病理技术专业知识1

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1、（一）单纯固定液甲醛：1 浓度：40%，气体2 渗透力强，固定均匀，组织收缩小，3 不能使白蛋白和核蛋白沉淀4 保存脂类，必须用冷冻切片。是糖的保护剂5 可固定高尔基体，线粒体重铬酸钾1. 浓度：1%-3%水溶液，有毒，橘红色结晶2. 穿透速度快，几乎不收缩，经乙醇脱水后明显收缩，3. 未酸化的重铬酸钾不能使蛋白质沉淀，但可使蛋白质变为脂溶剂。酸化后可使蛋白质沉淀，此时染色体可被保存，但线粒体破坏。4. 固定高尔基体和线粒体有良好效果。5. 酸性染料着色好，碱性染料着色差6. 固定的组织需经流水冲洗12-24h，或用亚硫酸盐洗涤。苦味酸1. 黄色结晶体，是一种强酸，易燃易爆，配成饱和溶液储藏2

2、. 穿透慢，组织收缩明显，无明显硬化。3. 能沉淀一切蛋白质4对脂肪和类脂无固定作用。5. 可软化皮肤和火棉胶，不宜用火棉胶包埋6. 固定时间不宜超过24h，7. 固定的组织应尽快放入70%乙醇，滴加饱和碳酸锂或浓氨水，有助于除去苦味酸固定产生的黄色。升汞1. 浓度为5%-7%的水溶液，针状结晶2穿透力低，只宜固定薄片组织，单独应用组织收缩明显3, 对蛋白质有固定作用，4. 对类脂和糖类无固定作用5. 临用时加冰醋酸醋酸1. 刺激性气味的无色液体，低于15为冰醋酸5%的醋酸PH为2-8，可抑制细菌和酶的活性，可防止自溶。2. 穿透力强3 不能沉淀白蛋白，球蛋白，但能沉淀核蛋白4 不能固定脂肪和

3、内酯，不能保存糖5 .固定线粒体和高尔基复合体不能用高浓度的醋酸，可较好的保存染色体6, 缺点是组织膨胀明显，尤其对于胶原纤维和纤维蛋白铬酸1. 为三氧化铬的水溶液，浓度0.5%-1%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合 2 穿透力弱，一般组织需固定12-24h，固定的组织有收缩，3 能沉淀蛋白质，核蛋白固定良好。4 对脂肪无固定作用5 固定线粒体和高尔基复合体6. 宜避光保存，以防蛋白质溶解。7. 必须彻底流水冲洗（24h）。锇酸（四氧化锇）1.淡黄色结晶，剧毒，浓度1%-2%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合2. 渗透力极弱，易使组织变硬，延长固定时间，组织的脆性增加，对染色不利。3. 固定

4、均匀，不沉淀蛋白质。4为脂类固定剂5. 适用于线粒体和内质网的固定6. 为电镜研究的必须固定剂。7. 固定目的不同，配方和浓度根据需要改变8. 固定后对碱性染料亲和力强，细胞核的染色效果好9. 应在临用前前几天配制以保证充分溶解。丙酮1易挥发，易燃的无色液体，可与水，醇，氯仿，醚混合2. 渗透力强，对核的固定差3. 可使蛋白质沉淀4. 作用基本与乙醇相同，但对糖原无固定作用5广泛用于酶组织化学中各种酶的固定乙醇1. 无色液体，还原剂，可与水无限相溶，有固定兼脱水作用 用于固定的浓度为80%-95%2渗透力弱，固定速度较慢，易使组织变脆，无水乙醇固定时，穿透速度快，渗透力差，使组织收缩3.，能沉

5、淀白蛋白，球蛋白，核蛋白4. 用于糖原的固定5. 50%以上乙醇可溶解脂肪和类脂体，并可溶解血红蛋白，对其他色素也有破坏。三氯醋酸 1. 为无色易潮解的结晶体，水溶液为强酸性，易溶于醇和醚，应密封保存 2. 也是一种良好的脱钙剂 （二）混合固定液 B-5固定液（醋酸钠-升汞-甲醛） 1多用于固定淋巴组织， 2. 染色前应进行脱汞处理 3. 配方：无水醋酸钠1.25g，升汞6g，甲醛10ml，蒸馏水90ml.Bouin液1. 有一定毒性，应避免吸入或与皮肤接触2. 固定液偏酸，对抗原有一定损害，使组织收缩，不适宜标本的长期保存3. 固定效果好，组织细胞结构完整。细胞核着色鲜明，细胞质着色较差。4

6、. 对脂肪固定效果好，尤适用于含脂肪的淋巴结，乳腺组织和脂肪瘤标本5. 适用于结缔组织染色，尤其是三色染色更为理想。6. 配方：饱和苦味酸水溶液：甲醛水溶液：冰醋酸=15：5:：1Carnoy液1有防止乙醇的硬化和收缩作用，增加渗透力，外膜致密的组织可用其固定2. 固定速度快，3mm厚组织块1h内即可固定，大块组织不超过4h。3，固定细胞质和细胞核，对于染色体固定佳，显示DNA，RNA效果好。4. 常用于糖原和尼氏体的固定5不能保存脂类，不适用脂肪染色。6. 配方：冰醋酸10ml，氯仿30ml，无水乙醇60ml Muller液1. 作用缓慢，固定均匀，组织收缩小2. 多用于媒染和硬化神经组织3

