5光学显微镜操作技术实验复习

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1、考试说明考试说明对实验与探究能力的对实验与探究能力的相关要求相关要求 能独立完成生物学教材所规定的生物能独立完成生物学教材所规定的生物实验：实验：理解实验目的、原理、方法和操作理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合的运用。实验涉及的方法和技能进行综合的运用。 光学显微镜操作技术光学显微镜操作技术 制作临时装片制作临时装片 临时装片的染色临时装片的染色 低倍镜和高倍镜的使用低倍镜和高倍镜的使用2、观察观察DNA和和RNA在细胞中的分布在细胞中的分布P73、观察多种多样的细胞、观察多种多样的细胞4、观察胞质

2、环流及叶绿体、线粒体观察胞质环流及叶绿体、线粒体P191、生物组织中脂肪的检测、生物组织中脂肪的检测 P25、观察植物细胞的质壁分离及复原、观察植物细胞的质壁分离及复原P276、观察根尖分生组织细胞的有丝分裂、观察根尖分生组织细胞的有丝分裂P56 一、一、教材教材有关光学显微镜操作技术有关光学显微镜操作技术的实验的实验 二、观察根尖分生组织细胞的有丝分裂二、观察根尖分生组织细胞的有丝分裂1、实验、实验 目的目的: 制备制备洋葱根尖的临时洋葱根尖的临时装片，熟练使用装片，熟练使用高倍显微镜。高倍显微镜。2、实验、实验 原理原理:3、材料、材料 用具用具:洋葱洋葱，质量分数，质量分数10%的的盐酸

3、盐酸，质量分数，质量分数0.01g/ml的的龙胆龙胆紫溶液紫溶液（或（或醋酸洋红溶液醋酸洋红溶液），），光学显微镜光学显微镜，盖玻片，载，盖玻片，载玻片，培养皿玻片，培养皿2个，剪刀，镊子，滴管。个，剪刀，镊子，滴管。 观察观察植物细胞植物细胞有丝分裂有丝分裂过程，过程，描述描述观察到的处于不同观察到的处于不同 分裂时期的分裂时期的细胞形态细胞形态，绘制绘制植物细胞有丝分裂植物细胞有丝分裂简图简图。 盐酸使植物细胞之间的盐酸使植物细胞之间的果胶质层松散果胶质层松散， 使使根尖细胞彼此根尖细胞彼此 容易分开容易分开。 植物植物分生组织分生组织进行有丝分裂进行有丝分裂; 染色体容易被染色体容易被碱

4、性染料碱性染料着色；着色； 植物有丝分裂植物有丝分裂不同时期不同时期，染色体，染色体形态数目和行为形态数目和行为不同不同;水培促根水培促根长至长至1-5cm育根育根剪取根尖剪取根尖2-3mm取材取材 10%盐酸盐酸 1015min解离解离清水清水10min漂洗漂洗0.01g/ml龙胆龙胆紫紫12min染色染色盖片后缓挤压盖片后缓挤压覆滤纸轻敲击覆滤纸轻敲击压片压片 先低倍后高倍先低倍后高倍 观察分裂相观察分裂相绘出生物图绘出生物图观察观察4、方法步骤、方法步骤:5、实验现象、实验现象:6、实验结论、实验结论:7、注意事项、注意事项:描述描述观察到的处于不同观察到的处于不同分裂时期的分裂时期的细

5、胞形态细胞形态绘制绘制植物细胞有丝分裂植物细胞有丝分裂简图简图 制作洋葱根尖细胞分裂临时装片的操作程制作洋葱根尖细胞分裂临时装片的操作程序是序是 解离、漂洗、染色、制片解离、漂洗、染色、制片 三、有关光学显微镜操作技术实验的三、有关光学显微镜操作技术实验的 一般方法一般方法1、实验目的：、实验目的：2、实验原理：、实验原理：5、实验现象：、实验现象：6、实验结论：、实验结论：7、注意事项：、注意事项：3、材料用具：、材料用具：掌握实验方法和技能掌握实验方法和技能观察物质：观察物质：材料选择材料选择 试剂选择试剂选择 用具选择用具选择获取知识：获取知识：细胞形态、结构及物质分布细胞形态、结构及物

6、质分布细胞生命活动细胞生命活动观察观察结构：结构：染色染色静态静态-染色染色活体活体染色原理及方法染色原理及方法 原则原则4、方法步骤：、方法步骤：文字、绘图文字、绘图等形式等形式实验实验现象现象与实验与实验目的目的相相结合结合保护保护人员、显微镜安全人员、显微镜安全 提高提高实验观察质量实验观察质量 能独立完成生物学教材所规定的生物实能独立完成生物学教材所规定的生物实验：理解实验目的、原理、方法和操作步验：理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合的运用验涉及的方法和技能进行综合的运用。四、光学显微镜操作

