南美白对虾乳酸菌理化因子生长免疫力

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1、摘 要南美白对虾（Penaeus vannamei）是我国重要的经济养殖虾类。本研究利用不同浓度（0%、0.75%、1%和1.25%）的乳酸菌混合饲料对南美白对虾进行淡水养殖30天，测量南美白对虾养殖过程中各种水质理化因子的变化情况以及乳酸菌对南美白对虾体长、体质量和抗病力的促进情况。研究结果表明，1%和1.25%乳酸菌添加量可有效提高虾苗生长速度，活力更强，水体环境更好，乳酸菌能起到降解亚硝酸盐、氨氮等有毒物质，并减少水质有害物质引起的肝萎缩现象。这一结果显示饲料中添加乳酸菌具有良好的水质改良、提高南美白对虾生长速度并增强虾体免疫力的功能。关键词：南美白对虾；乳酸菌；理化因子；生长；免疫力。

2、AbstractPenaeus Vannamei is an important economic shrimp in China. In this study, different concentrations (0% , 0.75% , 1% and 1.25%) of lactic acid bacteria were used for 30 days in freshwater culture of Penaeus Vannamei, the changes of physical and chemical factors of water quality and the promot

3、ion of lactic acid bacteria on body length, body weight and disease resistance of Penaeus Vannamei were measured. The results showed that the addition of 1% and 1.25% lactic acid bacteria could effectively increase the growth rate of shrimp seedlings, increase their vitality, improve the water envir

4、onment, and play a role in the degradation of nitrite, ammonia nitrogen and other toxic substances, and reduces the water quality harmful substance causes the liver atrophy phenomenon. The results showed that adding lactic acid bacteria to the feed could improve the water quality, increase the growt

5、h rate of Penaeus Vannamei and enhance the immune function of the shrimp.Keywords：Penaeus vannamei；Lactic acid bacteria；water quality；growth；Immunity 目 录 1、引言12、实验材料与方法32.1实验材料32.1.1实验场地和条件32.1.2实验虾32.1.3实验试剂32.1.3实验仪器32.2.实验方法32.2.1乳酸菌用法42.2.2水质指标测定方法42.2.3水样采集时间42.2.4肝脏压片观察42.2.5不同组别的生物学特征测量43、实验结

6、果与分析53.1水质理化因子测定53.2不同试验组生长速率统计73.3肝脏压片显微镜观察结果7 4、结论与讨论9致谢10参考文献11不同比例的乳酸菌对南美白对虾虾苗生长影响1、引 言南美白对虾（Penaeus vannamei）学名凡纳滨对虾又名白肢虾（white-leg shrimp）、白对虾（white shrimp）1, 属节肢动物门（Arthropoda）、甲壳纲（Crustacea）、十足目(Decapoda)、游泳亚目(Natantia)、对虾科(Panaeidae)、对虾属(Penaeus)，Lito-penaeus亚属。为广温、广盐性热带虾类，原产于太平洋西海岸至墨西哥湾沿岸,

7、是世界三大经济虾类之一2。我国是世界上重要的水产养殖大国，水产养殖世界第一，其中南美白对虾也是我国虾类养殖主要对象。南美白对虾是一种经济效益高的养殖水产，从而引起人们的大量关注，便有大量的人对南美白对虾从不同方面展开研究3-9，从而发现南美白对虾的众多优点，生命力旺盛，平均寿命可达32个月10，生长周期却很短，按现有的规范化养殖一年可投苗两次，可收获两次成虾；产量高，不管是一口高位池还是一口土池，在现有的技术支持下年产量都可达到5000斤以上的产虾量（包含早、中、晚期死亡的虾），还具有抗环境能力强、抗病毒能力强，出肉率高等优点。南美白对虾不仅经济效益高、易养殖，并且营养丰富，口感好，又具有易吸

8、收，易消化的特点，可作为身体虚弱、需要调理的病人的滋补产品11。因此目前南美白对虾是目前国际上产销的对虾品种。但是伴随着规模化的养殖，问题也开始逐渐涌现，尤其是1993年的对虾养殖产业出现世界范围级的病毒爆发，导致产业低迷，人们追根溯源发现主要有两个原因导致这次病毒病的爆发，一个原因是归于自己的过错，在养殖过程中大量添加药品、过度养殖，从而造成拥挤等原因，导致对虾代谢紊乱、抵抗力下降12，另一个原因便是由细菌13、病毒14和寄生虫15所引起的各种病害16，给对虾养殖也造成巨大的经济损失，因此，为了加强健康养殖的需求，防止大规模的对虾死亡，人们呼吁加强使用绿色、环保药物与添加剂17，并加强了研发

9、力度，添加剂在水产养殖方面中的应用也越加广泛18,而益生菌是一类可以促进健康的活体生物制剂，首当其冲的进入了人类的选择之中，并成功成为抗生素的替代品，得到快速发展，在水产养殖中益生菌的主要作用为预防消化道疾病、促进吸收和刺激免疫系统等方面19-21做出贡献，国内外学者已做出大量实验22-24，因此南美白对虾与益生菌的研究、报告相对完善。乳酸菌是一类能利用可发酵碳水化合物产生乳酸的异养厌氧型细菌，具有调节水质、提高摄食量、促进营养消化、增强机体抗病力、强化肝脏功能等优点，在对虾养殖产业中应用广泛25。目前在基础饵料中添加乳酸菌对对虾生长的研究实验报道不多26，所以本研究通过添加不同浓度乳酸菌制剂