7、. 固定过程中，需常更换新鲜的液体4.配方：重铬酸钾2-2.5g，硫酸钠1.0g，蒸馏水100mlOrth液1. 渗透力强，组织收缩小2. 应临时配置，在暗处固定，固定24h左右，固定液变为黑色时不可用，固定后流水冲洗12-24h。3. 固定胚胎组织，神经组织。脂肪组织4. 配方：重铬酸钾2.5g，硫酸钠1.0g，蒸馏水100ml，37%-40%的甲醛10ml（用时加入）PFG液1. 适用于多种肽类抗原的固定，多用于免疫电镜研究2. 对细胞抗原性和结构保存好3. 配方：对苯醌20g，多聚甲醛15g，25%戊二醛40ml，0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液1000ml。PLP和PLPD液1. 均含

8、过碘酸盐2. 对细胞抗原性和结构保存好，适用于富含糖类组织的固定Rossman液1. 对糖原固定好，固定12-24h，用95%的乙醇洗2. 配方：无水乙醇苦味酸饱和液90ml，甲醛10mlZenker液1用于固定多种组织，对于病毒包涵体固定效果也较好2. 使细胞核和细胞质染色清晰，常用于三色染色，对免疫球蛋白染色最好3. 不适用含血量较多的标本，如充血的脾脏和肺梗死等标本4.不能用金属容器盛放，且固定后不能用金属镊夹取。4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液1. 适用于光镜免疫组织化学法，2. 动物先用此液灌注固定，取材后再用该液浸泡固定3. 可用于标本的较长时间的保存4%多聚甲醛-磷酸二钠

9、/氢氧化钠1. 适用于光镜和电镜免疫组织化学法，2. 用于免疫电镜时，应加入新鲜配置的戊二醛。使其终浓度为0.5-1%3. 性质温和，可长期保存组织。 4配置后PH值应调至7.2-7.4, 4保存甲醛-钙液. 适用于固定脂肪组织和组织化学染色乙醇-甲醛液 有脱水作用，对皮下组织中肥大细胞的固定好乙醚-乙醇液 渗透性强，固定效果好，用于细胞涂片的固定。去除甲醛色素：Verocay液脱汞盐结晶： Lugol液脱黑色素： 0.25%高锰酸钾蓝化作用： 稀氨水组织的脱水（一）乙醇 乙醇脱水的浓度：70%80%90%95%100%进行糖原和尿酸盐结晶染色的标本应直接用无水乙醇固定，更换一次无水乙醇脱水即

10、可。（二）丙酮 与乙醇作用相似，但对组织块的收缩作用比乙醇更严重，快速脱水或固定兼脱水时应用，脱水时间为1-3h.丙酮可作为染色后的脱水剂，用于DNA和RNA染色。（三）异丙醇 是乙醇的良好替代品，不含水，可代替无水乙醇使用，对火棉胶和染料不溶，因此不能用于火棉胶包埋和染料配制。（四）正丁醇和叔丁醇（电镜标本制作时常用作中间脱水剂。） 正丁醇：无色液体，脱水能力较弱，可与水，乙醇和石蜡混合，因此，这种这种脱水的组织块可直接浸蜡包埋，叔丁醇：无毒，可与水，乙醇和二甲苯混合，与正丁醇相比，它不易使组织收缩或变硬，而且脱水后可不经透明直接浸蜡，（五）还氧已环还氧已环能于水和乙醇混合，也能溶解石蜡，可

11、代替乙醇进行脱水，也可代替二甲苯进行透明，不引起组织收缩和硬化，用于制备植物标本较好，易挥发，价格昂贵。（六）四氢呋喃 易于水，乙醇，丙醇和苯类混溶，对组织渗透快，易挥发，无毒，可用作封片溶剂，对染料不溶。（七）环己酮环己酮无毒，与苯，二甲苯，氯仿和石蜡混合，可代替无水乙醇脱水后直接浸蜡，组织块不会变硬。（八）松脂醇 可取代无水乙醇用作脱水剂和随后的浸透与包埋。树脂包埋法适用于：不脱钙骨髓活检组织，肝、肾穿刺活检和淋巴结组织等。常用的特殊染色技术一 结缔组织染色 Mallory三色 Masson三色 胶原纤维，网状纤维 蓝色 绿色 软骨，粘液，淀粉样 淡蓝色 神经胶质纤维，肌纤维 红色 红色髓