7、技术实验方法和技能的四、光学显微镜操作技术实验方法和技能的综合运用综合运用资料：植物叶片表皮上分布着大量的气孔，气孔结构如资料：植物叶片表皮上分布着大量的气孔，气孔结构如图所示。当组成气孔的细胞（保卫细胞）吸水后，会膨胀图所示。当组成气孔的细胞（保卫细胞）吸水后，会膨胀变形，气孔开启变形，气孔开启。反之细胞失水收缩，气孔关闭。反之细胞失水收缩，气孔关闭。现提供现提供放置一小段时间的菠菜、清水、浓盐水、盖玻片、载玻片、放置一小段时间的菠菜、清水、浓盐水、盖玻片、载玻片、显微镜、吸水纸、滴管、镊子等材料用具，请设计一个实显微镜、吸水纸、滴管、镊子等材料用具，请设计一个实验，证明气孔具有开启和关闭的

8、功能。要求写出实验步骤、验，证明气孔具有开启和关闭的功能。要求写出实验步骤、预测实验结果并做出解释。预测实验结果并做出解释。 2、实验原理、实验原理:1、实验目的、实验目的:3、材料用具、材料用具:组成气孔的保卫细胞组成气孔的保卫细胞吸水吸水后，会后，会膨胀膨胀变形，变形，气孔开启气孔开启。反之细胞反之细胞失水收缩失水收缩，气孔关闭气孔关闭。证明证明气孔具有开启和关闭的功能。气孔具有开启和关闭的功能。放置一小段时间的放置一小段时间的菠菜菠菜、清水清水、浓盐水浓盐水、盖玻片、载玻、盖玻片、载玻片、显微镜、吸水纸、滴管、镊子等。片、显微镜、吸水纸、滴管、镊子等。资料：植物叶片表皮上分布着大量的气孔

9、，气孔结构如图所示。资料：植物叶片表皮上分布着大量的气孔，气孔结构如图所示。当组成气孔的细胞（保卫细胞）吸水后，会膨胀变形，气孔开启。当组成气孔的细胞（保卫细胞）吸水后，会膨胀变形，气孔开启。反之细胞失水收缩，气孔关闭。反之细胞失水收缩，气孔关闭。现提供放置一小段时间的菠菜、清现提供放置一小段时间的菠菜、清水、浓盐水、盖玻片、载玻片、显微镜、吸水纸、滴管、镊子等材水、浓盐水、盖玻片、载玻片、显微镜、吸水纸、滴管、镊子等材料用具，请设计一个实验，证明气孔具有开启和关闭的功能。要求料用具，请设计一个实验，证明气孔具有开启和关闭的功能。要求写出实验步骤、预测实验结果并做出解释。写出实验步骤、预测实验

10、结果并做出解释。4、方法步骤、方法步骤:放置一小段时间放置一小段时间的菠菜叶的菠菜叶连续连续观察气孔的变化观察气孔的变化，并作，并作记录记录。 临时装片的制作临时装片的制作净片净片滴水滴水取材取材展平展平盖片盖片染色染色吸水吸水 观察观察加盐水加盐水 观察观察5、预期实验结果、预期实验结果(现象现象)及及解释解释： 在清水中气孔开启在清水中气孔开启: 因为当细胞液浓度因为当细胞液浓度大于大于细胞外溶液的浓度时，保卫细胞细胞外溶液的浓度时，保卫细胞吸水吸水膨胀变形，气孔膨胀变形，气孔开启开启。在浓盐水中气孔关闭在浓盐水中气孔关闭: 因为当细胞液浓度因为当细胞液浓度小于小于细胞外溶液的浓度时，保卫

11、细胞细胞外溶液的浓度时，保卫细胞失水失水收缩，气孔收缩，气孔关闭关闭。 气孔具有开启和关闭的功能气孔具有开启和关闭的功能6、实验结论、实验结论:7、注意事项、注意事项:随堂练习随堂练习1、某学生在显微镜下观察花生子叶的切片，、某学生在显微镜下观察花生子叶的切片，当转动细准焦螺旋时，有一部分细胞看得清当转动细准焦螺旋时，有一部分细胞看得清晰，另一部分细胞较模糊，这是由于晰，另一部分细胞较模糊，这是由于( )A、反光镜未调节好、反光镜未调节好 B、标本切得厚薄不均、标本切得厚薄不均C、细调节器未调节好、细调节器未调节好 D、显微镜物镜损坏、显微镜物镜损坏2某一理想的图象位于视野的左下方，若想某一理

