cho细胞表达系统的应用与研究

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1、长生研长生研CHO细胞表达系统的应细胞表达系统的应用与研究进展用与研究进展刘畅刘畅国药集团长春生物制品研究所国药集团长春生物制品研究所生物技术研究室生物技术研究室2009/长生研长生研主主 要要 内内 容容v CHO细胞表达系统的优势与国内外应用情况细胞表达系统的优势与国内外应用情况v CHO细胞的工程化细胞的工程化v 构建构建CHO细胞表达平台的意义和流程细胞表达平台的意义和流程v 简介基因重组生物技术产品的表达系统及应用简介基因重组生物技术产品的表达系统及应用长生研长生研基因重组生物技术产品的表达系统基因重组生物技术产品的表达系统大肠杆菌表达系统大肠杆菌表达系统酵母表达系统酵母表达系统哺乳

2、动物细胞表达系统哺乳动物细胞表达系统分子量较小、结构相对简单的蛋白质分子量较大、结构较复杂、较少糖基化的蛋白质结构复杂或糖基化对于活性非常重要的蛋白质长生研长生研大肠杆菌表达系统的应用大肠杆菌表达系统的应用v 大肠杆菌表达的生物技术药物有大肠杆菌表达的生物技术药物有 20 种，分别是甲状种，分别是甲状旁腺激素旁腺激素、利尿钠肽、胰岛素及其两种突变体、生长、利尿钠肽、胰岛素及其两种突变体、生长激素、干扰素激素、干扰素 、 和和 ，G-CSF、白介素、白介素-1Ra、白介、白介素素-2、白介素、白介素-11、rPA、白喉毒素白喉毒素-IL 2融合蛋白、融合蛋白、OspA脂蛋白等。这些产品都是脂蛋白

3、等。这些产品都是结构相对简单结构相对简单、分子分子量较小量较小的蛋白质，主要为细胞因子类药物。的蛋白质，主要为细胞因子类药物。v 这这 20 种产品中，有种产品中，有 16 种为种为2000年以前批准上市的，年以前批准上市的，说明了说明了E coli.表达系统的应用空间已经越来越小。表达系统的应用空间已经越来越小。长生研长生研酵母表达系统的应用酵母表达系统的应用v 酵母表达的生物技术药物有酵母表达的生物技术药物有 8 种，分别是尿酸水解酶、种，分别是尿酸水解酶、胰高血糖素、胰高血糖素、GM-CSF、血小板衍生生长因子、血小板衍生生长因子(rhPDGF-BB)、乙肝疫苗、乙肝疫苗(小小S)、胰岛

4、素、胰岛素Novolin及其及其突变体突变体NovoLog、水蛭素等。、水蛭素等。v 酵母表达的蛋白相对酵母表达的蛋白相对 E coli.表达系统分子量较大、结表达系统分子量较大、结构较复杂。不过，虽然酵母表达系统表达的蛋白有糖构较复杂。不过，虽然酵母表达系统表达的蛋白有糖基化修饰，但是基化修饰，但是糖链结构和组成与天然糖蛋白相差甚糖链结构和组成与天然糖蛋白相差甚远远，对于糖链极大影响生物活性的蛋白质如，对于糖链极大影响生物活性的蛋白质如 EPO 、治疗性抗体等，仍无法用酵母表达系统表达。治疗性抗体等，仍无法用酵母表达系统表达。长生研长生研哺乳动物细胞表达系统的应用哺乳动物细胞表达系统的应用A

5、vastin、Bexxar、Campath、Erbitux、Herceptin、Humira、Mylotarg、Orthoclone OKT3、Raptiva、Remicade、ReoPro、Rituxan、Simulect、Synagis、Xolair、Zenapax、Zevalin等。等。 组织型纤溶酶原激活剂（组织型纤溶酶原激活剂（tPA）、）、尿激酶、尿激酶、粘多糖粘多糖- -L-艾杜糖醛酸艾杜糖醛酸水解酶水解酶、葡糖脑苷脂酶、半乳糖、葡糖脑苷脂酶、半乳糖苷酶苷酶- 、DNA酶、酶、t-PA突变体突变体TNK-tPA等。等。干扰素干扰素 -N3、干扰素、干扰素 -n1、干扰素、干扰素

