安捷伦1200标准操作规程
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1、Agilent 1200液相色谱仪操作规程设备组成:G1311A(四元泵)、G1329A(标准型自动进样器)、G1316A(柱温箱)、 G1314B(VWD检测器)、G1315D(DAD检测器)。基本操作步骤: (一)、开机:1、打开计算机,进入Windows XP画面.(IP 地址由Bootp Service 程序写入)2、打开 1200 LC 各模块电源。3、待各模块自检完成后,双击“仪器 1 联机”图标,或(点击屏幕左下角的“开始”,选择“程序”,选择“Agilent Chemstation",选择“仪器 1 联机")化学工作站自动与1200LC通讯,进入的工作站画面
2、如下所示。4、从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面, 点击“系统视图”,“样品视图”,使其命令前有“"标志,来调用所需的界面。5、把流动相放入溶剂瓶中.6、手动旋开冲洗阀。7、点击“泵”图标,点击“设置泵”选项,进入泵编辑画面。8、设流速:35ml/min,点击“确定”。9、点击“泵” 图标,点击“控制”选项,选中“启动”,点击“确定” ,则系统开始冲洗,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止。若使用缓冲盐,要加入泵头冲洗(seal-wash),点击“泵" 图标,点击“控制”选项,选择“用于泵密封垫清洗的泵”,开启清洗泵
3、前要配制90%水+10异丙醇,溶剂不能干涸。10、点击“泵” 图标,点击“控制”选项,选中“关闭”,点击“确定"关泵,手动旋紧冲洗阀。11、点击“泵”图标,点击“设置泵选项”,设流速:1。0ml/min。12、点击泵下面的瓶图标,选择“溶剂瓶添充量”如下图所示(以四元泵为例),输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积,点击“确定”。(二)数据采集方法编辑:1、开始编辑完整方法:从“方法”菜单中选择“编辑完整方法” 项,如下图所示选中除“数据分析 ”外的三项,点击“确定",进入下一画面。2、方法信息:在“方法注释"中加入方法的信息(如:This is for
4、test!)。点击 “确定”,进入下一画面。3、泵参数设定:(以四元泵为例)在“流速”处输入流量,如1.5ml/min,停止时间:10 min。在“溶剂 B”处输入70.0,(A=100-BCD) ,也可“插入 ”一行“时间表”,编辑梯度。在“压力限”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。点击“确定”,进入下一画面.4、自动进样器参数设定:(以标准型G1329A为例)选择合适的进样方式, 如图所示,进样体积 1。0ul,洗瓶位置为6号。“标准进样”-只能输入进样体积,此方式无洗针功能。“洗针进样”可以输入进样体积和洗瓶位置,此方式针从样品瓶抽完样品后,会在洗瓶中洗针。“使用进样器程序”-可以点击
5、“编辑” 按钮进行进样程序编辑.点击“确定”,进入下一画面。5、柱温箱参数设定: 在“温度"下面的空白方框内输入所需温度,如:40度。并选中它,点击“更多信息>>” 键,如图所示,选中“与左侧相同",使柱温箱的温度左右一致.点击“确定”,进入下一画面。6、VWD检测器参数设定: 在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在“峰宽 (响应时间)”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间, 如>0。1min (2s)。G1314B:最快采样速率13.74HZ。在“时间表" 中可以“插入”一行,输入随时间切换的波长,如1min ,波长=30
6、0nm。点击“确定”,进入下一画面.7、DAD检测器参数设定: 检测波长: 254nm,带宽=4nm,参比波长=360nm,带宽=100nm; 检测波长:一般选择最大吸收处的波长.样品带宽:一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长:一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽:至少要与样品信号的带宽相等,许多情况下用100nm作为缺省值。峰宽(响应时间):其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。狭缝狭缝窄,光谱分辨率高;宽时,噪音低。同时可以输入采集光谱方式,步长,范围,阈值.选中所用的灯。10、在“ 运行时选项表 ”中,选中“ 数据采集”,点击“确定”。11、从“方法”菜单,选中“方法另存
7、为”,输入一方法名,如“测试”,点击“确定”。12、从“视图”菜单中,选中“在线信号”,选中“信号窗口1”,然后点击“改变" 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击“确定”。(如同时检测二个信号,则重复10,选中“信号窗口2”.) 13、从“运行控制”菜单中,选择“样品信息”选项,如下图所示,输入操作者名称,如“安装工程师”;在“数据文件”中选择“手动"或“前缀/计数器”。区别: 手动每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。前缀/计数器“前缀”框中输入前缀,在“计数器”框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd数据0001,vwd数据0002。14
8、、点击“确定” ,从“仪器" 菜单选择“启动系统"。15、等仪器准备好,基线平稳,从“运行控制”菜单中选择“运行方法",进样。(若无自动进样器,则基线平稳后,进样并搬动手动进样阀,启动运行。) (三)、数据分析方法编辑: 1、从“视图”菜单中,点击“数据分析"进入数据分析画面。2、从“文件”菜单选择“调用信号",选中您的数据文件名,如下图所示.点击“ 确定”,则数据被调出.3、做谱图优化:从“图形"菜单中选择“信号选项”,如下图所示.从“范围” 中选择“满量程” 或“自动量程” 及合适的时间范围或选择“自定义量程” 调整。反复进行,直
9、到图的比例合适为止.点击“ 确定”。4、积分: 从“积分"菜单中选择“积分事件”选项,如下图所示.选择合适的“斜率灵敏度”,“峰宽”,“最小峰面积",“最小峰高”.从“积分”菜单中选择“积分”选项,则数据被积分。如积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止.点击左边“”图标,将积分参数存入方法。5、打印报告: 从“报告”菜单中选择“设定报告”选项。点击“定量结果"框右侧的黑三角,选中“面积百分比”,其它选项不变。点击“ 确定”。从“报告"菜单中选择“打印报告”,则报告结果将打印到屏幕上,如想输出到打印机上,则点击“报告” 底部的“打印”钮。(五)、关机: 1、关机前,先关灯,用相应的溶剂充分冲洗系统.2、退出化学工作站,依提示关泵,及其它窗口,关闭计算机(用shut down关).3、关闭Agilent 1200各模块电源开关。(六)、Agilent 1200 LC维护保养:1、色谱柱长时间不用,存放时,柱内应充满溶剂,两端封死(乙睛/甲醇适于反相色谱柱,正相色谱柱用相应的有机相)。2、手动进样器,当使用缓冲溶液时,要用水冲洗进样口。3、流动相使用前必须过滤,不要使用多日存放的蒸馏水(易长菌)。4、带sealwash的 1200,要配制90%水+10%异丙醇,开启seal-wash清洗泵,溶剂不能干涸。
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