10、的饵料喂养南美白对虾虾苗, 对南美白对虾虾苗的生长影响做出解析,为生产实际中合理使用乳酸菌喂养南美白对虾提供理论基础。122、实验材料与方法2.1 实验材料2.1.1 实验场地和条件实验产地为福州市长乐友丰养殖有限公司虾苗场，实验池为高位池面积约为300平方米，高约2米，共12口，前期只使用4口高位池，养殖20天后进行分苗处理，每口高位池的虾苗平均分成3口，分为A、B、C、D四组，形成平行组，分别投喂不同比例的乳酸菌混合饲料，其中A组为添加量为0%的混合乳酸菌饲料，B组为添加量0.75%的混合乳酸菌饲料，C组为添加量1%的混合乳酸菌饲料，D组为添加量1.25%的混合乳酸菌饲料。投苗前，需对高位

11、池进行严格的杀菌，使用喷射火枪喷射火焰灼烧地面与墙壁，进行高温消毒，对火焰喷射不了的位置，使用氢氧化钠溶液进行消毒。与投苗前七天内，抽取地下水先将4个高位池洗净，然后挑选阴天或雨天对高位池使用漂白粉进行严格消毒，其他8口亦要在分苗前做好以上消毒方法。2.1.2 实验虾实验虾苗购自厦门喜大生物科技有限公司，初始虾体平均体长0.330.06cm，平均体质量为0.0490.014g，密度约为666尾/m3，需在养殖20天进行分苗处理，各组平均分成3口高位池进行养殖，以保障成活率以及平行样品数据的准确性。分苗后开始设计试验，按照不同混合乳酸菌添加量饲料进行饲养，取样时间为2020年3月24日开始至20

12、20年4月23日，共计30天。2.1.3实验试剂生理盐水。2.1.4实验仪器电子天平、显微镜、载玻片、盖玻片、试管、100ml烧杯、100ml容量瓶。2 .2实验方法 2.2.1乳酸菌用法购买市场常见的厦门优必和生物科技有限公司的乳酸菌产品，使用接种扩培的方式，将乳酸菌按1%的量接入菌种加3%的糖蜜，加96%的水充分搅拌直至完全融解，密闭发酵3天左右，有芳香气味，使用pH试纸测得pH值为3到4之间，即可使用，然后按照不同比例加入对虾饲料中搅拌均匀，喂养30天。2.2.2水质指标测定方法利用水温计，每日监测高位池水温3次；使用高精度数显电子盐度计，定期监测每个高位池的盐度；使用广泛pH试纸检测实

13、验虾池的pH值；购买南京建成生物工程所研究生产的水博士系列，按照试剂盒操作说明定期测定高位池中的亚硝酸盐、氨氮含量与水体中溶解氧的含量。以比较添加不同比例的乳酸菌条件下各个指标的不同之处及其作用效果。2.2.3水样采集时间温度的测量每天早中晚各一次，测量时间分别为早上6:30、中午12:30、晚上18:30，统计水温取当日平均值进行统计。其他理化因子如盐度、pH、溶解氧、亚硝酸盐、氨氮含量等，取样时间为2020年3月24日开始至2020年4月23日，每隔5日早上10：30进行取样测定，12口池子中每口取样至少3次，取其平均值用于统计。2.2.4肝脏压片观察试验过程中，A组中出现一口虾苗肝萎缩比

14、较严重，从中随机抽取几只肝萎缩比较严重的幼虾以及其他组正常健康的幼虾，使用解剖器分别取出肝脏，放入装有生理盐水的载玻片中，盖上盖玻片进行压片处理，显微镜下观察。2.2.5 不同组别的生物学特征测量利用不同浓度的乳酸菌饲料饲养30天后，对A、B、C、D四组虾苗进行取样，测定其增重率和特定生长率。每口分别取30尾，测定虾苗体长、体质量。采用spss 15.0软件利用单因素方差对数据进行统计分析，数据用平均值标准误差表示。其中：增重率=（末均重-初均重）/初均重100%特定体重生长率=（末均重-初均重）/饲养天数100%体长增长率=（末均体长-初均体长）/初体长100%特定体长生长率=（末均体长-初

15、均体长）/饲养天数1003实验结果与分析3.1 水质理化因子测定通过对四组养殖池30天的水质理化因子测定可知，试验期间，四组的水温变化范围在21-27之间（图1），盐度变化范围在4.2-4.7之间（图2），水体温度和盐度并未产生显著差异。图3中显示水中溶解氧的变化范围在5.6-7.6之间，乳酸菌可以提升水体中溶解氧的含量。从图4可以看出，在加入乳酸菌之后，养殖水体酸碱度pH值变化范围不断变小，实验组D的数值最稳定，在7.37.7之间。从图5所示，乳酸菌对降解水体中的亚硝酸盐有明显效果与对照相比差异明显（P0.05），同时在之后的测量中数据已趋于稳定。由于图6的测量的氨氮量不高，到之后测量的氨氮