12、想的图象位于视野的左下方，若想将其移到视野中央，标本的移动方向是：将其移到视野中央，标本的移动方向是：（ ）A、左上、左上B、右上、右上C、左下、左下D、右下、右下 BC3用显微镜观察植物叶片细胞，低倍显微镜用显微镜观察植物叶片细胞，低倍显微镜视野与高倍显微镜视野相比、其特点是：视野与高倍显微镜视野相比、其特点是：A、亮，细胞数目多，形体小、亮，细胞数目多，形体小 B、暗，细胞数目多，形体小、暗，细胞数目多，形体小C、亮，细胞数目多，形体大、亮，细胞数目多，形体大 D、暗，细胞数目多，形体大、暗，细胞数目多，形体大A4使用显微高倍镜观察的顺序是使用显微高倍镜观察的顺序是顺、逆时针转动细准焦螺旋

13、，直到调清物顺、逆时针转动细准焦螺旋，直到调清物象为止象为止 转动转换器，使高倍物镜对准通光孔转动转换器，使高倍物镜对准通光孔在低倍镜下看清物象，要把目标移到视野在低倍镜下看清物象，要把目标移到视野中央中央A、 B、 C、 D、B1、染色一般原理：、染色一般原理：2、常见染色剂：、常见染色剂： 苏丹苏丹染液、（苏丹染液、（苏丹染液）、碘液、甲基绿染液）、碘液、甲基绿-派洛宁派洛宁（吡罗红）染液、健那绿染液、质量分数（吡罗红）染液、健那绿染液、质量分数0.01g/ml龙胆紫龙胆紫溶液、醋酸洋红溶液等。溶液、醋酸洋红溶液等。 染色原理及方法染色原理及方法染色剂与细胞内物质亲和或发生显色反应染色剂与

14、细胞内物质亲和或发生显色反应 步骤步骤1：临时装片制作的一般方法：临时装片制作的一般方法 步骤步骤 要要 求求 净净 防气泡、防污染防气泡、防污染预处理、时间、部位、大小、方法预处理、时间、部位、大小、方法 切、刮、挑、撕、剪切、刮、挑、撕、剪 浸入浸入 倾斜、慢放倾斜、慢放 方法、部位、数量方法、部位、数量引流、重复引流、重复 平展单层无气泡平展单层无气泡 染色均匀防污染染色均匀防污染 净片净片 滴水滴水 取材取材 展平展平 盖片盖片 染色染色 吸水吸水 步骤步骤2：使用光学显微镜观察的一般方法：使用光学显微镜观察的一般方法1、先先低倍显微镜观察低倍显微镜观察取镜取镜放置放置对光对光夹片夹片

15、调焦调焦移片移片2、再再高倍显微镜观察高倍显微镜观察 低倍镜选好目标低倍镜选好目标调节清晰调节清晰转换高倍镜转换高倍镜 调焦调焦调调光光观察观察DNA和和RNA在细胞中的分布在细胞中的分布1、实验原理：实验原理：(1)真核细胞的真核细胞的DNA主要分布在主要分布在细胞核细胞核内，内，RNA主要主要分布在分布在细胞质细胞质中。中。(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和和RNA的亲和的亲和力不同，力不同，甲基绿对甲基绿对DNA亲和力强，使亲和力强，使DNA显现出绿显现出绿色色，而，而吡罗红对吡罗红对RNA的亲和力强，使的亲和力强，使RNA呈现出红呈现出红色色。用甲基绿、

16、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可可同时同时显示显示DNA和和RNA在细胞中的分布。在细胞中的分布。(3)盐酸的作用盐酸的作用 盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；输； 盐酸使染色体中的盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。与染色剂的结合。2、实验目的：、实验目的：初步掌握观察初步掌握观察DNA和和RNA在细胞中分布的方法在细胞中分布的方法3、实验选材：、实验选材：（1）选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察；）选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察；（

17、2）常用的观察材料有）常用的观察材料有人的口腔上皮细胞人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片洋葱鳞片叶表皮细胞、肝脏细胞叶表皮细胞、肝脏细胞(为避免原有颜色的干扰，不为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞可使用紫色表皮细胞)（3） 取材要点取材要点 取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；中出现太多的杂质； 取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。组织细胞。 取动物肝脏细胞要涂一薄层取动物肝脏细胞要涂一薄层4、主要步骤、主要步骤(以观察口腔上皮细胞为例以观察口腔上皮细胞为例)（1）取材取材 滴：

18、滴： 在在洁净洁净的载玻片上滴一滴质量分数为的载玻片上滴一滴质量分数为0.9% 的的NaCl溶液；溶液； 刮：刮： 用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下 涂：涂： 将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中 烘：烘： 将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火 焰上烘干。焰上烘干。（2）水解水解 解：解： 将烘干的载玻片放入装有将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为质量分数为 8%的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解；的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解； 保：保： 将小烧杯放入装有将小烧杯放入装