12、鞘，红细胞 橘红色 橘红色 显示胶原纤维，网状纤维，弹性纤维三联染色胶原纤维：红，网状纤维：黑，弹性纤维：绿色肌肉和红细胞：淡黄色二 胶原纤维染色（一） 显示胶原纤维，细胞，肌肉的染色法1 试剂：Ponceau（丽春红）染色液：丽春红水溶液10-15ml，苦味酸饱和水溶液85-90mlVictoria blue(维多利亚蓝)：维多利亚蓝，70%乙醇2 结果：胶原纤维： 红， 细胞核和血细胞： 绿色肌肉： 黄色3注意事项：Ponceau染色后。不能与水接触，直接用无水乙醇冲洗脱水：胶原纤维切片的厚度需6um,: Victoria blue染色液应盛染色缸内，进行染色。（二）天狼星红苦味酸染色法1

13、.试剂：天狼星红饱和苦味酸液： 0.5%天狼星红10ml，苦味酸饱和水溶液,90ml 天青石蓝液：天青石兰，铁明矾，蒸馏水，甘油，浓盐酸 2 结果：胶原纤维： 红， 细胞核和血细胞： 绿色其他： 黄色3注意事项：细胞核复染可以用Harris苏木精淡染：必须用偏光显微镜观察 三 网状纤维染色（一）Gomori银染色法1.结果：网状纤维： 黑色胶原纤维： 红，背景： 黄色3注意事项： 氨性银溶液：必须器皿洗干净，滴加氨水不能过量，冰箱保存 氧化液存放时间不能过长，以免失去氧化作用 丽春红复染用滴染方便，无水乙醇冲洗要倾斜（二）James染色法1.结果：网状纤维： 黑色胶原纤维： 红，背景： 淡黄色

14、3注意事项： 5%硝酸银使用时不能滴染 二氨银配制时，氨水要一滴一滴的加，以免浓氨水加的太多 甲醛液要新配制四：弹性纤维染色（一）维多利亚蓝染色结果：弹力纤维： 蓝色 细胞核： 红色注意事项：配制的溶液放置2周成熟后使用（二）Gomori醛复红染色法1试剂：醛复红染液：碱性复红0.5g，浓盐酸1ml，70%乙醇100ml，三聚乙醛1ml 室温下静置1-2日，待变为紫色即成熟，于冰箱保存备用。 橘黄G染液：2：对特殊的蛋白质及含硫酸根的粘多糖有很强的亲和力，和弹力纤维结合很紧。 对肥大细胞颗粒，脂褐素，HBsAg,胃主细胞，胰岛的细胞，脑垂体的嗜碱性细胞也能很好着色。3 固定液：以甲醛生理盐水固

15、定的染色效果最佳。结果：弹力纤维 深紫色 粘液 紫色五 显示弹性，胶原纤维的双重组合染色结果：弹力纤维： 蓝绿色 胶原纤维： 红色 背景： 淡黄色注意事项：维多利亚蓝液可每次反复使用，溶液在室温中保存可用数年。 六 肌肉组织染色 （一）横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）1. 结果：横纹肌 蓝色 胶原纤维，网状纤维： 黄色或玫瑰红色 心肌（缺血缺氧）： 紫蓝色或棕黄色2注意事项： 此液经阳光处理数周后至数月才成熟，置冰箱内保存可使用多年时间。可加入0.15高锰酸钾，加快促使成熟95%乙醇分化时应注意在切片上保留一定的红色，然后用无水乙醇快速脱水，冷风稍干燥后封固。早期心肌

16、病变组织染色 （一）NagarOlsen结果：缺氧心肌，红细胞 红色 正常心肌 黄色或黄棕色 细胞核 蓝色 （二）Poley 显示缺氧心肌染色法结果：缺氧心肌 红色 胞核 紫色 其他： 绿色七：糖类染色糖原染色：过碘酸-Schiff(PAS)染色法1 结果：糖原及其他PAS反应阳性物质 红色 细胞核 蓝色2.注意事项：过碘酸是一种氧化剂 染色前将Schiff试剂取出后，适应室温后再进行染色八粘液物质（粘多糖）染色中性粘多糖多见于：胃粘膜的表面上皮，十二指肠腺，颌下腺，前列腺上皮，结肠的杯状细胞。强硫酸化粘多糖多见于：皮肤，动脉和肺、软骨、角膜及肥大细胞弱硫酸化粘多糖多见于：颌下腺、结肠、气管、

17、支气管的杯状细胞粘液物染色用于：肿瘤方面的胃癌，粘液瘤和粘液肉瘤，软骨粘液样纤维瘤、横纹肌肉瘤、动脉粥样硬化和胶原病及慢性胃炎的肠化（一）Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）染色法 1结果： 中性粘液物质 红色酸性粘液物质 蓝色混合性粘液物质 紫红色 2 注意事项： 切片中不能涂白胶或火棉胶 Schiff试剂保存于冰箱中备用，滴染法，用过的不能回收使用。 阿尔辛蓝染色30分钟，或更长（二）Schiff阿尔辛蓝地衣红染色法 1结果： 胃粘膜肠化生上皮和胃肠肿瘤的酸性粘多糖： 蓝色 中性粘多糖： 棕色 2.注意事项： 高锰酸钾氧化液必须新配制使用 地衣红染色液冰箱保存，可反复使用 地衣红染色