16、量几乎为零，可以判断出乳酸菌有利于氨氮降解。 图1 水温变化情况统计表图2 盐度变化情况统计表 图3 水中DO含量变化情况统计表图4 水质pH值变化情况统计表图5 水中亚硝酸盐含量变化情况统计表 图6 水中氨氮变化情况统计表3.2 不同试验组生长速率统计各组别分别随机选取30尾进行生物学测量，研究结果表明，随着乳酸菌剂量的增加，在饲养30天后相较A组，C组在促进体长增长和体重增加上均具有显著提高（P0.05），而D组在则具有极显著提高（P0.01），显示出乳酸菌在促进生长性能上的显著提高效果。 表1 乳酸菌对南美白对虾生长性能的影响组别初始体长（cm）初始体重（g）末体长（cm）末体重（g）体

17、长增长率%体重增重率%特定体长生长率%特定体重生长率%A组0.330.060.0490.0145.310.321.0350.0551059197016.63.28B组0.330.060.0490.0145.530.271.0910.0501576208217.333.47C组0.330.060.0490.0145.670.52*1.1420.119*1618218417.83.64D组0.330.060.0490.0146.60.41*1.2230.112*1900234620.93.91备注：*表示具有显著性差异（P0.05），*表示具有极显著差异（P0.01）.3.3 肝脏压片显微观察结果

18、将南美白对虾进行切片观察，得到下图7和图8。进行对比发现，对比发现两者都含有大量弧菌，且图7有毒物质含量明显大于图8，得出结论大量的弧菌寄生在虾苗身上造成，虾苗免疫力下降，再由于大量有毒物质致使虾苗染病，而乳酸菌可降解亚硝酸盐等有毒物质，从而提升部分成活率。 图7患有肝萎缩 图8正常4 讨论与结论乳酸菌是一类无芽孢、革兰氏阳性菌的总称，可在机体肠道内产生维生素和促生长因子，从而实现促进对虾生长的目的27。张家国等28研究发现，乳酸菌在水产动物的养殖上具有改良水质条件、提高机体免疫能力和替代抗生素药物治疗疾病等功效。水体中温度、盐度、pH值以及DO值是常规水质理化因子，也是影响水生动物生长、免疫

19、等生理机能的基本元素。现有研究表明添加乳酸菌不论拌喂或浸浴，均具有良好改良水质效果29。本研究中水质理化因子的测定显示，拌喂乳酸菌饲料的实验组比对照组在水温、盐度、pH、DO值无显著性变化，但较多剂量乳酸菌D组可以提升水体中溶解氧的含量和稳定水体pH值变化，尤其是对有毒害作用的营养盐氨氮和亚硝酸盐，更是可以起到显著降低的效果，说明随着养殖时间的增加，乳酸菌在改良水质方面的功能逐渐取得提高，这与黄浦江等30的研究结果一致。现有研究表明，南美白对虾养殖饲料中添加乳酸菌可显著增加机体肠道有益菌数量、抑制病原菌的生长繁殖、提高机体病原菌的抵抗力的功效31。本研究显示随着乳酸菌添加剂量的增加，其体长和体

20、质量的增加幅度亦逐渐提高，并显著高于未添加组，同时肝脏的显微压片结果显示乳酸菌可有效提高对虾机体抗病能力，减少有害物质引起的虾苗肝萎缩，这一现象与现有的研究结果相一致。Kongnum等32研究发现，南美白对虾饲料中拌喂乳酸菌可显著提高增重率、特定生长率、免疫力、成活率及抗弧菌效果。张玲33研究表明，对日本囊对虾和中国明对虾的养殖过程中利用口服或浸浴乳酸菌，均具有改善水质、提高成活率和抗病能力。文金顺34研究表明，提高南美白对虾养殖环境中的乳酸菌含量可显著提高虾体生长速度。汪海燕等35研究表明，南美白对虾发酵饲料中添加乳酸菌可显著提高对虾生长速度，平均可缩短7d左右，体长增长0.5-0.8cm。

21、Sha 等研究表明，乳酸菌不仅可以促进对虾生长，还可提高对虾的免疫应激和抗病能力，从而使其成活率显著提高36。郑玉等37在南美白对虾饵料中添加虾体质量3%的乳酸菌饲喂8周后，终全长、增重率和特定生长率均具有显著提高。本研究结果显示，添加了乳酸菌的淡水养殖南美白对虾虾苗普遍比没有添加乳酸菌的淡水养殖南美白对虾虾苗生长速率要快，活力更强，水体环境更好，乳酸菌能起到稳定ph值与增加溶解氧含量，降解亚硝酸盐、氨氮等有毒物质，增强南美白对虾的免疫力，并减少南美白对虾出现由亚硝酸盐、氨氮等有毒物质引起的肝萎缩现象。 参 考 文 献1 李波，陈兴汉，范斌，等. 南美白对虾健康养殖关键技术J.科学养鱼, 20

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