显微鉴别法(共5页)

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1、精选优质文档-倾情为你奉上显微鉴别法显微鉴别法系指用显微镜对药材（饮片）切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。鉴别时选择具有代表性的供试品，根据各品种鉴别项的规定制片。制剂根据不同剂型适当处理后制片一、药材（饮片）显徽制片1.横切片或纵切片制片 取供试品欲观察部位，经软化处理后，用徒手或滑走切片法，切成1020m的薄片，必要时可包埋后切片。选取平整的薄片置载玻片上，根据观察对象不同，滴加甘油醋酸试液（取甘油、50醋酸与水各1份，混合，即得）、水合氯醛试液（取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得）或其他试液12滴，盖

2、上盖玻片。必要时滴加水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，并滴加甘油乙醇（取甘油、稀乙醇各1份，混合）试液或稀甘油，盖上盖玻片。2.粉末制片 供试品粉末过四号（65目）筛，挑取少许置载玻片上，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液，盖上盖玻片。必要时，按上法加热透化。3.表面制片 将供试品湿润软化后，剪取欲观察部位约4mm2，一正一反置载玻片上，或撕取表皮，加适宜的试液或加热透化后，盖上盖玻片。4.解离组织制片 将供试品切成长约5mm，直径约2mm的段或厚约1mm的片，如供试品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，采用氢氧化钾法，若供试品质地坚硬，木化组织较多或集成较大群束，采用硝铬

3、酸法或氯酸钾法。（1）氢氧化钾法 将供试品置试管中，加5氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，取少量置载玻片上，用解剖针撕开，滴加稀甘油，盖上盖玻片。（2）硝铬酸法 将供试品置试管中，加硝铬酸（(1)取硝酸10ml，加入100ml水中，混匀。(2)取三氧化铬10g，加水100ml使溶解。用时将两液等量混合，即得）试液适量，放置至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。（3）氯酸钾法 将供试品置试管中，加硝酸溶液（12）及氯酸钾少量，缓缓加热，待产生的气泡渐少时，再及时加入氯酸钾少量，以维持气泡稳定地发生，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水

4、洗涤后，照上法装片。5.花粉粒与孢子制片 取花粉、花药（或小的花）、孢子或孢子囊群（干燥的供试品浸于冰醋酸中软化），用玻璃棒研碎，经纱布过滤至离心管中，离心，取沉淀加新配制的醋醉与硫酸（9：1）的混合液13ml，置水浴上加热23分钟，离心，取沉淀，用水洗涤2次，取沉淀少量置载玻片上，滴加水合氯醛试液，盖上盖玻片，或加50%甘油与1苯酚各12滴，用品红甘油胶取明胶1g，加水6ml，浸泡至溶化，再加甘油7ml，加热并轻轻搅拌至完全混匀，用纱布过滤至培养皿中，加碱性品红溶液（碱性品红0. 1g，加无水乙醇600ml及樟油80ml，溶解）适量，混匀，凝固后即得封藏。6.磨片制片 坚硬的动物、矿物类药，

5、可采用磨片法制片。选取厚度约12mm的供试材料，置粗磨石（或磨砂玻璃板）上，加适量水，用食指、中指夹住或压住材料，在磨石上往返磨砺，待两面磨平，且厚度约数百微米时，将材料移置细磨石上，加水，用软木塞压在材料上，往返磨砺至透明，用水冲洗，再用乙醇处理和甘油乙醇试液装片。二、含饮片粉末的制剂显微制片按供试品不同剂型，散剂、胶囊剂（内容物为颗粒状，应研细），可直接取适量粉末；片剂取23片，水丸、糊丸、水蜜丸、锭剂等（包衣者除去包衣），取数丸或12锭，分别置乳钵中研成粉末，取适量粉末；蜜丸应将药丸切开，从切面由外至中央挑取适量样品或用水脱蜜后，吸取沉淀物少量。根据观察对象不同，分别按粉末制片法制片（1

