中文版_ISO_14698-1_2003_生物污染控制总则

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1、刖Biso （国际标准化组织）是国家标准机关（iso成员机关）的全球性联合会。 世界标准的编写丁作通常di iso技术委员会来完成。每个成员机关如果对专设 技术委员会的某个主题感兴趣，就有权向该委员会派出代表。凡与iso有联系 的政府和非政府的国际纽织也可参加这项匸作。有关电标准化的乞项事宜， ISO正与国际电丁委员会进行密切合作。彼技术委员会采用的国际标笊草本要发到成员机关进行投票，是否作为国际 标准出版耍有75%以上的成员机关投票同意。国际标准14698-1由洁净室及其相关控制环境技术委员会ISO/TIC 209编写。ISO 14698的大标题为：洁净室及其相关控制坏境，其构成有以匕内容：

2、第一部分：临时标题：生物污染控制一总则第二部分：临时标题：牛物污染控制一牛物污染数据的评价9说明第三部分；临时标题：牛物污染控制一载有生物污染湿污物或牛物膜的惰 性表面的清洁与（或）消希效率的测量方法用户应汨注意，第一至第三部分的标题是第一部分发放时的丁作标题，如果 从T作计划中删去一个以上这样的标题，剩余部分可重新编号。附件A是标准性文件，是国际标准的组成部分。附件B到G为参考性文件, 提供较为详细的信息。序言木文描述的原理用于推行适宜的卫生做法。只要有规定要求，可使用标准所附附件中建 议的方法，但迅建议的方法要打具体规定的方法相当。1范围木标准描述了洁净技术使用时评估与控制生物污染的正式系

3、统的原则和基木方法，使危 险区内的生物污染得以被反复监控以及选抒适当的控制方法。在危险性小或可忽略不计的区 域，木标准可作为参考。2 参考标准以下标准含自通过木文文字的参比形成木标准条款的内容。出版的时候，'勺时提到的乞 版木是仃效的。所付标准都会有修改，希望以木国际标准为准的缔约方了解是弁可以采川以 下最新版木的标准。IEC和ISO成员要对当前有效的国际标准做好记录。ISO8402：质杲管理与质昴保证词汇3定义为进一步明确木标准的术语在洁净室及其相关控制环境系列文件中的标准定义増加了 额外的说明文字(如：微生物的，生物污染，有生命的)。以下定义适用于本标准：3. 13. I. 1行动

4、限吊：(action level)规定了用户根据控制环境庙宇的微生物限昴。注：勺超过行动限帚时，需立即采取行动并了解后续的纠正措施。3. 1. 2空气牛物污染(iicrobioconlaminalion)空气和/或气体受到活粒子的污染。3. 1. 3报警限吊(alert level)规定了用户为控制环境庙宇的微生物限郭发岀可能偏离止常条件的早期警告。注：超过报警限吊时，臧进行调杏以确保过程和/或环境得到控制。3. I. 4生物气溶胶(bioaerosol)芒气体环境屮弥散的生物介质(如：活粒了，过敏索，毒素或微生物原)3. 1. 5生物污染(biocontamination)材料、器件、个体、

5、表面、液体、气体或空气受活粒了的污染。3. I. 6洁净室(cleunroom)空气址浮粒了浓度数员耍受到控制的房间，其建造和使川方式是为了减少粒了带入房间 和在房间内产生和滞留，并且必要时其它相关参数(如：温度，湿度和压力)要得到控制。3. 1. 7接触装置(contact device)专用容器，用于装放火菌后的培养基，带有可维护表面。3. I. 8按触盘(control plate)接触装置，其容器是个硬盘。3. I. 9控制点(conirol poinl)控制环境内实施控制的任意点，在该点上可防止、消除生物污染危险或将危险减至介格 的标准。3 1. 10控制”、境(controlled

6、 environment)采用指定手段对污染源实施控制的规定区域。3 I. 11改正措施(corrective action)牛 物污染监控结果表明己超出报警或行动限崑时要采取的描施，3 1. 12危害(hazard)对个人、环境、工艺或产品产生不利影响的生物、化学或物理成分或因素。3 1. 13碰撞(impact)活粒子与固体表血的碰撞。3. 1. 14冲击 (impingement)见液体分离。3 1. 15液体分离:冲击(liquid trapping: impingement) 活粒了与液血碰撞，液体随厉进入。3 1. 16鉴定(qualification)展示实体是占能满足指定要求(

7、实体：活动、或丁艺、产品、组织或其组合)的过程(ISO 8402)3 1. 17危险(risk)存关危害的已知有害结果发生的可能性。3 1. 18沉降盘(sctllc plate)指敞开一段时间的合适的容器(如：装载适呆火菌培养基的、人小适出的培养皿)。3 I. 19拭子(swab)经过火菌的采集装過，对正在采样的微生物的生长无零性、无抑制性，由适当尺寸的特 定材料构成，装在固定装置上。312()法拭(swabbing)用拭了对指定表血涂拭进行采样，拭了要用适当的萃取液(洗脱液)预先浸湿，以探测 活粒了。3 I. 21目标限量 < target level)由用户白定的指定微生物限帚。3

8、122验证(validation)检杳和提供'怎观证明，表明转定川途的特殊耍求得到满足，以此实现确认(ISO 8402)3. 1. 23确认(verification)定期检資正式系统是占按要求工作。it：可采用曲测和审衣方法、规程与试聆的方式.包扌舌師机采样与分析，以确定正式系统是否正确地 工作。3. 1. 24活粒了 (viable particle)能够緊殖产生可观察到牛长的、孤立的、自然发生的或累积的微工物。3. 1. 25活单位(viableunit) (VU)一个以上集结的活粒了可算为一个单位。当琼脂培养基生成一些被称为菌落的VU时， 通常将它们称为菌落形成单位。3. 1.

