1药品金利油软胶囊由漳州无极药业有限公司提供.1.2验证用菌株金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003,枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501,大肠埃希菌CMCC(B)44102,白色念珠菌CMCC(F)98001,黑曲霉CMCC(F)98003均由中国药品生物制品检定所提供.1.3稀释剂pH7.0无菌氯化钠?蛋白胨缓冲液.1.4实验仪器PZB003净化工作台,ZDX.35B自控式压力蒸气灭菌器,PYX.DHS型隔水式电热恒温培养箱,MJ?160型霉菌培养箱.1.5培养基营养琼脂培养基,玫瑰红钠琼
8、脂培养基,营养肉汤培养基,胆盐乳糖培养基,改良马丁琼脂培养基,改良马丁培养基,MUG培养基.2验证方法2.1菌液制备取经3035C培养1824h的金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,大肠埃希菌的营养肉汤培养物1mL,用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释成每lmL含菌数为50100efu的菌悬液,备用;取经2328C培养2448h的白色念珠菌的改良马丁培养物1mL,用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释成每1mL含菌数为50100cfu的菌悬液,备用;取经2328C培养57d的黑曲霉斜面培养物,加4mLO.9%无菌氯化钠溶液洗下黑曲霉孢子,吸出孢子悬液lmL,用0.9%无菌表l细菌,霉菌及酵母茵计数方法的验
9、证试验结果氯化钠溶液10倍稀释成每1mL含孢子数为50100cfu的孢子悬液,备用.2.2供试液制备取供试品10g,加2g无菌聚山梨酯80,加pH7.0无菌氯化钠.蛋白胨缓冲液至100mL(内加少许玻璃珠),并置45C水浴中振摇,直至完全溶解,作为1:10的供试液.2.3细菌,霉菌及酵母菌计数方法的验证2.3.1采用常规法进行3次独立的平行试验.2.3.2试验组:取1:10供试液1mL,50100cfu试验菌分别注入平皿中,立即倾注琼脂培养基,待凝固后,置规定温度培养2472h逐日观察结果.2.3.3菌液组:测定所加的试验菌数.2.3.4供试品对照组:取1:10供试液1mL注入平皿中,立即倾注
10、琼脂培养基,待凝固后,置规定温度培养2472h逐日观察结果,测定供试品本底菌数.2.3.5稀释剂对照组:取pH7.0无菌氯化钠.蛋白胨缓冲液代替供试品,依供试品制备方法制备,按试验组的方法操作,立即注入琼脂培养基,待凝固后,置规定温度培养2472h逐日观察结果.2.3.6试验结果(见表1).从表1结果可以看出:该供试品通过接种5种阳性试验菌株,采用常规法,结果试验组的菌回收率均>70%,稀释剂对照组的菌回收率均>70%.因此该供试品细菌,霉菌及酵母菌数均采用常规法进行测定.2.4控制菌检查方法的验证2.4.1试验组:取上述1:10供试液10mL加至10Oral胆盐乳糖培养基中,加1
11、0100cfu大肠埃希菌,依相应控制菌检查法进行检查.2.4.2阴性菌对照组:方法同试验组,验证大肠埃希菌时,阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌.后依相应控制菌检查法进行检查.2.4.3试验结果(见表2).表2大肠埃希茵验证试验结果?58?注:表中+代表反应呈阳性,一代表该反应呈阴性.从表2结果可以看出:大肠埃希菌的阳性对照生长良好,阴性菌无生长,证明了药品在此条件下无抑菌作用,因此大肠埃希菌可以采用常规法进行检查.3讨论3.1稀释剂对照组的菌回收率均大于70%,说明采用pH7.0无菌氯化钠.蛋白胨缓冲液作为稀释液对试验不产生干扰.3.2金利油软胶囊含油性成份,加入适量的聚山梨酯80,有利于其分散均匀.为促进囊壳溶解,应在45C水浴中振摇,加速内容物的溶出.3.3由试验结果可以看出,试验组及稀释剂对照组的菌回收率均大于70%,说明细菌,霉菌及酵母菌可采用常规法测定,大肠埃希菌可采用常规法进行检查.参考文献1国家药典委员会编.中华人民共和国药典S.北京:化学工业出版社,2005年版一部,附录7O79.
金利油软胶囊微生物限度检查法的验证