6、5片）。三、细胞壁性质的鉴别1.木质化细胞壁 加间苯三酚试液12滴，稍放置，加盐酸1滴，因木质化程度不同，显红色或紫红色（间苯三酚试液 取间苯三酚0.5g，加乙醇使溶解成25ml，即得。本品应置玻璃塞瓶中，在暗处保存；间苯三酚盐酸试液 取间苯三酚0.1g，加乙醇1ml，再加盐酸9ml，混匀。本液应临用新制）。2.木栓化或角质化细胞璧 加苏丹试液（取苏丹0.01g，加90乙醇5ml溶解后，加甘油5ml，摇匀，即得），稍放置或微热，显橘红色至红色。3.纤维素细胞壁 加氯化锌碘试液（取氯化锌20g，加水10ml使溶解，加碘化钾2g溶解后，再加碘使饱和，即得），或先加碘试液湿润后，稍放置，再加硫酸溶液

7、（3350），显蓝色或紫色。4.硅质化细胞壁 加硫酸无变化。四、细胞内含物性质的鉴别 1.淀粉粒（1）加碘试液（取碘0.5g与碘化钾1.5g，加水25ml使溶解），显蓝色或紫色。（2）用甘油醋酸试液装片，置偏光显微镶下观察，未糊化的淀粉粒显偏光现象；已糊化的无偏光现象。2.糊粉粒（1）加碘试液，显棕色或黄棕色。（2）加硝酸汞试液，显砖红色。材料中如含有多量脂肪油，应先用乙醚或石油醚脱脂后进行试验。3.脂肪油、挥发油、树脂（1）加苏丹三试液，显播红色、红色或紫红色。 （2）加90乙醇，脂肪油和树脂不溶解（蓖麻油及巴豆油例外），挥发油则溶解。4.菊糖 加10%-蔡酚乙醇溶液，再加硫酸，显紫红色并溶

8、解。5.黏液 加钌红试液，显红色6.草酸钙结晶（1）加稀醋酸不溶解，加稀盐酸溶解而无气泡发生。（2）加硫酸溶液（12）逐渐溶解，片刻后析出针状硫酸钙结晶。7.碳酸钙结晶（钟乳体） 加稀盐酸溶解，同时有气泡发生。8.硅质 加硫酸不溶解。五、显微测量系指用目镜测微尺，在显微镜下测量细胞及细胞内含物等的大小。1.目镜测微尺 放在目镜筒内的一种标尺，为一个直径1820mm的圆形玻璃片，中央刻有精确等距离的平行线刻度，常为50格或100格（如图1）。2载物台测微尺 在特制的载玻片中央粘贴一刻有精细尺度的圆形玻片。通常将长1mm（或2mm）精确等分成100（或200）小格，每1小格长为10m，用以标定目镜

9、测微尺（如图2）。3.目镜测微尺的标定 用以确定使用同一显微镜及特定倍数的物镜、目镜和镜筒长度时，目镜测微尺上每一格所代表的长度。取载物台测微尺置显微镜载物台上，在高倍物镜（或低倍物镜）下，将测微尺刻度移至视好中央。将目镜测微尺（正面向上）放入目镜镜筒内，旋转目镜，并移动载物台测微尺，使目镜测微尺的“0”刻度线与载物台测微尺的某刻度线相重合，然后再找第二条重合刻度线，根据两条重合线间两种测微尺的小格数，计算出目镜测微尺每一小格在该物镜条件下相当的长度（m），如图3所示，目镜测微尺77个小格（077）与载物台测微尺的30个小格（0.71.0）相当，已知载物台测微尺每一小格的长度为10m。目镜测微

10、尺每一小格长度为： 10m×30÷773. 8m。当测定时要用不同的放大倍数时，应分别标定。4.测量方法 将需测量的目的物显微制片置显微镜载物台上，用目镜测微尺侧量目的物的小格数，乘以上述每一小格的微米数。通常是在高倍镜下测量，但欲测量较长的目的物，如纤维、导管、非腺毛等的长度时，需在低倍镜下测量。记录最大值与最小值（m），允许有少量数值略高或略低于规定。微量升华法鉴别，取金属片或载玻片，置石棉网上，金属片或载玻片上放一高约8mm的金属圈，圈内放里适量供试品粉末，圈上覆盖载玻片，在石棉网下用酒精灯缓缓加热，至粉末开始变焦，去火待冷，载玻片上有升华物凝集。将载玻片反转后，置显微镜下观察结晶形状、色泽，或取升华物加试液观察反应。专心-专注-专业