9、 26危险区(zone at risk)个人、产品或材料(或以上内容的任意组合)极易受微生物污染的地理定义与界定的空 间。3. 2使用状态3. 2. 1空态(as-built)此状态为安装12达到完成了各动力管线的连接并能发挥作用、但无生产设备、材料或人 员。3. 2. 2静态(at-rest)此状态为设备己安装并能按用户与供应商之间达成的协议运行，但无人员进入。3. 2. 3动态(opeonional)比状态为安装已按指定方式发挥作川，指定数帚的人员已经进入并以约定的方式丁作。 4生物污染的控制原则址立、使用利维护正式系统，以便在洁净室利相关控制环境下评估和控制洁净室利相关 控制坏境下的并因

10、素，并影响丁艺和产品的微牛物质量。实现这一 11标有一些公认的办法，比如危险评估1:2,如危誉分析临界控制点(HACCP) 系统3： 4,故障树分析(FIA) 5,或故障方式与效果分析(FMEA) 6。也可使用其它 经确认的同等系统7。注：根据HACCP原则修改的系统举例以作参初8|。右这样的系统内部，训对具体危害及其控制的预防措施进行分析、确定和文件编制。本 标准只论述了微生物的危害。为了评估和控制微生物的危害，选定的系统至少要涉及以下原则：ai发现与匸艺、产品或个人相关的可能危害。评估发生危害的可能性，找到对貝:控制 的预防描施，b) 指定危险区，在每个区内，确定可被控制的点/过程/操作步

11、骤/环境条件，以消除危 害或减少其发生的可能性。0规定不允许超出的限杲，以保证控制。d) 规定有计划进行试验或观察，以监视控制系统。e) 规定“1监控表明在某个点/过卅/操作步骤/环境条件失控时耍采取的改正描施。0建立确认系统正常工作的规程。g) 建立并保存适当的文件。5 一般要求用户有责任开发、启用、实施生物污染控制的监控系统并对其进彳:文件编写，以便及时 发现不利条件。这样的计划必须符介应用现场、具体设施和指定条件，该系统必须是质彊管 理系统的细成部分。这耍包括对选定的止式系统进行适当的培VII（佇关生物污染的具体建议, 请看附件H）。此外，生物污染控制计划的设计与实施要做到减少采样本身造

12、成产品和/或危险区污染 的可能性。危险区的分类应按相关的原则或规定实施。按生物污染秤度进行的危险区分类可按以下 情况评估：低等危险或可忽略危险；屮等危险；高危险：最高危险。木标准不总味也不接受空气悬浮细菌和粒J'污染等级之间的肓接协定或冈果联系。如果 两个参数的I标等级是指定或强制的，可能需要单独控制。5. 1生物污染的分析与测量生物污染可构成危害的方血有表血、空气、液体、织物等（见附件B, D, E, F）。危险区如果采用了洁净技术，其探测与监控要按采样计划采用适片方法通过采样和计数 活单位来实施。当设施为空态、静态或随时可用状态时，要进行危险区的监控。在动态时也要按选定的 正式系统

13、进行常规监控。（见4）5. 2采样以下为采样的一般原则，详惜见附件A。5. 2. 1采样计划采样计划通过选定的正式系统编写，并作为文件式的程序格式化匚这对于准确评估和解 禅生物污染数据足必要的。区域处于动态时要进行采样，采样时间在系统的爪力绘人时（即：一班就要结束或活动 最最丿、时）。右静态或随时可用状态时采样也可尙关于设施言教性能方面的灯用信息。采样计划应包括以下内容：a）为在选定的止式系统的框架内提供参考的初期采样计划b）由于实施选定的正式系统产生的常规采样计划5. 2. 2采样计划的设计为了保护个人、环境、丁艺和产品，采样计划要考虑危险区的洁净度和正在进行活动要 求的生物污染控制程度。现

14、就要考虑的内容举例：a）现场选样，功能和地理方面：b）采样数帚：注：冇限或很少的采样量可能不足以捉供冇代表性数据.但冇时増加采样次数可以弥补不足。c）采样次数；d）采样方法，包拈试样址质昴上的还是数昴上的；e）采样惯加1积：D稀释剂，冲洗液，中和剂等；g）与影响培养结果特殊悄况有关的因索；h）危险区内操作、人员和设备的影响，它们构成的生物污染如：1）压缩气体；2）房间空气；3）制造设备；4）监控测最装胃；5）存储容器；6）区内人员数；7）人员的未保护表血：8）个人打扮：9）防护服10）墙壁/吊顶11）地面12）门13）工作台14）椅子15）从其它來源进入的空气5. 2. 3采样次数采样次数应通

15、过选定的正式系统（见4）制定，并且必要时遇到以下情况要经过确认和 /或修改：ai结果超过报警限最或行动限最b）延长了活动的停顿时间0在危险区发现了感染剂d）在作期内对通风系统进行重人维护e）T艺变化影响到环境0记录到霁常规结果g）清洗或消毒程序有变化ID菲计划事件引起生物污染5. 2. 4采样点采样点的确定要通过选定的正式系统，并要反映在采样计划内。注：每个点的可能采样在一次以上，在不同位置采样次数可能不同。在书面规榨确定的点进行采样。5. 2. 5采样区分每个采样的林签要有以下信息或可进行信息追溯的编码：a）采集点b）采集口期与时间c）采样人员d）采样时进行的活动e）采样区分及（如果合适）培

16、养基类型f）与采样计划不同之处5. 2. 6 方法要选择和采川适片的采样方法和仃关孝顺，以反映悄况的复杂性和变化，采样选川的设 备和方法要符合书血规程和设备厂家提供的要求。5. 3采样的处理样品的采集、运输和处理不应影响被采集细菌的活性和数吊。要考虑的因素：a）运输/存放条件和时间b）中和剂的使用0渗透溶质的使用5. 4样品的培养要根据预期的微住物种类及采样的环境以及视使用的规种和设备悄况选择适当的培养 基和/或培养条件（如：温度、时间长度、氧张力，相对湿度）。5. 4. 1培养基细菌和真菌的培养基应为标准型，如无另外要求，则为非选择型。培养基要有适当的添 加剂，以便为采样点竹残留的抗菌活动时