18、时间4h,阿尔辛蓝染色5分钟，时间不能长。九 黑色素染色黑色素见于：恶性黑色素瘤，淋巴结肿瘤，色素性神经瘤，皮肤性淋巴结炎，皮肤异色病，红斑狼疮，扁平苔藓，神经性黑色素病变，假性黑变病色素的大肠，阑尾，小肠（一）MassonFontana黑色素浸银染色法 结果：黑色素及嗜银细胞颗粒 黑色 胶原纤维 红色 背景 浅黄色（二）Lillie亚铁染色法结果：黑色素 暗绿色 背景 浅绿 肌纤维和背景 黄色注意事项： 硫酸亚铁和铁氰化钾染色液需临用时配制，不能存放， 也可使含铁血黄素呈阳性，可用结合铁反应法来鉴别十 含铁血黄素染色 Perls blue(普鲁士南)反应显示三价铁 结果：含铁血黄素 蓝色 其

19、他组织 浅红色 注意事项： 器皿应洁净，操作中避免与铁接触，洗涤需用蒸馏水 陈旧标本染色效果不好，必要时可用0.25%高锰酸钾处理切片20-60分钟，再用草酸漂白。 组织固定不能使用酸性固定液。十一 胆色素染色： 三氯醋酸染色方法 结果：胆色素 绿色其他 复染的红色或黄色 注意事项：不适用的固定液：Helly，Zenker等含铬固定液纤维蛋白染色（一）MSB染色法（马休黄猩红蓝法） 结果：纤维蛋白 红色 陈旧性纤维蛋白 紫色 细胞核 蓝色 红细胞 黄色 注意事项：可以使用Masson三色法进行对照染色 亮结晶猩红6R染料可用酸性复红代替。（二）Gram甲紫染色法 结果：纤维蛋白 蓝黑色，背景

20、红色淀粉样物质染色（一）刚果红染色法结果： 淀粉样物质： 红色 细胞核 蓝色注意事项： 苏木精染色的细胞核不能深 淀粉样物质可以结合偏光的方法得到良好的效果 ，其色彩呈绿色双折光性。 无水乙醇有脱色作用，脱水后即用冷风干燥，再透明封固 （二）Jurgens甲紫染色法： 结果：淀粉样物质 红色或紫红色 细胞核 蓝色 真菌染色（一）Grocott六胺银染色结果：菌丝和孢子 黑褐色， 细胞核 红色 背景 淡绿色（二）高碘酸复红染色法 结果：真菌 紫红色，红细胞 浅黄色细菌染色一 Gram碱性复红结晶紫染色法： 结果：G+ 蓝色 G，细胞核 红色，注意事项： 苯胺油苯酚复红液是一种不稳定的混合液，染色

21、液表面易产生氧化结晶，染色应适当加热防止氧化物质污染切片。 二甲苯苯胺油分化后，必须用二甲苯洗除 结晶紫溶于乙醇，草酸铵溶于蒸馏水二 ZiehlNeelsen抗酸杆菌染色法 结果： 抗酸杆菌 红色 背景 灰蓝色注意事项： 苯酚复红液，必须加温37-40,时，秩序染色15-20分钟 亚甲蓝复染后用95%乙醇快速分化，防止过度脱色三 Warthinstarry胃幽门螺杆菌染色法 结果：胃幽门螺杆菌呈棕黑色或黑色，背景淡黄色 注意事项：1%硝酸银液内1h左右（温箱56）四 螺旋体染色 Giemsa染色法结果 螺旋体及细菌呈蓝到淡紫色，细胞质呈蓝色，红细胞呈橘黄色注意事项：放入Giemsa染色工作液中

22、需要8-18h或更长五HBsAg 染色 （一） Shikata地衣红染色法 结果：HBsAg阳性呈棕色注意事项 高锰酸钾须新配制 地衣红染色液PH应为1.2-1.6（二）醛复红改良染色法 结果：HBsAg阳性呈紫色，结缔组织呈红色，红细胞及基质呈黄色（三）维多利亚蓝染色法 结果：HBsAg阳性呈蓝绿色，细胞核红色注意事项： 维多利亚蓝染液中需放置12-24h.神经组织染色神经细胞尼氏小体染色法（一）焦油紫染色法 结果：尼氏小体 紫色 胶质细胞 淡紫色 背景 无色(二) Einarson棓酸青蓝染色法 结果：尼氏小体 黑蓝，紫色 核 蓝色 背景 浅灰色（三）甲苯胺蓝染色法：结果：尼氏小体 深蓝色

23、 核 淡蓝色 背景 无色神经纤维染色方法（一）Hol,mes神经纤维染色方法结果：神经纤维 黑色 背景 灰紫色（二）Bielschowsky神经纤维染色 结果：神经纤维 黑色 背景 紫色（三）Von Braunmubl神经纤维，扣结，老年斑染色方法结果：神经纤维和扣结 黑色 老年斑 黑色 背景 浅灰色（四）Eager退变神经纤维的染色方法 结果：退变神经纤维 黑色 背景 浅棕色神经髓鞘染色方法（一）Weigert髓鞘染色方法 结果：髓鞘 黑紫色， 背景：淡灰色（二）Weil髓鞘染色方法 结果：髓鞘 蓝黑色， 背景：淡灰色（三）Kultshitzky髓鞘染色方法 结果： 结果：髓鞘 蓝黑色， 背