6、-1a、EPO- 和和EPO- 突变体突变体Aranesp、骨形成蛋白、骨形成蛋白2(rhBMP-2)和骨形成蛋白和骨形成蛋白7(rhBMP-7)人生长激素、人生长激素、促滤泡素促滤泡素- - 、促滤泡、促滤泡素素- - 、人绒膜促性腺、人绒膜促性腺激素、促甲状腺素激素、促甲状腺素CEA-Scan、MyoScint、OncoScint、ProstaScint、Verluma两种受体两种受体-Fc-Fc融合蛋融合蛋白（白（AmeviveAmevive、EnbrelEnbrel）和活化蛋白）和活化蛋白C C（XigrisXigris） 凝血因子凝血因子VIIa 、凝血、凝血因子因子VIII (BH

7、K表达、表达、CHO表达表达)、缺失、缺失B链链的凝血因子的凝血因子VIII ，以，以及凝血因子及凝血因子IX。细胞因子细胞因子7种种凝血因子凝血因子5种种激素激素5种种其它其它3种种体内诊断用体内诊断用抗体抗体5种种治疗性抗体治疗性抗体26种种酶酶8种种长生研长生研CHO细胞表达系统的优势与国内外应用情况细胞表达系统的优势与国内外应用情况v 国内国内CHO细胞表达的不足之处细胞表达的不足之处v 国内国内CHO细胞表达系统的应用情况细胞表达系统的应用情况v FDA批准的批准的CHO细胞表达的生物技术药物细胞表达的生物技术药物v CHO细胞的五大应用优势细胞的五大应用优势v 提高提高CHO细胞产

8、量的策略细胞产量的策略长生研长生研生产用哺乳动物细胞株生产用哺乳动物细胞株v CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）：上皮样细胞。当前被细胞（中国仓鼠卵巢细胞）：上皮样细胞。当前被用来表达用来表达tPA、EPO、单抗、单抗、V因子等重组蛋白。因子等重组蛋白。v BHK细胞（仓鼠胚肾细胞）：成纤维样细胞。过去用于细胞（仓鼠胚肾细胞）：成纤维样细胞。过去用于增殖病毒，并制作疫苗。现在也用于工程细胞构建。表达增殖病毒，并制作疫苗。现在也用于工程细胞构建。表达产物主要是产物主要是V因子。因子。v NSO细胞（小鼠胸腺瘤细胞）：转化的淋巴细胞。主要细胞（小鼠胸腺瘤细胞）：转化的淋巴细胞。主要表达用于单抗。表达用

9、于单抗。 不同宿主细胞表达的重组蛋白其稳定性和蛋白糖基化类型不不同宿主细胞表达的重组蛋白其稳定性和蛋白糖基化类型不同，需根据要表达的目的蛋白选择最佳的宿主细胞。同，需根据要表达的目的蛋白选择最佳的宿主细胞。 长生研长生研CHO细胞的五大应用优势细胞的五大应用优势外源蛋白容易在外源蛋白容易在CHO细胞细胞中合成并分泌到培养基中中合成并分泌到培养基中蛋白的转录后修饰蛋白的转录后修饰与人体细胞相似与人体细胞相似可贴壁或者可贴壁或者悬浮培养悬浮培养无血清培养时细胞无血清培养时细胞密度高于其它细胞密度高于其它细胞安全性高安全性高BHKCHONSO长生研长生研产品产品商品名商品名公司公司首次批首次批准时间

10、准时间适应证适应证激素激素follitropin beta，促滤泡素，促滤泡素- FollistimAkzo Nobel1997.9不孕症不孕症follitropin alfa，促滤泡素，促滤泡素- Gonal-FSerono S.A.1998.9不孕症不孕症thyrotropin alfa，促甲状腺素，促甲状腺素ThyrogenGenzyme1998.12血清甲状腺球蛋白测试血清甲状腺球蛋白测试酶酶alteplase, tPAActivaseGenentech1987.11急性心梗；肺栓塞，急性脑中风急性心梗；肺栓塞，急性脑中风Laronidase，粘多糖粘多糖- -L-艾杜糖艾杜糖醛酸水解