17、（如：清洗/消毒秤序厉或它们在上述控制环境下 经过处理所带的抗菌素）可以克服或减少影响。如果在洁净室或相关环境中使川培养基，培养基容器的外表血应保有与其川途相适应的 洁净度。注：根据使用现场的怖况，可能需契女层或三层外包。 要保证对使用的培养菇采用适肖的质最控制规程。5. 4. 2培养根据采样的环境条件、培养基特性和微生物方法的确认情况，臧为预期的微生物选择接 种培养基的适当培养温度和时间。注1：如果涉及到庆氧、耐热、微氧性、营养缺乏或需耍复杂营养的细菌和貞曲，可能需要特定的人气条 件和/或延长培养时间。一般公认的培养总时间是.细菌5天真菌7天，特别址在VU数很低时。从第一 天开始就应观察培养

18、皿。注2：经过适当培养条件下的初步培养.对于中温细偷，并根据采样环境.在室温和F1光条件下延长3天 的培养期可能楚明智的。已经得到证明，这样做可以使曾经暴肉丁空气和农面的受力细曲父活，以获得再 次形成菌落的条件。5. 5评价生物污染的评价网有效改正措施的足够信息。有关生物污染数据评价的详细资料见 ISO 14698-2 0注：评价整体生物污染足对危险区的氏耍控制功能。町用监控问接折标來监控微生物污架。但定.应X注 盘到，这样的指杯与生物污染Z间可能没冇直接的关系.因此.仍然要靠验证和确认来对生物污染进行£1 接的预测。5. 5. 1计数控制环境的细菌监控可包括空气、流体、表血、织物和

19、设备细菌污染的鉴定，以便在短 时间内及时获得到细菌状态的代表性预测。一般认可的做法址，与对其它微生物试样相同， 对生物汚染的预测可受到实施该试验使用的仪表与规种的彫响。肉此从采样中计数活粒子只 能在经过适当的培养后以经过确认的适当方法实施。计数活粒了的信息见相应的文件13： 145. 5. 2特征化细菌监控不诃能对控制坏境7中全部细菌污染进彳j鉴别和帚化.对牛物污染数据的评 价包括对采样获得的策工物进彳J适'的特征化。特征化的程序取决于采样区的临界性或荷凋 杳是否能保证深入鉴别。将微生物分成几人类（如按照菌落或细胞组织，污斑形成特性或其 它特点分类）就足够了。实施时，对相关微生物的鉴别

20、可采用规定的微生物的实验室方法至 少做到屈类鉴别。鉴别临界区的撮物要优先于对非临界区的微生物鉴别。注：鑒别控制环境分离出的活粒子可能冇助于特定危险区帀光想到的普通菌群.以及清洗消离程序、方法 和制剂的效果。山鉴別程序收信的佶息还可用于调査污染源尤其是超过行动限呈或在做决策时。6 I标、报警和行动限昴廻议对危险区环境中通常存在的菌群要有数、质员上的了解，以便对个人、丁艺、产品 或设备的污染危险做出判断，及进行有惹义的难和采取改正措施。日标、报警和行动限赧丿应由洁净室和/或控制环境的用户独立制定。应根据危险区的等 级划分和使用现场具体的耍求，指定适当的生物污染限帚:。该限帚采用控制环境的当前技术

21、应很乔易得到。it：在控制坏境的起动初期.及根据正式系统确定的间隔期间内.应帀议关丁片物污染水平的数据.以制 定和/或确定报警耳行动限呈的基线。该限MhVij冃标限虽仃关.但也应对它们辺行审议并做出适调整。7效果的表达与解释生物污染的数笊预测完成片，液体的每份采样（或计数单位）的活实体（单位）数川活 体单位（VU）来表达，或者如果采用菌落计数、以菌落形成单位（CFU）来评佔，则推广 到SI测吊单位（如nA dm2, m,等）。数据评价的有关资料见ISO 14698-20由于细菌环境监控方法存在公认的限制，对生物污染的审议要延长时间，以决定趋势是 占确定。随后可根据以上趋势评价和解释控制坏境的工

22、物汚染状态。根据对以I：调杏和具体 生物试验结果的审议，对因要求产生的结果的巫要性和操作或按该条件加丁的产品的可接受 性做出决定。危险区的微生物分类要按总生物污染的日标限戢确定进行，这包括了空气、流体、表血、 织物和设备的细菌含最。8验证根据4f,要定期检查监控生物污染的结果，以确认选定的系统按规程发挥作用，以及 指定的要求得到了满足。这样做可能要增加试验及对备项作步骤和设备进行系统的验证， 以保证系统具有良好的功能。如果难表明偏离了规定限帚，或者控制环境的微生物状态起了变化，应实施改正。必要 时要修改系统。9鉴定、认证和再认证对选定的系统进行鉴定是认证过程的一部分。注：有关微生物认证的方法资

23、料见15： 16110文件文件戒包括或参阅以下内容：a）采样类型；b）使用的试验方法，以及必要时提供标准的编巧和标題：c）使用的采集装置：d）采样点；e）采样时进行的活动类型，包括人员进入状态；f）视情况可提供采样区内人数；8）采样口期及必要是时采样时间；h）视情况提供采样用时；i）采样杏验UWJ：J）培养的条件和时长；k）与所说试验方法不一致的地方和可能已影响到结果的因索；l）初次和末次读出厉采集标木检伶的试验结果；m）完成数晴试验后，VU数要推广到郴应的SI测帚单位;n）如果已特征化，要有提取物的说明；）负责试验报告的组织名称和试验完成LI期；P）负资试验的人员姓名和签字。附件A （标准）

24、生物污染测量方法的原则A. 1序言木附件列出了在需要牛物污染控制的”、境下表面生物污染分析、测慣和评估须逍守的原 则。为了探测存在和可能需要监控的活粒子，附件涉及采集代表性采样。木标准描述了应用洁净技术的危险区空物污染评佔与控制的一般原则与基木方法，对生物污 染的评估应与木标准一道进行。此外，还要考虑以下因素：a）采样设备与方法；b）采样效率；c）储运过程屮采样活粒了的存活：d）结果表达。A. 2原则危险区细菌污染的探测与监控方法是按照采样计划用适当的采样装置采集活粒了。A. 3选择采样装置由于生物污染的采集与预测育多种方法和相关装置，因此采样装置的选择应根据监控区 的惜况预先判别。选择特定的