24、景：淡黄色（四）Luol fast blue 髓鞘染色方法结果：髓鞘 蓝色 核仁 紫色 尼氏小体 紫色 （五）变色酸2R-亮绿髓鞘染色方法结果：神经髓鞘呈深红色；轴索和间质呈绿色，脱髓鞘纤维不着色。注：变色酸2R染液浓度在0.30.6为好，可根据质量不同而增减。染色液置4冰箱内保存，可反复使用，用前回温。（六）Marchi退变髓鞘染色方法结果：退变髓鞘 黑色 背景 浅棕色（七）锇酸萘胺 结果：变性髓鞘及脂肪： 黑色 正常髓鞘 红色 红细胞 淡红色 结缔组织 蓝色神经胶质细胞染色方法 （一）Cajal 星形细胞染色方法（冷冻切片） 结果：原浆形及纤维性星形细胞 紫黑色（二）Naounenko 和

25、 Feigin 改良的Cajal 染色方法（石蜡切片）结果：星形细胞 紫黑色 背景 粉红色（三）Weil及Davenport 小胶质细胞及少胶质细胞染色方法 结果：神经胶质细胞及少突胶质细胞 黑色 背景 黄棕色（四）Naou menko 及Feigin 小胶质细胞石蜡切片染色方法 结果：小胶质细胞： 黑色 背景 灰色 神经内分泌细胞染色亲银反应（一）lillieMasson 二胺银染色方法 结果：亲银细胞颗粒 黑色 细胞核 红色 背景 淡灰黄色（二）GomoriBurtner 六胺银法 结果：亲银细胞 黑色 背景细胞 浅红色嗜银反应：（一）De Grandi 改良硝酸银反应法 结果：嗜银细胞颗

26、粒 棕黑色 胞核 红色（二）碱性重氮反应： 结果：嗜银细胞颗粒 橘红色至红色 细胞核 蓝色 胞质 黄色 嗜铬细胞染色（一）Giemsa 改良染色方法 结果： 嗜铬细胞 红色至紫红色 皮质细胞 蓝色 红细胞 粉红色（二）Wiesel染色方法 结果：嗜铬细胞 黄绿色 细胞核 红色 其他 蓝色肥大细胞染色一 甲苯胺蓝改良染色方法结果： 肥大细胞： 红紫色 细胞核 蓝色二 醛复红法 结果： 肥大细胞颗粒 深紫色 红细胞 橘黄色 其他 黄色 DNA染色（Feulgen法） 结果：DNA 紫红色 细胞质及其他成分 绿色染色方法胶原纤维，网状纤维软骨，粘液，淀粉样神经胶质纤维，肌纤维髓鞘，红细胞结缔组织染色

27、Mallory三色蓝淡蓝红黄Masson三色 绿红黄显示胶原纤维，网状纤维，弹性纤维三联染色胶原纤维网状纤维弹性纤维肌肉和红细胞红黑绿黄胶原纤维染色胶原纤维细胞核和血细胞肌肉显示胶原纤维，细胞，肌肉的染色法红 绿黄天狼星红苦味酸染色法红绿 黄网状纤维染色网状纤维胶原纤维背景Gomori银染色法黑 红 黄James染色法黑红淡黄弹性纤维染色弹力纤维细胞核粘液背景维多利亚蓝染色蓝红Gomori醛复红染色深紫紫显示弹性，胶原纤维的双重组合染色蓝绿色胶原纤维红色淡黄色横纹肌组织染色横纹肌胶原纤维，网状纤维心肌（缺血缺氧）Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝黄色或玫瑰红色紫蓝色或棕黄色早期心肌

28、病变组织染色缺氧心肌，红细胞正常心肌细胞核其他NagarOlsen红黄或黄棕色蓝Poley缺氧心肌染色法红紫绿糖类染色糖原及其他PAS反应阳性物质细胞核过碘酸-Schiff(PAS)红蓝粘液物质（粘多糖）染色中性粘液物酸性粘液物混合性粘液物Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）红蓝紫红Schiff阿尔辛蓝地衣红棕蓝黑色素染色黑色素及嗜银细胞颗粒胶原纤维背景肌纤维MassonFontana浸银染色黑红浅黄Lillie亚铁染色暗绿色浅绿黄 含铁血黄素染色含铁血黄素其他Perls blue(普鲁士南)蓝浅红胆色素胆色素其他不适用的固定液：Helly，Zenker等含铬固定液三氯醋酸染色方法绿红

