上海交通大学医学院检验医学系

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1、上海交通大学医学院检验医学系本科医学实验技术考试试题姓 名_ 学 号_ 得分_一选择题（15 分，每题 1 分）1.下列哪个不是提取 DNA 的原则A. 保证核酸一级结构完整性B. 保留所有核酸分子C. 核酸样品中不应存在有机溶剂和过高浓度的金属离子D. 蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度2. DNA 的变性A. 涉及到 DNA 双螺旋的熔链B. 可由温度的降低而引起C. 是不可逆的D. 会涉及到氢键的断裂3.PCR 反应中需要A. Mg+B.碱性磷酸酶 C.RNABD.DNA 连接酶4.荧光定量 PCR 检测样本的核酸量为A.初始核酸量 B .终末核酸量 C .平台期核酸量 D .

2、 Ct 值处核酸量 5.IEF 电泳时A. 上极槽置酸液，下极槽置碱液B. 酸液置负极槽，碱液置正极槽C. 上极槽置碱液，下极槽置酸液D. 碱液置负极槽，酸液置正极槽6.在凝胶层析中，下列哪种说法是错误的?A. Ve = Vo 故 Kd = 0 B. Ve = ViC. Ve = Vo + Vi 故 Kd = 1 D. 07.在亲和层析中，Kd 越大则A. KL越大B. KL越小 C. KL不变 D. KL不定8.葡聚糖 Sephadex G50 每克凝胶吸水量为A.0.05ml B.0.5ml C.5ml D.50ml9.用 Sephadex G50 分离血红蛋白和鱼精蛋白时， 鱼精蛋白的

3、Ve 减血红蛋白的 Ve 得该层析柱的A.内水体积 B.外水体积C.凝胶总体积D.凝胶干体积故 Kd = 1 Kd 1故 Ve = Vo +Kd Vi10. 以下哪个效应为聚丙烯酰胺凝胶电泳所特有？A. 浓缩效应 B. 分子筛效应 C. 电荷效应 D. 粘质效应11. 以下哪一点与差速离心法不相符合？A. 可用角式转头 B. 可用水平式转头C. 不可用刹车 D. 难以获得高纯度12. 沉降系数的单位是AS（Svedberg） B13. 下列哪种高效液相色谱不常用的检测器A. 紫外检测器 B. 示差折光检测器 C. 荧光检测器 D. 可见光监测器14. 以下哪种不是免疫细胞表面的功能分子A.TC

4、R B.BCR C.FCR D.GVHR 15流式细胞仪的分选纯度是指A. 是指分离后所得的细胞亚群数占原细胞样品中该亚群细胞数的百分比B. 是指分离后所丢失的细胞亚群数占原细胞样品中该亚群细胞数的百分比C. 是指分离前所得的细胞亚群数占原细胞样品中该亚群细胞数的百分比D. 是指分离后的样品中该亚群细胞所占的百分比 二、名词解释（ 20 分）1.Mobility2. RFLP3. Ct 值4. 分配系数5. 荧光原位杂交6. HLA 的生物学功能四、问答题（ 65 分）1. 简述 SSCP 原理以及银染原理。2. 结合所做实验，亲和层析法分离凝集素的载体和配基分别是什么？简述实验基 本原理及过

5、程。3. 请简述激光扫描共聚焦显微镜的基本原理。4. HLA 分型技术有哪些？5. 染色体组型分析一般有几种方法并简述其原理。6. 免疫细胞功能检测内容包括哪些？答案：一、选择题1、B 2 、A 3 、A 4 、A 5 、D 6 、B 7 、B 8 、C 9 、A 10 、A11、C 12 、A 13 、 D 14 、D 15 、D 二、名词解释1、 迁移率：指带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。M=Q/6 冗 rn2、限制性内切酶片段长度多态性（RFLP：限制性内切酶是一类具有特殊功能的核酸切割酶，不同的内切酶可辨认并作用于特异的DNA 序列，并将 DNA 切断。由于患者基因的缺失或插入，

6、造成被限制性内切酶切开的片段大小与正常人发生 差异，即限制性内切酶片段长度多态性。3、C 代表 Cycle，t 代表 threshold ，Ct 值的含义是：每个反应管内的荧光信号 到达设RCF 或 F C .克 D2980.6cm2/sec定的域值时所经历的循环数。4、通常被用来叙述一种化合物在互不相溶的两个相中分配的状况。对于层析来 说，分配系数定为分配平衡时该化合物在移动相中的浓度除以固定相中的浓度。5、是用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于 DNA 分子在染 色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列， 因而可

7、以将探针直接与染色体进行杂交从 而将特定的基因在染色体上定位。6、（1） 参与内源性抗原的递呈 （ 诱导对病毒感染细胞和肿瘤细胞的杀伤和溶解 ） 。作为 CD8+T!田胞的识别分子（CD8 的配体）。（3）参与胸腺内 T 细胞的分化 , 发育。（4）参与 NK 细胞的活化或抑制。（5）诱导同种移植排斥反应。三、问答题1、单链构象多态性分析：单链 DNA 片段呈复杂的空间结构，当一个碱基发生改 变即可引起空间构象发生改变， 导致 DNA 分子在 PAG 中所受的排阻大小不同， DNA 经 PCF后根据其位置改变可分辨单个碱基的改变。在 SSCF 凝胶中电泳时，单链 DNA 勺泳动速率主要取决于二