25、用途应考虑以下重要因素：a）要进行采样的活粒了类型（营养细胞和/或细菌及/或真菌抱了）；b）活粒了对采样过程的敏感性；c）活粒子的预期浓度；d）原生菌群；e）混合种群；f）探测少悄生物污染的能力：g）采样危险区周1曲环境条件；h）采样时间与耗时：i）采样方法，采样培养基的材料和特性；j）采集精度与效率：k）培养及活粒子探测和评估方法；l）要得到的信息类型（如数帛、质昴方面）。A. 4采样方法由于要采样的成分何多种类型，也有一些对它们进行釆样的方法2： 4： 5： 8,选定的 方法要考虑由环境和要使用的监控设备L：导的限制。在对活粒了进行采样时，丿应考虑以下重 要因索：a）采集，粒了法除和/或捕

26、集的效率；b）采集与储运过秤屮活粒了的存活；c）必要时要考虑萃取/冲洗液。A. 5采样代表性样品的采集所使用的方法和容器不应増加和/或抑制I古I有的生物污染。（见5.3）附录B（参考）气悬浮生物污染测量方法指导B. 1序言木附件提供了抬导并描述了在需要生物污染控制的环境下空气悬浮生物污染的分析与 测杲技术。为了探测存在和可能需要监控的活粒了，附件涉及采集代表性采样。气悬浮生物污染的评估逍循木标准和附件A的基木原则，它们要求在采川洁净技术时 要建立评估和控制生物污染的正式系统。对危险区气悬浮生物污染的评估原则和方法进行了说明。采样装置的鉴定技术见附件C （参考）。B. 2原则儿危险区为空态、静态

27、、适儿的对以使用态和常规的正常使用时，危险区内空气的细菌 污染探测和监控方法是按采样计划用适当的采样装置采集活粒了。通过对采集培养基的肓接 震动或采用专用膜过滤器过滤（对以上膜进行厉续处理）采集粒了。B. 3采样装过空气悬浮活粒了的采集和计数有并种方法和采样装SI7： 24： 28：特殊方法、材料和 装置的选用取决于采样的日的。气溶胶采样的效率会受到粒子动最的影响，（质杲与速率的 产物）；因此在选择适肖的方法和设备17； 18； 21-28J时需格外注盘。采样装登分为两类：1）无源采样装直，如沉淀盘，（涂敷玻璃或金屈盘或滑动片和布：2）佇源采样装置，如震动和液体捕集采样器和过滤采样器。以上装置

28、的生产厂家须提供使用说明书和使用限制。B. 3. 1选择采样装迢采样率，采样时长和选定的采样装置可能会对采集的徵生物的存活性产生很人的彫响。 冲击装置可能不适合对空气悬浮活粒了的采样，冈为乔星小，采样率低并且容易打碎活粒了 团21。由于投入商业使用的细菌空气采样系统数帚人、种类多，所有系统又部何备自不同的物 理和生物效率19； 32因此在选择特定的用途时应至少考虑以下因索：a)需采样的活粒子的类型（细菌和/或貞菌的砲了和/或昔养细胞）32b)活粒了对采样榨序的敏感度c)期望的活粒子浓度d)探测物污染帚多少的能力e)用于所期望微生物的适旳培养基f)采样时间与耗时g)采样环境的周囤环境条件h)采样

29、器对单向气流的干扰i)采样器的特性，如：1）对于低含昴空气悬浮活粒了的适当采吸流昴2）适半的震动/气流速度3）采样精度与效率4）易于搬运（璽杲，体积）和操作（使用方便，辅助设备，对真空泵的依赖，水、电等）5）易于清洗、消毒或灭菌6）对要测帚的生物污染不会白然用加活粒了来自采样器的排气不应污染洁净室。B. 3. 2无源细菌采样装置（沉淀式采样装置）无源细菌空气采样器（重力沉淀采样器）如沉淀盘，不测虽空气屮活粒了的总数，只测 扯活粒了污染表血的速度。I人1此沉淀盘可川于对产晶的气悬浮污染进行数、质楚的评估。先 按单位时间确定沉淀盘的计数，然厉将产品眾露的血积和时间与沉淀盘的相联系，即可算岀 产品可

30、能受到的污染28-30 0以上装置没有总气悬浮粒了的数帯监控值，因为它们无法探测不沉淀到培养基农面的微 生物，而I汕粒了群的沉淀速度会受到气流及其扰动的影响，沉淀盘只应从数吊、质吊方面 评估21|人I巫力沉淀于特定使川场内的空气悬浮粒了对产品/装：87表血的可能污染情况28： 29： 30（见附件 D）。B. 3. 3有源细菌采样器为评估空气的细菌质址，需要在危险区使川育源空气采样装置。有儿种商川的育源装置， 每种都有H己的限制。为了测杲特殊悄况如通风管和单向气流中的空气生物污染，应在等动 力状态下进行采样。如果采样不是等动力的，得到的就可能是无代表性的、数帚偏人的人粒 子。如果吸管与气流方向

31、形成角度，也会引起活粒了的失真分布。进入测最装置的抽气速率 应与周围空气移动的速率相同且与气流方向一致。丈多数的采样器都有固定的真空入口方向，可以是垂耳的（曲朝下），也可以是水平的。 有的采样器灯町移动的入11。入11速率通常是固定的：但是，在不同装置之间入II速率会有 很人区别，这一点在选拌设备时应加以考虑。采样时，采样点的空气移动方向可采用烟玻管来记录。有的采样器不适于等动力采样，选择时应考虎监控要求。根据采样原理，有两种上要采样方 法和相应的设备适用于生物污染止常的的危险区（低禽帚），即恿动采样器和过滤采样器。B. 3. 3. 1震动和液体捕集采样器由于有多种震动和液体捕集或冲击采样器可

32、用于探测活粒子的高低浓度19； 30,选用的装 置应有以下特点：a）撞击培养基的采样空气的慝动速度足以下两种情况之间的折衷，1）速率高，足以采集 到约lum的活粒了，2）,速率低，足以避免因机械状伤或打碎细菌或微小宾菌团引起 的活粒子存活性的下降：b）抽气流乗，它决定着采样时间，是两方面肉累的折衷，即需要足够的釆样帚以探测含 昴很低的心物污染和避免人杲采样会使采集培养基的物理与工物特性发工巫人改变；c）在生物污染较重区，请适肖选用怠动方法和采样帚，以得到能够解读结果数据的单独 的菌群20。采样裝置至少要符合以下要求：a）在适当时间内采集In?、而又不会使采样培养基明显干燥的足够流駅，如约lOO