29、或 黄纤维蛋白染色纤维蛋白陈旧性纤维蛋白细胞核红细胞背景MSB染色法（马休黄猩红蓝法）红紫蓝黄Gram甲紫染色法蓝黑红淀粉样物质染色淀粉样物质细胞核刚果红染色法红蓝Jurgens甲紫染色法红或紫红色蓝真菌染色菌丝和孢子背景细胞核红细胞Grocott六胺银染色黑褐淡绿红高碘酸复红染色法紫红浅黄色细菌染色幽门菌抗酸杆菌G+G 背景Gram碱性复红结晶紫染色法蓝红ZiehlNeelsen抗酸杆菌染色法红灰蓝色Warthinstarry胃幽门螺杆菌染色法棕黑或黑淡黄色染色方法 项 目螺旋体染色螺旋体细菌细胞质红细胞Giemsa染色法蓝到淡紫色蓝橘黄色HBsAg 染色HBsAg颗粒细胞核红细胞结缔组织S

30、hikata地衣红染色棕色醛复红改良染色法 紫色黄红维多利亚蓝染色法蓝绿色红神经细胞尼氏小体染色法尼氏小体核背景胶质细胞焦油紫染色法 紫无色淡紫Einarson棓酸青蓝黑蓝紫色蓝浅灰色甲苯胺蓝染色法深蓝色淡蓝无色神经纤维染色方法神经纤维背景老年斑扣结Holmes神经纤维黑 灰紫Bielschowsky神经 黑紫Von Braunmubl神经纤维，扣结，老年黑浅灰色黑Eager退变神经纤维黑色浅棕色神经髓鞘染色方法髓鞘背景核仁尼氏小体Weigert髓鞘染色方黑紫淡灰Weil髓鞘染色方法蓝黑淡灰Kultshitzky髓鞘染蓝黑淡黄Luol fast blue蓝紫紫髓鞘脱髓鞘纤背景轴索间质变色酸2R

31、-亮绿髓鞘深红不着色绿色Marchi退变髓鞘染色方法黑色（退变）浅棕色锇酸萘胺黑色（变性）红色（正常）红细胞（淡红）结缔组织（蓝色）神经胶质细胞染色方法原浆形及纤维性星形细胞神经胶质细胞少突胶质背景小胶质细胞Cajal 星形细胞（冷冻）紫黑色改良的Cajal 染色紫黑色粉红Weil及Davenport 小胶质细胞及少胶质细胞黑色黄棕Naou menko 及Feigin 小胶质细胞灰黑色神经内分泌细胞染色亲（嗜）细胞颗粒细胞核背景胞质亲银反应lillieMasson 二胺银黑红淡灰黄GomoriBurtner 六胺银法黑浅红嗜银反应De Grandi 改良硝酸银反应棕黑色红碱性重氮反应橘红色至红

32、色蓝色黄色嗜铬细胞染色嗜铬细胞皮质细胞红细胞细胞核Giemsa 改良红色至紫红色蓝粉红Wiesel染色方法黄绿色蓝（其他）红色肥大细胞染色肥大细胞细胞核红细胞其他甲苯胺蓝改良红紫色蓝色醛复红法深紫色橘黄黄DNA染色DNA 细胞质Feulgen法紫红色绿色免疫细胞化学技术标记物应具有以下的特点： 能与抗体形成比较牢固的共价键结合 不影响抗体与抗原的结合 放大的效益高 发光火显色反应要在抗原与抗体结合的原位并且鲜明，有良好的对比。理想的标记酶： 酶的活性高并且稳定 终产物稳定，不扩散，有良好的定位 酶与抗体和结合不影响AgAb的特异性反应 在组织与体液中不存在内源性的酶底物效果好又应用最多的是辣根

33、过氧化物酶和碱性磷酸酶异硫氰酸荧光素： 为明亮的黄绿色荧光四甲基异硫氰酸罗丹明： 为橙红色荧光免疫组织化学主要染色方法的原理（一）直接法（又称一步法） 特异性高，敏感性低 原理：用已知的特异性抗体与荧光素或酶结合，直接与待测组织中的抗原反应。 特点：将荧光素或酶标记在第一抗体上（二）间接法（又称夹心法） 原理：第一步：以未标记的特异性抗体（第一抗体）与组织或细胞中的抗原反应， 洗去未与抗原结合的第一抗体后，第二步：再以荧光素或酶标记的第二抗体与第一抗体结合，如何进行显色或荧光检查。特点：将荧光素或酶标记在第二抗体上优点： 不用标记第一抗体 第一抗体的工作稀释度高 敏感性增强 应用范围更广 特异

34、性低于直接法（三）未标记抗体法 1 酶桥法 酶桥法使用的三种抗体中的第1，第3两种抗体为同种动物所产生。 在染色的关键是第2抗体（桥抗体）必须以较高的浓度过量使用优点：提高了反应的敏感性，缺点：背景染色较重。 2 PAP法 将游离酶和抗酶抗体在使用前先制成稳定的酶抗酶抗体复合物，在稀释后使用。PAP法的关键在于 PAP复合物中的抗酶抗体必须与第一抗体为同种动物所产生。 第2抗体（桥抗体）必须过量（四）亲和素生物素方法 1 亲和素生物素过氧化物酶复合物技术（ABC） 通过ABC复合物中亲和素桥梁的作用，将ABC复合物与生物素化的抗体结合在一起，达到检测抗原的目的。 与PAP法比较，ABC法最大的

