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1、目录:V!ei*ieiv9 Car* 2 f n德国Zeiss激光扫描共聚焦显微镜快速操作手册制作:：Zeiss光学仪器（上海）国际贸易有限公司孙凯2009年6月1 系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说朋LSM 710Th* iPdwwt af fiwnftiljrvltr* Mt 申 Dinwwih 刿WmaR-vtfMb.2系统的使用 2.1开机顺序目录:V!ei*ieiv9 Car* 2 f n目录:V!ei*ieiv9 Car* 2 f n22软件的丿快速使用1说明2.3显微镜B的触摸屏控制2.4关机顺序3 系统的维护1系统的组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描
2、检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成系统组成及光路电动荧光显微镜扫描检测单元激光器 Tube lens次、厂Tubi? lensObjectivelid仙 beam combiners电脑工作站 SpedrneriV 二ConderirPlnholB实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元 CO2培养系统控制器激光器电脑工作站2系统的使用2.1开机顺序(1) 打开稳压电源(绿色按钮)(2) 主开关MAIN SWITCH “ON”电脑系统SY STEMS/PC “ON ”一扫描硬件系统 COMPONENTS “ON ”(3) 打开扫描载物台开关打开电动显微镜开关打开荧光灯开关(注：具有荧
3、光光强调节旋钮钮)(4) Ar离子激光器顺时针旋转钥匙至预热等待约15分钟将激光器扳钮由Laser run ”状态”即可正常使用(5)打开电脑开关，进入操作系统注：键盘上也具有电脑开关ON ”“Standby ” 扳至2.2软件的快速使用说明（1 ）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN图标（2）进入ZEN界面，弹出对话框：Start System ”初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。Image Process ing”不启动共聚焦扫描硬件，用于已 *5一存图像数据的处理、分析。（3）软件界面:|0|1功能界面切换：扫描取图（Acquisition ）、图像处理（Proc
4、essing ）、维护（Maintain ）（注：Maintain 仅供Zeiss专业工程师使用）2动作按钮；3工具组（多维扫描控制）；4工具详细界面；5状态栏;；6视窗切换按钮；7图像切换按钮；8图像浏览/预扫描窗口； 9 文档浏览/处理区域;；10 视窗中图像处理模块动作按钮：:Si ngle扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。FMF find三ivtiruLisSMjp MXJ4O-0 *( BQ Irnaglng ehjp宮O n ugtic FQniwcuQitQn0 , Afioilsklan Model) *Hnn曲jg()+ HUJPio s&诞C) U 0QLight Pat
5、h ” EC Plan NmWjar点击物镜图标，选择物镜样品聚焦。Retl actorReflected Light ShutterTransmittad Light ControlReflected LightSource IX-Gite 120 orHBO 100)NoneOowdLais tx透射光控制（Transmitted Light Control）反射光光闸控制（Reflected Light Shutter ） 荧光激发块选择（Reflector）光路设置：:Read 暂点击“LSM ” （ZEN软件界面右上角），系统切换至共聚焦扫描光路:选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法