33、Umin：b）对培养基的屮等震动程度，如v2（）m/s。B. 3. 3. 2过滤采样器过滤采样装置广泛用于气溶胶采样.通过适当选择送气机、过滤器介质和过滤器尺寸， 在给定的采样时间内儿乎可做任意杲的采样。由丁采用脱水方法，过滤可能会降低某些种类微生物的存活性，因此，选择适当的采样器设 计I分巫要。过滤器通过若干原理从大气中或气流中去除粒子。这些原理有直接拦截,惯性 处理，扩散沉枳，静电吸附和重力吸引。在给定情况下起决定作川的原理取决于流虽、过滤 器性质和气溶胶性质。对于过滤采样装置的设计和使用，请考虑以下重要因素：a）没有影响活粒了震动过滤般速度的静电；b）保证适用的限制或抽气流楚及震动空气速

34、度与B. 3. 3. 1W同；c）保证过滤膜架与真空源连接，带有测星采吸率的装置，不污染过滤器材料；d）保证过滤膜架可在无菌状态下放遇于过滤器架上，并可在过滤抻所需吊的空气肩以无 菌的方式取下，可血接放到培养基上或者如果是胶质过滤般，则按以下要求实施办法:1）建议方法：将滤脱溶于培养1U1内2.5ml的无菌氯化讷缓冲液中（0.9%v/v）。适勺摇动培 养皿后将其遂于培养箱内，以适当温度培养I到2（）分钟以促进溶解。使用该溶液的一 份等分试样接种到适当的培养基上以适当温度培养。2）替代方法：将滤般肓接放到适当的培养基上以适当温度培养。进行生物气溶胶20采样时，请考虑环境条件和过滤器要求的限制，如

35、：a）淋度；b）含水昴:；c）人工制品配方；d）过滤器尺寸；e）过滤器机械特性；f）从采样点到实验室的输送条件；g）只针对活粒了的计数限制。B. 4结果的表述建议活粒了数的表达采用活单位（VU）,推广到In,。附件C （参考）空气采样器效率的评估与鉴定指导C. 1引言木附件提供的指导和技术说明涉及对空气生物污染测量所用空气采样器的评估与鉴 定.通常，这项工作由空气采样器的厂家或第三方试验机构完成.细菌空气采样器的总效率是两方血不同因素的产物：a）物理效率；b）生物效率：馬动采样器的物理效率取决于粒了的特点，包括粒径、形状和密度：生物效率取决于若 干因索，如：ai采集到的活粒了的类型：b）活粒子

36、的生长特点：c）活粒了的代谢活动；d）预空气处理：ci大气条件（包扌舌温湿度）0气溶胶的种类和存在时间：g）捕集机制和采样时间25因此在使用细菌采样器了解以上两点效率因索并拥育它们的特点数据是I分重要的，这 可使采样器按用途得到鉴定，及根据采样得到的污染结果与潜力有关。C. 2鉴定的原则为r对装置做出鉴定，要对工物气溶胶的物理与生物效率进行特征化，要考虑的问题仃:a）在适当房间内可能遇到粒了范用采集气溶胶粒了的物理效率：b）节兰氏阳性菌、苹兰氏阴性茵和他了的生物效率。如果需要对危防区真菌污染探测采 样器进行鉴定，应包括对酵母生物气溶胶样品的采集：一在环境控制区内；一有标准生物气溶胶：一采用产生

37、和保持生物气溶胶空气悬浮状态的标准方法；按指定的环境参数21。 注：有些空气悬浮微生物，尤其是无性繁殖的代谢式活性菌在采集过程屮常常失去活性。C. 3采样器与试验条件C. 3. I试验区试验区应带高效过滤器出风口和排风，并应以负压运行。温度应保持在（22±2）,相对湿度丿应在（5（）±10）%。试验区的仪器在操作时不得勺人员进 入该区。.C. 3. 2生物气溶胶为便于测帚，试验川气溶胶应为非病原性的，应有良好的生存和存储特性，即遗传上是 稳定的。气溶胶采用适半的试验菌的液体悬浮液制作.试验菌生长的培养基可满足木细菌的营养 要求。C. 3. 2. 2测试物理效率的试验菌株使用

38、的试验菌株应为枯茸杆菌黑色变种NCTC 10073（=DSM 2277）,制备成清洗他了 悬浮液.洗岀的抱了应置于带有不同浓度悬浮固体的X0%的乙醉屮以1（）&到IO7ml/Z间的浓度进行离心和悬浮，以便在气溶胶化时产牛8种粒径。所需固体浓度的计算诃按以卜说明： 按论文26和27描述的基木技术。C. 3. 2. 3生物效率生物效率试验应采用活砲了( 109VU/ml)和无性繁殖细胞的混合物(50： 50)。C. 3. 2. 3. 1试验菌株，革兰氏阳性建议将嗜酸乳杆菌ATCC 4556 (=DSM 20079； =NCIB8690)作为适宜的试验菌株，代 表节兰氏阳性菌。该有机物应以(

39、36±1) -C在Elliker流体培养基或经碰认的同等培养基屮培养(18±2) 小时。建议将Elliker琼脂或经确认的同等培养基作为适宜的固体采集培养基，并皿在(36±1) 匸培养。C. 3. 2. 3. 2试验菌株，革兰氏阴性览议将人肠杆菌ATCC 10536 (=DSM 682； =NCIB 8879)作为适宜的试验菌株，代表 革兰氏阴性菌。该有机物丿"以(36±1) C培养，臧将5ml该培养物接种至45ml的新鲜胰化豚人豆流体 培养基或经确认的同等培养基上，培养4儿然厉该流体培养基川作喷洒液以5()： 5()的比例 与每ml枯草杆菌黑

