2蛋白质的基本机构和功能

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1、第二章第二章 蛋白质的结构与功能蛋白质的结构与功能主主 要要 内内 容容蛋白质蛋白质(Protein)(Protein)的种类繁多的种类繁多蛋白质是生命的物质基础蛋白质是生命的物质基础 第一节第一节 蛋白质的分子组成蛋白质的分子组成;() 。一、蛋白质的元素组成一、蛋白质的元素组成二、蛋白质的基本组成单位二、蛋白质的基本组成单位氨基酸氨基酸 (一)氨基酸的分类(一)氨基酸的分类 POLARNON-POLARTyrHisGlyAcidicNeutralBasicAspGluGlnCysAsnSerThrLysArgAlaValIleLeuMetPheTrpProLeu L-C-C-CONH2-C

2、-CONH2-C-COOH-C-C-COOH-H-CH3-C-OH-C-SH-C-C-S-CPPro-C-C C N N+ -C-C-C-C-NH3+-C-C- -OH-C-NSouth lineCircular lineCentral lineNorthwest lineAliphaticAmideAcidicImino,CircularBasicSulfurHydroxyAromatic-C-C-C-N-C-N N+= C-C-C-C C-C-C-C C C-C C C C HN C-COOH a-C-C OHGln QAsp DGlu EPhe FArg RLys KHis HGly G

3、AAAlaVValI IleSer SThr TCys CTrp WNon-polarPolarArg RTyr YAsn NMet M 氨基酸的等电点氨基酸的等电点(isoelectric point,pI) ) 氨氨基基酸酸分分析析仪仪图图解解AspThrThrLysGlyGluSerProAlaCysValMetIleLeuTyrPheHisNH3Arg0.20.41.00.60.8光光吸吸收收流出液流出液(mL)15cm柱,柱,pH3.25,0.067mol/L柠檬酸钠柠檬酸钠15cm柱,柱,pH4.25,0.067mol/L柠檬酸钠柠檬酸钠15cm柱,柱,pH5.25,0.12mol

4、/L柠檬酸钠柠檬酸钠缓冲液泵缓冲液泵显色反显色反应管应管茚三酮泵茚三酮泵已分开的已分开的氨基酸氨基酸离子交换柱离子交换柱样品注入口样品注入口记录仪记录仪光电倍光电倍增管增管光源光源三、氨基酸在蛋白质分子中的连接方式三、氨基酸在蛋白质分子中的连接方式N NC CC C O OH HR R2 2O OH HH HH H+ +肽键肽键-H-H2 2O ON NH H2 2C CC CN NC CCOOHCOOHR R1 1R R2 2O OH HH HH HN NC CC C O OH HR R1 1O OH HH HH HN NH H2 2C C CONHCONH C C CONHCONH C C

5、 CONHCONH C C COOHCOOHR R1 1R R4 4R R2 2R R3 3H HH HH HH H主主链链侧链侧链N端N端C端C端命名、编号命名、编号第二节第二节 蛋白质的分子结构蛋白质的分子结构一、蛋白质的一级结构一、蛋白质的一级结构 二、蛋白质的空间结构二、蛋白质的空间结构(一)蛋白质的二级结构(一)蛋白质的二级结构 2.2.蛋白质二级结构的主要形式蛋白质二级结构的主要形式(2 2)-折叠折叠 -折叠包括平行式和反平行式两种类型折叠包括平行式和反平行式两种类型 (3 3)-转角转角 (4 4)无规卷曲)无规卷曲 (二)蛋白质的三级结构(二)蛋白质的三级结构。 。 蛋白质结

6、构中应注意的几个问题蛋白质结构中应注意的几个问题三、蛋白质的结构与功能三、蛋白质的结构与功能 一、蛋白质的两性解离与等电点一、蛋白质的两性解离与等电点 二、蛋白质的胶体性质二、蛋白质的胶体性质 三、蛋白质的变性、沉淀和凝固三、蛋白质的变性、沉淀和凝固 蛋白质变性的应用蛋白质变性的应用牛核糖核酸酶的变性与复牛核糖核酸酶的变性与复性性蛋白质沉淀蛋白质沉淀四、蛋白质的紫外吸收性质四、蛋白质的紫外吸收性质 五、蛋白质的免疫学性质五、蛋白质的免疫学性质六、蛋白质的呈色反应六、蛋白质的呈色反应280nm, 0.1-0.5mg/ml(样品含核酸时)蛋白质(mg/ml)=1.55A280-0.75A260碱性+Cu2+磷钼酸-磷钨酸蓝色范围:25-250g(Tyr,Trp的反应)七、蛋白质的含量测定七、蛋白质的含量测定4. 5.双缩脲法肽键+碱性+Cu2+紫红色范围:0.5-10mg/ml6.凯氏定氮法1g氮相当于样品含有6.25g蛋白质第四节第四节 蛋白质的分离纯化蛋白质的分离纯化二、蛋白质的分离纯化二、蛋白质的分离纯化返返 回回分子筛层析原理示意图分子筛层析原理示意图返返 回回返返 回回

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