35、优点是敏感性高，是PAP法的20-40倍其次是背景清晰。SP法与ABC法比较，特异性更高2 酶标亲和素生物素技术（BA LAB） 制备生物素化抗体和酶标亲和素，利用生物素亲和素的亲和作用，将酶标亲和素连接到抗原抗体复合物上，以显示被检测的抗原。3 桥联亲和素生物素技术（BAB， BRAB） 是用生物素分别标记抗体和酶，然后以亲和素为桥，将两者连接在一起对照 常用的对照方法包括： 阳性对照，阴性对照，阻断实验，空白对照，替代对照，自身对照，吸收实验阳性细胞的染色特征： 阳性细胞染色分布有3种类型：胞质，细胞核，细胞膜表面 阳性细胞可分为灶性和弥漫性 染色强度不一 可定位于单个细胞，且与阴性细胞相

36、互交杂分布。 切片边缘，刀痕或皱褶区域，坏死或挤压的细胞区，胶原结缔组织等表现为相同的染色强度，不能判断为阳性免疫荧光细胞化学染色方法荧光抗体法：用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法荧光抗原法：用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法对照：抗原对照，抗血清对照，灭活补体对照。染色结果判读对照试验： 吸收实验：应用尚无文献报道的抗血清/自己制备的抗血清进行IHC染色时，需用相应的饱和抗原吸收血清后，在孵育标本。判断结果的可信性（结果应为阴性） 交叉实验 替代实验 置换实验 阳性对照动物实验技术 实验动物的抓取一 小鼠 用左手拇指和食指抓住两耳和颈部皮肤，其余三指和手掌心夹住背部皮肤和尾部小鼠

37、的灌胃针长4-5cm,直径1mm.插入深度为3-4cm,常用灌胃量0.2-0.8ml皮内注射量：最多不得超过0.05ml.皮下注射部位：背部肌内注射：股部腹腔注射：0.1-0.2ml/10g 静脉注射：多用尾静脉，用温水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管扩张，4号细针一次注射量为0.05-0.1ml/10g，尽可能从尾端开始向尾根部移动注射，脑内注射：0.02-0.03ml 注射针垂直刺入2-3mm,二 大鼠 大鼠捉持方法与小鼠相似。大鼠容易被激怒咬人，捉持时左手应戴防护手套。另一种方法：张开左手虎口，迅速将拇指，食指插入大鼠腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身体中端，并使其保持仰卧位，之后调整左

38、手拇指位置，紧抵在下颌骨上。大鼠的灌胃针长6-8cm,直径1.2mm. 插入深度为4-6cm,常用灌胃量1-4ml皮内注射量：最多不得超过0.1ml.皮下注射部位：背部，左侧下腹部肌内注射：股部腹腔注射：1-2ml/100g 静脉注射：多用尾静脉，用温水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管扩张，4号细针一次注射量为0.05-0.1ml/10g，尽可能从尾端开始向尾根部移动注射，脑内注射：0.03-0.05ml 注射针垂直刺入2-3mm,三 家兔一只手抓住兔颈背部皮肤，将兔轻轻提起，另一只手托住臀部，使兔呈蹲坐姿势。切不可用手握持双耳提起兔子家兔的固定： 盒式固定：常用于经口给药，兔耳血管注射、采血或观察

39、兔耳血管变化等。 台式固定：常用于颈部，胸部手术，兔静脉采血或测量血压，呼吸等实验 架式固定：常用作热原值实验 一次灌胃能耐受的最大容积 兔为80-150ml 猫为50-150ml皮内注射量：最多不得超过0.1ml.皮下注射部位：背部或耳根部肌内注射：两侧臀部或股部肌肉腹腔注射：5ml,部位：下腹部近腹白线左右两侧约1cm处。静脉注射：耳缘静脉注射脑内注射：0.05-0.1ml 注射针垂直刺入3mm,兔，猫致死法：空气栓塞法：静脉内注入20-40ml空气即可致死。四 犬 要用特制的钳式长柄犬夹夹住颈部，使犬头向上，颈部拉直，再套上犬链。急性实验用犬，可用犬夹夹住犬颈部后，将它压倒在地，由助手将

40、其四肢固定好。实验需要麻醉时，把麻醉完善后的犬固定在手术台或实验台上，应及时解去嘴上的带子，以利动物呼吸，避免由于鼻腔被粘液阻塞而造成窒息。一次灌胃量不能超过200ml皮下注射部位：大腿外侧肌内注射：两侧臀部或股部肌肉腹腔注射：5-10ml，部位：脐后腹白线侧1-2cm静脉注射：前肢，皮下，头静脉或后肢小隐静脉注射大鼠和小鼠的采血方法1 尾尖采血 2 眼眶后静脉丛采血 3 摘眼球采血4 断头采血 5 颈静脉和颈动脉采血 6 股静脉和股动脉采血7 心脏采血: 用左手触摸左侧第3-5肋间处，选择心脏冲动最明显处穿刺，一般选择胸骨左缘外1cm第4肋间 用6号半针头的注射器，垂直刺入心脏，可随针接触心