6、,应用Apply（注：Fastest为最快速扫描，多条激光谱线同时扫描。Best signal为最佳信号扫描，多条激光谱线顺中式扫描。）扫描图像参数设置:Ocdar序扫描。Best compromise为兼顾速度与信号的折Woricspace Zoom:Q Acquisition ModePldPvAlKKfwwric* 心#1 再 O1 DTCOpttTldlAwfdginyNumber陥De供h a WQ SCTlH AlTflPixel Lwdl L.6L pscc Scar lmwOri rm 4fl|Ulwl i liiourwllui自动预设光路Smart SetupCannucu
7、B.共聚焦LSM扫描设置每个通道的精细调节：包括:：（1）Pin hole的调节（一般设为1AU。该值越大，则信号越强，但共聚焦图像效果会降低。原则上， 在保证图像质量的前提下，该值越接近于1AU越好）；（2）Master Gain 的调节（增大则信号和噪音都增强强，减小则信号和噪音均减小。原则上，在保证图 像质量的前提下，Gain值越小越好）；（3） Digital Offset 的调节（可扣除背景噪音，但标本信号也也有一定程度的扣除。原则上，在保证图 像质量的前提下，Digital Offset值越接近于0越好）；（4） Digital Gain 的调节（增大则信号和噪音都增强，减小则信号
8、和噪音均减小。原则上,，在保证图 像质量的前提下，Gain值越接近于1.01.2越好）；（5）另外,，对于每个通道，需要灵活调节激光的强度（激光强度越高，则信号越强，但噪音也相应增 强，同时标本更容易被漂白或淬灭。原则上,，在保证图像质量的前提下，激光强度越低越好。）选择可连续扫描、一边预览图像效果、一边幡细调节各个个通道的扫描参数。如果预览图像的效果可以，则先“Stop 即可完成图像的扫描。，再点击“ Single或StartSdertRIk： forw aiid save !M图像的保存：:SdertRIk： forw aiid save !MSdertRIk： forw aiid sav
9、e !M三种方法：:(1) “ File ” 菜单下,，“Save 或者Save AS ”。(2) 点击右下角按钮。(3) 点击工具栏按钮。(如图所示)SdertRIk： forw aiid save !MSdertRIk： forw aiid save !M另外”通过“File ”菜单下的“Export ”，也可将图像以其它格式输出。SdertRIk： forw aiid save !MSdertRIk： forw aiid save !MFunuCDaisOunneiE血E 嶄 Ege rtndow * 曲 pfane：*| Raw da怙-pAfrekaw 加启-garteG3* 匸 o
10、l kndg 祐 du# 山-aJe 比 宜of IrdaAr -R.Il mpknrvt imah!s “ Exit ”，退出共聚焦软件 ZEN(2)关闭並电脑操操作系系统、显示器电源(3) 关闭荧光帅电源。 关闭扫描载物台电源、显微镜系统电源(5)关闭Ar激光器：:先将扳钮从 “ Laser run ” 扳到 “ Standby ” 状态;再将钥匙逆时针从从“一”旋转到“0”状态;等待约8-10分钟、激光器风扇扇停止转动后后(切记!！,将主开关按钮擬到“OFF ”。(6)(7)如果使用了 C02培养系统,则关闭其电源扫描硬件系统 COMPONENTS “ OFF电脑系统 SYSTEMS/P
11、C “OFF ”主开关MAIN SWITCH “OFF ”(8)等灯箱充分冷却后，再放防尘罩(9)如果长时间(1 day)不使用，则关闭稳压电源、墙上总电源3 系统的维护主要注意事项如下：（1）打开稳压电源时，应等待 2分钟（电压稳定）后，再开其它开关。（2） 严格遵守激光器的开、关流程（详见“ 2.1开机顺序”）。（3）如果使用过油镜，或者物镜表面较脏，则需用擦镜纸擦干净物镜的前表 面（清洁液使用无水乙醇和无水乙醚的混合液， 混合比例：无水乙醇30%、 无水乙醚70% ）。（4）不使用荧光时，不打开荧光灯。避免频繁开/关荧光灯。（5）必须等灯箱充分冷却后，再小心地盖上防尘罩。（6）显微镜可由TFT触摸屏控制，使用触摸屏时注意： 手指保持清洁、干燥状态，并且为了保证他人使用安全，触摸时严禁配 戴有可能接触污染物或危险样品的手套； 触摸屏已足够灵敏，不要大力按压触摸屏； 不要旋转、插拔触摸屏。（7）刻录图像数据资料：应使用刻录光驱刻录，实验前应准备好刻录光盘。切记:：为了防止计算机病毒，严禁在共聚焦电脑上使用 U盘、硬动硬盘或 者上网！ ！（8）未经授权，严禁自行安装任何软件！ ！（9）实验室温度应保持在 22 C 2,湿度40%-60%。（10）避免空调直接对着显微镜吹风。（11）整个实验过程应注意保持显微镜周围环境清洁
德国ZeissLSM710激光扫描共聚焦显微镜操作说明