40、色变种悬浮液屮1(?的砲了进行混合。使用的固体采集培养基应为酪蛋白豚人豆粉腺琼脂或经确认的同尊培养-基，以(36±1) *C 培养。C. 3. 2. 3. 3 醉母试验菌株注:必要时,建议将发面酵母 ATCC 9804 (=DSM 70478； =NCYC 91； =CBS 4000)种 洁净室中不一定能找到的酵母作为适宜的试验菌株，代表貞菌。该佇机物应以(30±1) °C在麦芽浸膏流体培养基或确认的同等培养上培养(18±2) ho 然麻该流体培养基用作喷洒液以50： 50的比例与每ml枯草杆茵黑色变种悬浮液中1(户的他 子进行混合。使用的采集培养基应为

41、麦芽浸膏琼脂或经确认的同等培养基，以(30±1) 培养。C. 3. 3鉴定C. 3. 3. 1物理效率试验基本技术在26和27中有说明。所何气溶胶化器应能产生诸如由陀螺气溶胶发生器(STAG)产生的控制粒径气溶胶。产 生的初始粒径见等式：式屮d=初始湿粒径(m)：k二数值5, 0的常数：表面张力(Jxm2)3=旋转速度(S_，)P 二密度(kg x m3)D二转盘肖径(m)形成丿乙粒了通过蒸发和对于下血算式的固体含慣缩小粒径: 式中Vi=-Vi初始体枳，d为在蒸发前由陀螺气溶胶发生器形成的初始半径。该初始粒了的体积丿2小于 10 W,以保证每个粒子只育一个砲子。该粒了中的固体址W (

42、g)来自于初始溶液中粒子体 积和固体Ctconc solid)的浓度(g*!Il3),如下式:仁”爲溶剂完全蒸发后的粒子体积(Vp)只由固体和单分借用施子构成，因此按等式(4)计算. 初始粒了中的固体含帚除以固体密度(P )：(4)(6)V =vv/因此,粒子半径可按等式(5)计算：3 V扌= 4含灯一个砲了的粒了半径为：13 V5=，4式中为抱子的体积(约：4.9x10 ” m3)由于周体的密度不同于抱子密度,同等粒径(EPD)由等式)(7)计算: 叽幽r/()£式中d曰包子密度;p用沪水密度。在0. 8微米至15微米玄径范帼内,应为粒径准备5种解法。0.8微米的粒子为悬浮在蒸惚

43、水屮裸抱子。C. 3. 3. 1 测试C. 3. 3. 1. 1物理效率陀螺帽气溶胶发生器(STAG)应送无油过滤(O.Oluii)后的压缩空气，并用端动泵以 约lml/min的流最送喷洒溶液。实验应按以上说明在实验区内进行。需试验的采样器和以约51/min流速运行的0. 45 y m 的膜过滤器，旋转位置约离STAG1米而与转盘同高，以便100%地|叫收微小杆菌。每个选定 的粒径，至少应进行10次比较实验。使川的采集培养甚就为酪蛋腺人豆粉腺琼脂或经确认的同等培养基。0. 3. 3. 1. 2生物效率混介悬浮液应按前血说明在含勺采样装置的实验区内气溶胶化。使用的喷雾器应彖一次 性手持治疗仪一样

44、可产生多分散气溶胶。气溶胶应持续发生约一分钟，采样器也运行相同的 时间或者为避免培养基负荷过重而要求的时间。C. 4菌落计数经过适当时间的培养，可用肉眼或11动装置计数可见菌落。菌落数的计数和表示采用均 1相关的活单位（VU）。C. 5结果的评价与解释C. 5. 1物理效率测试测试采样器（TS）的VU帚:除以过滤采样器（MS）得到的细菌浓度（VU）,乘以100得出 采集装置的物理效率因数（P，），可按等式（8）计算。结果可写为：粒了径与效率百分率之 比，衿点写作平均值土标准偏寿值。最好按等式（8）计算的情况取到空气采样器物理效率【人1数。建议将该物理效率肉数按以下 等式解释空气生物污染评价的结

45、果：O气溶胶冀实浓度C,5二测试采样器得到的气溶胶浓度 Pv二用等式（8）计算的物理效率因数C. 5. 2生物效率测试测试菌株与抱了示踪物（微小杆菌抱了）之间的气溶胶比率评价应采川稀释和计数池了 菌落数和采样容器表血菌株菌落來进行。采样品发现的比率除以喷洒液比率，乘以100,即 得出菌株和采样器生物效率的百分率。菌株菌落与砲了示踪物之比：VU（3VU（gp）VUM（10）在采样后确定，并为每次稀释计算及除以细菌/抱了悬浮液的初始VU计数，再乘以100即得 出生物效率因数，见等式（11）:Be = VU，lGN），（GP> xOOVU（） （11）附件D （参考）表面生物污染的测量方法指导

46、D. 1引言木附件提供了指导并描述了在需要主物污染控制的”、境下表面生物污染的分析与测帛 技术。为了探测存在和可能需要监控的活粒子，附件涉及采集代农性采样。对危险区表面污染的评价原则和方法进行了说明。表血生物污架的评价遵循木标准和附件A的基木原则，它们要求在采用洁净技术时要建立 评价和控制生物污染的正式系统。D. 2原则当危险区为空态、静态、适当的可以使用态和在常规的正常使用时，危险区内空气的细 菌污染探测和监控方法是按采样计划用适当的采样装置采集汕粒了 c通过对采集培养基的I'i 接震动或采用专用膜过滤器过滤（对以上腹进彳j后续处理）采集粒子。D. 3采样装置D. 3. 1接触式采样

47、装逊接触式采样装置可用于平滑表面0可用接触盘或其它装在适当软式或硕式容器中的培养基与采样表血接触的其它装置。使 用的表面接触装置应有不小于20cm2的接触表面。使用接触盘的水平采样点的理想方法如下：培养基表面应与采样点接触不少于10s,向 胳个接触农血施加怛定均匀的压力（如施加的质帚约为25g/cm2）,不得佇环形或线性运动。 装置符接触并拿开厉，要加盖并尽快用适当的培养条件培养。D. 3. 2间接采样装登采样活体单位也对采川适勺的棉钎技术|10-12|0采用经过灭菌的潮湿锦钎、海绵或擦布 特别适用于大面积、-II：吸引貨、不观则或接触装置无法使用的凹面的采样。也可使用沉淀盘对悬浮活粒了因需:

48、力沉淀于特定使用区形成的表血污染进行数质赧评 估。D. 3. 2. 1 棉钎应使用棉钎（最好是合成物4, 5|）先用经过消每的冲洗介质，如缓冲生理盐水、林格 氏溶液或适当的培养基沾湿。在指定采样区用潮湿棉钎密扌II呼行擦拭，同时缓慢转动棉钎。 W对和同区重复进行采样，川同一棉钎垂在于开始的涂抹进行涂擦。采样斤棉钎应置于规 定彊的适当的消毒冲洗液中搅动。应对该冲洗液做活单位试验（10提供了适当的试验方 法）。D. 3. 2. 2沉淀盘必要时，可先用装有适、"|培养基的沉淀盘确定在给定时间内通过重力作用从空气沉淀到 表血的带菌粒了数；然后该盘送去培养。此法不测最空气屮含有的细菌总数，只测

49、最在采样 期间沉淀在表曲的细菌数。使用人I径的培养11IL （即14cm31径）并延长接触时间可提高此 方法的灵敏度，但要防止培养基脱水（16提供了适当的方法）。D. 4结果的表述妲议表面活粒了数的表达采川活单位（VU）,推广到ldm2,或者如果使川沉淀盘，则 推广到 ldm2/h（ldm2=100cm2）o附件E （参考）织品生物污染的测量方法指导E. 1引肓木附件提供了指导并描述了在需要生物污染控制的环境下织品工物污染可能选用的分 析与测昴技术。对危险区织品污染的评价原则和方法进行了说明。织品生物污染的评价遵循木标准和附件A的基木原则，它们要求在采用洁净技术时要 建立评价和控制织品生物污染

50、的正式系统。为了探测和监控织品上或从织品脱落的活粒子，本评价涉及采集代表性采样。在危险区 使用的织品应有足够的洁净度以适于其使用的活动和用途。应当对织品的生物污染进行监控 以减少对危险区内活动、产品、装置等构成不利彩响的危险。夫于织品的选释，以了解危险区内相关牛物污染的情况，以及对该工物污染的评价，臧 考虑以下重要因素：a）织品的种类与形式，如保护衣，擦布等；b）织物选择；c）织物的粒了产生与扩散特点：d）I人I织物特性形成的阻隔作川不足；e）织品的消洗处理：0从织品上清除粒了的效率；g）织品的设计；h）织品的可渗透率和表面条件。女1果发现织品的生物污染超帚，耍采用适当的方法查找可能的原因。一

51、般廉因可能有: ai因织物特性如纤维类型、编织或设计引起的粒了不良滞留：b使用不当，如衣服更换不勤：c）除污染不充分和/或消洗效果不好；d）危险区微生物限制的织品涓洗周期不适半。木附件提供的指导不用于确定活粒子对织物的渗透率，为此需用其它技术34。此外， 木附件不涉及某些用途可能需要的特定方面的织品，如经火菌和去粒了的织物，也不涉及由 日检或触摸判别的织品质杲。E. 2原则危险区织品细菌污染通过使用适当的采样装置按采样H划采集活粒了实施探测和监控。 采集活粒了可用頁接接触或间接采集法，如使用膜过滤技术。E. 3采样装置木章说明的笋种采样方法在用来除粒了时可能会有很人的不同。E. 3. 1接触式

52、采样装置为确定织品上的活粒了，可使用适肖的接触式装置（见附件D）,包拈可用于小织品的 装置。如果使用的采样装置在支托上用了脱水培养基，可按厂家指定的液竝或使用使洗涤剂和 /或消毒剂灭活或屮和的溶液进行再水化。E. 3. 2膜过滤采样装置织品表血的活粒子采样可用带有适当膜过滤器的膜过滤架进彳丁35； 36,此处，织物放 在有牍过滤器的膜过滤架开II处，空气经采吸经过织物。然肩检查腹过滤器的活粒了。E. 4结果的表述建议表血活粒了数的表达采用活单位(VU),推广到Idn?的采样织品(idm2=100cm2)o附件F （参考）洗衣验证方法指导F. 1引言木附件提供了指导并描述了在需要生物污染控制的环

53、境下洗衣过程的验证技术。F. 2测试方法F. 2. 1原则验证需要使川若干片与送洗织物同种的材料.以上织物片要经过C测昴数鼠的C知微 生物的污染，然麻送去经历要被验证的洗涤过程。要检杏该过程能台去除10的细菌数和10°, 的酵母和真菌抱子数。要进行以下控制：a）控制A：计数初期微生物悬浮液的话单位。控制A为了衣明微生物的量初数吊达到 一定的高度，以测最是否将微工物附至所需的数吊；b）控制B：计数控制织物片的活单位数，该织物片除了洗衣过卅外.要经历过与试验片完 全相同的过程。控制B是为了表明微生物的存活性在验证期间不发生变化：O 控制c：计数控制织物片的活单位数，该织物片要经历过与试验

54、片完全相同的过秤， 包拈洗衣过程.但只是在洗衣拆受到了微生物悬浮液的污染。控制C是为了表明计数微生 物数的技术适用于该丁艺条件（时间，机械作丿I,温度，织物上有无清洗产品残留物等）。试验屮已知微生物的悬浮液足以蛋门溶液制备的.试验片涂上己知杲的悬浮液，与普 通织物-起送洗.洗完后计数试验片上的微生物数.测就做生物的减少录并与（F. 2. I）屮 提到的值进行比较.注：在评估认可对试验洗衣过程的验证前，该过軒的产品不得用于洁净室.F. 2. 2微生物F. 2. 2. I 细菌至少丿卫使用以下细菌菌株：a）肠球菌 hiraeATCCI0541b）人肠杆菌ATCCI0536F. 2. 2. 2 真菌