41、脏的感觉随时调整刺入方向和深度 豚鼠采血方法1 心脏采血 2 耳缘采血 3 足静脉采血 兔的采血方法1 耳（中央）动脉采血 2耳缘静脉采血 3 外颈静脉采血 4 颈动脉采血 5 股静脉采血 6 心脏采血（不超过20-25ml） 犬的采血方法1 前后肢皮下静脉采血 2 股动脉采血 3 心脏采血4 颈静脉采血 5 耳缘静脉采血 羊的采血方法1 颈静脉采血 2前后肢皮下静脉采血一般一次可取50-100ml 试验动物用药量的确定 1 药物剂量按mg/kg或g/kg计算 2 用药量未知时可先用致死量的1/101/5进行尝试。 3 动物的耐受性比人大。假设人的用药量为1，小鼠，大鼠尾2550，兔、豚鼠为1

42、5-20，犬、猫为5-10 4 给药途径不同，所用剂量也不同 5 根据动物年龄不同给不同的剂量。实验动物处死措施大鼠和小鼠： 1 脊椎脱臼法 2 断头法 3 击打法 4 急性大失血法 5 化学致死法犬、猫、兔、豚鼠 1 空气栓塞法 2 急性失血法 3 破坏延髓法 4 开放性气胸法 5 化学药物致死法试验动物表面麻醉常用：利多卡因对大鼠进行吸入麻醉应选用：乙醚试验动物的编号，标记和被毛去除方法一 编号和标记方法 常用的编号标记溶液： 3%-5%苦味酸溶液 黄色 0.5%中性红或品红溶液 红色 2%硝酸银溶液 咖啡色 煤焦油乙醇溶液 黑色 甲紫溶液 紫色1号： 左前腿 5号 背部2号： 左腹部 6

43、号 尾部3号： 左后腿 7号 右前腿 4号 头顶部 8号 右腰部9号 右后腿试验动物被毛的去除 剪毛法 拔毛法 剃毛法 脱毛法肾活检标本制作技术标本的处理： 1 一次可获取1.0-1.5cmx0.1cm，在解剖显微镜下，肾小球呈针尖大小的红色点状 2 标本分配：分为三部分，一般0.4cm做光镜，0.4cm做免疫病理，0.2cm做电镜 3保存： 光镜标本：10%甲醛固定液中 电镜标本：2.5%戊二醛内于4冰箱内固定 免疫荧光：放在滴有生理盐水的小纱布垫上，连同纱垫置入干净的青霉素小瓶，再把小瓶放入进冰桶以上动作要快，在1-2分钟内完成。避免组织自溶，固定液要求新鲜。一 免疫荧光技制片 1 暂时不

44、处理，应将标本放在70冰箱内保存 2 切片：冷室内20冷冻切片，厚度要求3-4m,切10片备用，光镜观察有无肾小球，如无，则不需染色。一般检查项目有：1 IgA，IgM，IgG， IgE，抗和轻链，以及补体C3，C1q,C2，C4以及备解素用于证实免疫反应球蛋白种类和补体激活的途径。2 检查纤维蛋白原和白蛋白可帮助确定肾病变的性质和有无凝血机制。 3 特异性抗原和抗体：HBsAg，抗DNA等用以发现肾炎相关性抗原。以异硫氰荧光素或四乙基罗达明等作为标记制作荧光抗体。石蜡切片进行免疫荧光检查：1 IgM，纤维蛋白原和HBsAg不受影响， 2 IgA，IgG强度减弱 3 补体往往消失固定：缓冲甲醛

45、，磷酸氢二钠和FAA固定液，在以上固定液中室温需45分钟脱水：梯度乙醇：70%乙醇80%乙醇90%乙醇无水乙醇染色：HE：细胞核： 紫蓝色 细胞质，基底膜，胶原纤维： 粉红色PAS：胞核： 蓝色基底膜、肾小球系膜基质、胶原纤维、细胞质： 红色PASM染色 基底膜、网状纤维 黑色 细胞核 紫蓝色 背景 粉红色PASMMasson复合染色 肾小球基底膜 黑色 沉积物 红色纤维蛋白染色 基底膜 蓝色 免疫复合物 粉红色 纤维蛋白 红色 细胞核 黑色电子显微镜标本的制作一 取材：标本每块1mm3, 应含有肾小球.二 固定：立即放人2.5%戊二醛内，于4冰箱固定4h后放人0.05mol/L磷酸盐缓冲液冲洗3h,再放入1%锇酸于室温下固定1h三 脱水包埋 50%乙醇65%乙醇75%乙醇85%乙醇95%乙醇无水乙醇无水乙醇四 超薄切片先切1m半薄片，再0.5%亚甲蓝染5分钟，再用超薄切片机切成50nm超薄片五 染色： 用醋酸铀和铅双重染色 1%5%醋酸铀（PH4.2）室温下染2030分钟，再以枸橼酸铅室温下复染30分钟。