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1、实用标准文案姓名：郭沈杰年级专业：2012级生物科学同组者：蔡萍萍 学号:学050011012实验七醉母RNA勺提取及鉴定一、实验目的掌握稀碱法提取酵母 RNA的原理和方法。二、实验原理酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2% RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后,可加乙醇使其沉淀，有此可得粗RNA制品。用碱液提取的RNA有不同程度的降解。三、实验仪器1、离心机2、水浴锅3、电炉4、烧杯5、量筒6、移液管7、玻璃棒8、滤纸9、漏斗10、试剂瓶11、电子天平12、pH 试纸（pH114）四、实验试剂1、干酵母粉2、0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸储水并稀释至1000ml。3、乙酸（A
2、.R.）4、95叱醇5、无水乙醛（A.R.）6、10陶酸：浓硫酸（比重 1.84） 10ml,缓缓倾于水中，稀释至 100ml。7、氨水（A.R.）8、5%J肖酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸储水并稀释至100ml,贮于棕色瓶中。五、实验步骤（一）RNA的提取：1、称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%氢氧化钠溶液10ml,沸水浴加热30分 钟，经常搅拌（如沸水浴过程中溶液蒸干可再加58ml氢氧化钠）。冷却，然后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH试纸检验，pH56）,离心10-15分钟（ 4000r.p.m ）。倒取上清液，加入 2倍体积的95成醇，边加边搅，加毕，静置，待完全沉淀，过滤。
3、2、滤渣先用95叱醇洗2次，每次约5毫升，再用无水乙醛洗 2次，每次也约5ml o3、洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。乙醛滤干后，滤渣即为粗RNA可鉴定和测定含量用。（二）鉴定：1、取上述RNA勺0.5g ,加10%1酸5ml,加热至沸12分钟，将RNAK解。2、水解液2ml,加入氨水2ml和5%J肖酸银溶液1ml,观察是否产生絮状喋吟银化合物。 注意事项：1、离心管回收2、离心的时候，要两两对称放置，且离心管中溶液的量基本一样。否则会遭成离心机转子 的损坏。六、实验结果（一）RNA的提取：加入乙酸使溶液呈酸性，溶液呈土黄色。进行离心后，沉淀沉于离心管的下部，上半部分上清液呈土黄色。取上清液，
4、加入2倍体积的95叱醇后，溶液呈现白色浑浊状完全浑浊后，上清液呈白色，沉淀为白色。过滤洗涤后，得 RNAffl.品。文档大全(二)鉴定：(1)水解后，溶液呈无色透明状。加入氨水后，溶液仍澄清，溶液中似有油状物质产生。（2）取水解液0.5ml ,加苔黑酚一三氯化铁试剂1ml,加热至沸1min,观察颜色变化七、实验分析称取干酵母粉：2.0096g最后得到的RNA粗品：0.034 gRN碾取率（为=RN小量（g） /干酵母粉质量（g） x100%本实验中 RN限取率（% = 0.0346 g / 2.0096g = 1.722%（稀碱法提取的 RNW变性RNA本实验为定性实验，提取酵母中的RNA中，
5、产生白色沉淀时可能因副反应产生的其他沉淀, 即最终的沉淀中可能混有其他杂质，不适于进行定量测定。依据：酵母细胞富含核酸，且核酸主要是RNA含量为干菌体的2.67%10.0%,而DN哈量较少，仅为0.03%0.516%。为此提取RN够以酵母为原料。工业上制备RNA选用低成本、适于大规模操作的稀碱法或浓盐法。这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA主要用作制备单核甘酸的原料，其工艺比较简单。八、实验注意事项1 .过滤时，洗涤不能带水，否则沉淀粘在滤纸上取不下来。2 .有时絮状沉淀出现较慢，可放十多分钟。3 .利用等电点控制RNAW出时，应严格控 pH。4 .稀碱法提取的 RNA为变性RNA可用于RNA组分鉴定及单核甘酸制备，不能作为 RNA 生物活性实验材料。九、思考题?1、简述核酸分离纯化的一般原则。保持核算一级结构的完整性；尽量排除其他分子的污染，保持核酸纯度。? 2、RNA提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些？过滤时，洗涤不能带水，否则沉淀粘在滤纸上取不下来；有时絮状沉淀出现较慢，可放十多分钟；利用等电点控制 RNA析出时，应严格控制 pH;稀碱法提取的rna为变性rna ,可用于单核甘酸制备，不能作为rna生物活性材料。
实验七酵母RNA地提取及鉴定