8、级空间结构，因此若 DNA 片段中碱基发生突变，将 会引起单链 DNA二级空间结构的改变，使 SSCF 凝胶上出现异常移动的电泳带（即 SSCP 阳性）。并根据核酸分子带有多个氨基和亚氨基，一定条件下可以与银离子 结合，在甲醛等还原剂的作用下，形成黑或褐色的银沉淀条带。2、亲和层析法分离凝集素的载体是 Sephadex G-50,配基是其糖基。实验基本原理为：豌豆凝集素可与葡聚糖凝胶发生特异性结合（专一性亲和） ， 再用含葡萄糖的氯化钠溶液将豌豆凝集素洗脱下来。 比较豌豆凝集素和杂蛋白对 兔红细胞凝集作用的差异来进行鉴定。过程为： 1、装柱； 2 、平衡； 3 、上样； 4 、分别洗脱；5 、

9、柱再生； 6 、结果检测。3、激光扫描共聚焦显微镜是采用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用 共轭聚焦原理和装置， 并利用计算机对所观察的对象进行数字图象处理的一套观 察、分析和输出系统。主要系统包括激光光源、自动显微镜、扫描模块（包括共 聚焦光路通道和针孔、扫描镜、检测器） 、数字信号处理器、计算机以及图象输 出设备(显示器、彩色打印机)等。通过激光扫描共聚焦显微镜，可以对观察样 品进行断层扫描和成像。因此，可以无损伤的观察和分析细胞的三维空间结构。 同时，通过激光扫描共聚焦显微镜也是活细胞的动态观察、 多重免疫荧光标记和 离子荧光标记观察的有力工具。4、1、血清学分型技术(1) HLA

10、-I类抗原的检测 HLA-A B、C 抗原型别鉴定均借助微量淋巴细胞毒试 验或称补体依赖的细胞毒试验。原理为取已知 HLA 抗血清加入待测外周血淋巴细 胞，作用后加入免补体，充分作用后加入染料，在倒置显微镜下判断结果，着染 的细胞为死亡细胞， 表示待检淋巴细胞表面具有已知抗血清所针对的抗原。 标准 抗原清取自多次经产妇或计划免疫志愿者。(2) HLA-DR DQ 抗原检测该二抗原分型方法同 HLA-1类抗原，但所用抗血清须经过血小板吸收以去除针对I类抗原的抗体。另外，待测细胞须是经纯化的B细胞。2、 细胞学分型技术HLA-DW 特异性与 HLA-DP 特异性可分别通过纯合分型细胞及预致敏淋巴细

11、胞试验 检测。二种方法的基本原理均是判断淋巴细胞在识别非已HLA 抗原决定簇后发生的增殖反应。 由于分型细胞来源困难以及操作手续繁琐， 细胞学分型技术下正逐 渐淘汰。3、 HLA 的 DNA 分型技术( 1 )限制性片段长度多态性检测技术 个体间抗原特异性来自氨基酸顺序的差别， 后者由编码基因的碱基顺序不同所决 定。这种碱基顺序的差别造成限制性内切酶识位置及酶切位点数目的不同， 从而 产生数量和长度不一的 DNA 酶切片段。一定的内切酶组合所得到的 HLA-RFLP 可 以和传统方法测定的 HLA 特异性型别相关。(2) PCR/SS(技术此法乃用人工合成的 HLA 型别特异的寡核苷酸序列作为

12、探针，与待检细胞经 PCR 扩增的 HLA 基因片段杂交，从而确定 HLA 型别，PCR/SS(技术具有灵敏度、特异 性强、需样本量少等优点。(3) PCR/SS 技术PCR/SSP 方法用乃设计出一整套等位基因组特异性引物，借助PCR 技术获得 HLA型别特异的扩增产物，可通过电泳直接分析带型决定 HLA 型别，从而大大简化了 实验步骤。5、(1)常规的形态分析。选用分裂旺盛细胞的有丝分裂中期的染色体制成染色 体组型图，以测定各染色体的长度(微米)或相对长度() ，着丝粒位置及染 色体两臂长的比例(臂比) ，鉴别随体及副缢痕的有无作为分析的依据。( 2)带型分析。显带技术是通过特殊的染色方法

13、使染色体的不同区域着色，使 染色体在光镜下呈现出明暗相间的带纹。 每个染色体都有特定的带纹， 甚至每个 染色体的长臂和短臂都有特异性。 根据染色体的不同带型， 可以更细致而可靠地 识别染色体的个性。(3)着色区段分析。染色体经低温、KCl 和酶解，HCI 或 HCI 与醋酸混合液体等 处理后制片， 能使染色体出现异固缩反应， 使异染色质区段着色可见。 在同源染 色体之间着色区段基本相同， 而在非同源染色体之间则有差别。 因此用着色区段 可以帮助识别染色体，作为分析染色体组型的一种方法。(4)定量细胞化学方法。即根据细胞核、染色体组或每一个染色体的DNA 含量以及其他化学特性去鉴别染色体。 如 DNA 含量的差别，一般能反映染色体大小的 差异，因此可作为组型分析的内容。6淋巴细胞功能检测，包括 T 细胞增殖试验、T 细胞分泌功能测定、T 细胞介 导的细胞毒试验以及体内试验；B 细胞增殖试验、溶血空斑试验、酶联免疫斑点 法以及体内试验；NK 细胞活性检测方法：酶释放法、放射性核素释放法、化学 发光法、流式细胞术法等。吞噬细胞功能检测，方法有趋化功能检测、吞噬和 杀菌功能测定等。