19、有30温水的大烧杯中保温水的大烧杯中保 温温5分钟。分钟。（3）冲洗冲洗涂片涂片 冲：冲： 用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟；秒钟； 吸：吸： 用吸水纸吸去载玻片上的水分。用吸水纸吸去载玻片上的水分。（4）染色染色 染：用染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载滴在载玻片上玻片上染色染色5分钟；分钟； 吸：吸： 吸去多余染色剂；吸去多余染色剂； 盖：盖： 盖上盖玻片。盖上盖玻片。（5）观察观察 低：低： 在低倍物镜下，寻找在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽染色均匀，色泽浅浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；

20、高：高： 转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。察细胞核和细胞质的染色情况。随堂练习随堂练习1、洋葱根尖细胞的遗传物质存在于（、洋葱根尖细胞的遗传物质存在于（ ）A 细胞核细胞核B 细胞核、线粒体细胞核、线粒体C 细胞核、叶绿体细胞核、叶绿体D 细胞核、叶绿体、线粒体细胞核、叶绿体、线粒体2、关于、关于DNA和和RNA在口腔上皮细胞分布的叙述，正确在口腔上皮细胞分布的叙述，正确的是（的是（ ）A DNA和和RNA大部分位于细胞核中大部分位于细胞核中B DNA和和RNA大部分位于细胞质中大部分位于细胞质中C DNA大部分位于细胞质中，大部分位

21、于细胞质中，RNA大部分位于细胞核大部分位于细胞核中中D DNA大部分位于细胞核中，大部分位于细胞核中，RNA大部分位于细胞质大部分位于细胞质中中 BD 3、观察、观察DNA和和RNA在细胞中的分布时，下列哪项在细胞中的分布时，下列哪项操作是正确的（操作是正确的（ ）A 染色时先用甲基绿溶液染色，再滴加吡罗红染液染色时先用甲基绿溶液染色，再滴加吡罗红染液B 将涂片用将涂片用8%盐酸处理后，接着用染色剂染色盐酸处理后，接着用染色剂染色C 观察时应选择染色均匀、色泽较浅的区域观察时应选择染色均匀、色泽较浅的区域D 先用低倍物镜找到较清晰的细胞，然后换上高倍先用低倍物镜找到较清晰的细胞，然后换上高倍

22、物镜物镜4、在处理洋葱根尖细胞时，加入、在处理洋葱根尖细胞时，加入8%盐酸的目的不盐酸的目的不包括（包括（ ）A 改变细胞膜通透性，加速染色剂进入细胞改变细胞膜通透性，加速染色剂进入细胞B 使染色体中的使染色体中的DNA与蛋白质分离与蛋白质分离C 杀死细胞，有利于杀死细胞，有利于DNA与染色剂结合与染色剂结合D 水解水解DNA，破坏，破坏DNA分子结构分子结构C D用高倍镜观察线粒体和叶绿体用高倍镜观察线粒体和叶绿体实验原理：实验原理：叶绿体的辨认依据：叶绿体是叶绿体的辨认依据：叶绿体是绿色绿色的，呈扁的，呈扁平的平的椭圆球形椭圆球形或球形。或球形。线粒体辨认依据：线粒体的形态多样，有线粒体辨

23、认依据：线粒体的形态多样，有短短棒状棒状、圆球状、线形、哑铃形等。、圆球状、线形、哑铃形等。健那绿健那绿染液是染液是专一性专一性染线粒体的染线粒体的活细胞活细胞染料，染料，可以使活细胞中线粒体呈现可以使活细胞中线粒体呈现蓝绿色蓝绿色。 实验目的：实验目的： 使用高倍镜观察叶绿体和线粒体的形态分布使用高倍镜观察叶绿体和线粒体的形态分布实验材料实验材料：观察叶绿体时选用：观察叶绿体时选用：藓类的叶藓类的叶、黑藻的叶黑藻的叶。取这些材料的原因是：叶子取这些材料的原因是：叶子薄而小薄而小，叶绿，叶绿体清楚，可取整个小叶直接制片，所以作体清楚，可取整个小叶直接制片，所以作为实验的首选材料。为实验的首选材料。观察线粒体用观察线粒体用口腔上皮细胞口腔上皮细胞观察胞质环流以观察胞质环流以叶绿体叶绿体作为标志物作为标志物 随堂练习随堂练习1、叶绿体会随着细胞质流动而流动，下列操、叶绿体会随着细胞质流动而流动，下列操作中不属于加速黑藻细胞细胞质流动的方作中不属于加速黑藻细胞细胞质流动的方法是：法是：A.放在光下培养放在光下培养 B.放在放在2025的水中的水中C.煮沸煮沸 D.切伤部分叶片切伤部分叶片 C讲练测讲练测 P19 例例4