55、如杲要杀真菌，至少要使用以下真菌菌株：白色念珠菌ATCC2091黑曲霉ATCCI6404F. 22 3细菌總子如来要杀灭砲了，至少要使用以下菌株抱了；枯茸杆菌黑色变种ATCC9372F. 2. 3细菌悬浮液F. 2. 3. 1悬浮液介质应使用火菌豚盐水作为细菌悬浮液的介质。对于真1111，加005%（容积比）多乙氧基 朋。细菌砲了应使用灭菌蒸他水。F. 2.2。3 |叫收介质可使川悬浮液介质、蒸怖水或可在试验条件下被过滤的任何溶液。如果必须川杀菌中 和剂，可将其加在何收介质屮.F. 2. 3. 3蛋白溶液要制备以下溶液：一溶液A:3%(W/V)牛清蛋白(Cobh氏惚份v),需要时调到pH=6

56、8,采用膜过滤 消毒；一溶液B： I5%(W/V)的酵母提取物，调到pH=7,以121'C蒸煮20分钟：-溶液C： A和B两种溶液按100： 20的比例混合,使每种蛋白的浓度为2. 5%(w/V)。 F. 2. 4控制与测试织物片织物片采用脱浆的织物制成，该织物片须代表洗涤过桎要验证的送洗织物.它们只应 使用一次。织物片的整个尺寸为IOcmX5cm,包括5x5cm的污染区和用于将其固定于送 洗织物的多余边。织物片用蒸汽可穿透的材料包裹，以I21C蒸煮2()mnuF. 2. 5培养液的制备制备毎ml含IO®的细菌细胞或10”的真菌细胞或细菌柯了悬浮液.F. 2. 6程序F. 2

57、. 6. I 控制控制A：培养悬浮液经适当稀释后计数琼脂培养基中的双份VU,含冇3()-3(X)VU / ml 的稀释液屮两个计数的平均值为No检竇原始悬浮液的数字是台为细菌细胞为N IO? / ml真 菌细胞或细菌抱了为控制B：使用适当的稀释液，川金有3O-3OOVU / ml的0.5ml的悬浮液培养两个控制片, 用含3()()-3(XX)VU / ml的().5ml的悬浮液培养另外两个控制片.这四个控制片在榕个试验 过程中，除了不参与洗衣过程，其它时候均与试验片一起处理和试验 I叫到实验室后，它们 要放到培养琼脂培养基中培养.计数VU.与污染磧严重的控制片对应的平均计数为N), 另一个为N

58、2控制C：在个控制片上涂0.5ml的蛋白溶剂C。进行全过程洗衣.然看浸没在l()()ml 1叫收介质中撞动15-3()秒，放到培养皿上沉淀。接看在该控制片上涂含3O-3OOVU / ml的 1ml的悬浮液，将其用l()ml的琼脂培养基覆盖、培养后计数.该计数为nl。用能够阴挡微 生物的滤般过滤先前使用的l(X)ml |n|收介质冲洗二遍，在过滤般上覆說5()ml的新冋收 介质.在50ml的回收介质中加Iml的含3O-3OOVU / ml的悬浮液,然后过滤。膜与过滤器 再用另外5ml的冋收介质冲洗，然肩过滤。将膜放到琼脂培养基上培养.该计数为血计算 n=(ni+n2)/20如果NN，2n,就只为

59、试验木身验证实验条件.如果NLW0.5N和或N，i WO. 05N和/或nWO. 5N,就不只为试验木身验证实验条件.重 新进行控制，如添加适当的化合物以中和送洗控制片的化学残留物.F. 2. 6. 2 测试将3ml微生物悬浮液(F.2.5)和2ml(E2.3 3)中的蛋H溶液C混合并在环境温度下保持接触5min.将产生的().5ml的悬浮液涂到试验片上。为测试每个受试的微生物， 要使三个试验片接受污染.送洗躲，要尽快将控制片送冋到实验室.每一片要放入100ml的冋收介质内，搅押15至30s. 然后:a) 0.lml放入9.9ml冋收介质厉搅拌。然后该混合物放到滤膜上.用50ml新I川收介质冲

60、洗 三次.将膜放到琼脂培养基上培养；b) 将lml放到滤般上，用5()ml新冋收介质冲洗三次，将股放到琼脂培养基上培养：c) 剩余的98.9ml放到站膜上，川50ml新冋收介质冲洗三次，将膜放到琼脂培养慕上培养：d) 每个试验片以无菌方式放到一个培养川【上,用琼脂培养基覆盖并培养。町为各膜上确定的VU数,是F.2.6.2屮a), b), c)产生的计数平均值。n是F.2.6.2屮d)试验片确定的VU平均数.因此是送洗后钱留微生物的数字.F. 2.7结果的解释计算涂到控制片上微生物数N与R的比率检杳送洗是否可保证减少细茵数的1(F因数 和减少酵母菌及真菌他了数10附件G （参考）液体生物污染的测

61、量方法指导G. I引言木附件提供了指导并描述了在需要生物污染控制的环境下液体（水的或卄水的）生物污 染的评价技术。为了探测存衣和可能需要监控的活粒子，附件涉及采集代表性采样。液体生物污染的评价遵循木标准和附件A的-般原则，它们要求在采川洁净技术时要 建立评价和控制液体生物污染的正式系统。此外，用考虑以下因素37-43：a）危险区内细菌生态及相关参数；b）特定液体中活粒子的希望浓度；c）液体条件：d）采集的稱确性与效率。G. 2廉则半危险区处于准备就绪、诃以使川状态时，应按正常使用情况下适洛和例行的做法通过 用适、”1的采样装置按采样计划对危险区屮液体的细菌污染进行探测和监控。可采川肓接或间 接

62、技术实施活粒了的数量质衆探测。G. 3过程确定液体生物污染有乞种方法，选样哪种方法取决于液体的性质和需要采样的吊，比如 可以使用灌浇平碟,展宽平碟，膜过滤和其它方法|采样时液体爪力要适沟降低，应注意液体条件和液体屮活单位的期望浓度。G. 3. I采样准备根据液体和生物污染的杓度，试样的测试可直接或在适半处理厉进行。G. 3. 2采样选样的牛物污染探测方法应与要采样液体的性质相适应，可能需要以下技术：a）直接培养，如展宽平碟，系列稀释（MPN方法）：b）间接培养，如采用膜过滤方法的采样浓度，该法有灰续培养或带放射标签基质及放射 活性测杲；c）细菌ATP测垢:；d）阻抗测量。G. 4结果表述建议农面活粒了数的