11、酶醛酸水解酶Aldurazyme Genzyme2003.4粘多糖贮积病粘多糖贮积病Imiglucerase，葡糖脑苷脂酶，葡糖脑苷脂酶CerezymeGenzyme1994.5Gauchers病病IdursulfaseElapraseShire Human Genetic Therapies2006.7艾杜糖硫酸酯酶缺乏症艾杜糖硫酸酯酶缺乏症Algasidase beta，半乳糖苷酶，半乳糖苷酶- FabrazymeGenzyme2003.4Fabrys病病dornase alfa，DNA酶酶Pulmozyme Genentech1993.12囊性纤维化囊性纤维化Tenecteplase，t

12、-PA突变体突变体TNKase Genentech2000.6急性心梗急性心梗凝血因子凝血因子coagulation factor IXBeneFix Wyeth1997.2血友病血友病Bantihemophilic factor VIIIRecombinate rAHF Baxter Healthcare 1992.2血友病血友病AFactor VIII（无（无B链）链）ReFactoWyeth2000.3血友病血友病A细胞因子细胞因子Interferon -1a，Avonex Rebif Biogen/ IdecSerono S.A./ Pfizer1996.52002.3多发性硬皮病多发

13、性硬皮病darbepoetin alfa，EPO突变体突变体AranespAmgen2001.9肾性贫血肾性贫血epoietin alfa，EPOEpogenProcritAmgenOrtho Biotech1989.61990.12肾性贫血肾性贫血rh Bone morphogenetic protein-2, rhBMP-2INFUSE Bone Graft /LT-CAGEWyeth and Medtronic Sofamor Danek2002.7脊骨退行性病变的脊骨融合脊骨退行性病变的脊骨融合rh Osteogenic protein 1, BMP-7OsigraftStryker2

14、001.8胫骨骨折胫骨骨折治疗性抗体治疗性抗体Bevacizumab (anti-EGFR)Avastin (人源化人源化)Genentech2004.2转移性结肠癌或直肠癌转移性结肠癌或直肠癌Alemtuzumab (anti-CD52) Campath (人源化人源化)Ilex Oncology/ Millennium / Berlex2001.5B-细胞慢性淋巴细胞白血病细胞慢性淋巴细胞白血病Trastuzumab (antiHER-2) Herceptin (人源化人源化) Genentech1998.9转移性乳腺癌转移性乳腺癌Efalizumab (anti-CD11a) Rapti

15、va (人源化人源化)Xoma/ Genentech2003.10慢性中重度银屑病慢性中重度银屑病RanibizumabLucentisGenentech2006.6视网膜黄斑退化视网膜黄斑退化Rituximab (Anti-CD20)Rituxan (嵌合嵌合)IDEC/ Genentech1997.11CD20+ B细胞细胞non-Hodgkins淋巴瘤淋巴瘤Omalizumab (Anti-IgE)Xolair (人源化人源化)Genentech/ Tanox/ Novartis2003.6中重度持续性哮喘中重度持续性哮喘Daclizumab (Anti-CD25)Zenapax (人源

16、化人源化)Hoffmann-La Roche1997.12肾移植急性排斥肾移植急性排斥其它其它Alefacept，LFA3-Fc融合蛋白融合蛋白AmeviveBiogen/Idec2003.1中重度银屑病中重度银屑病Etanercept，TNFR-Fc融合蛋白融合蛋白ENBRELAmgen/Wyeth1998.11中重度类风湿关节炎；银屑病中重度类风湿关节炎；银屑病Drotrecogin alfa，活化蛋白，活化蛋白CXigrisEli Lilly2001.11脓毒症脓毒症FDA批准的批准的CHO细胞表达的生物技术药物细胞表达的生物技术药物长生研长生研国内国内CHO细胞表达系统的应用情况细胞表

17、达系统的应用情况v上市产品：上市产品：促红细胞生成素（EPO） 哈药集团、华北制药、沈阳三生、成都地奥、山东阿华、北京四环、上海科华、上海凯茂、山东科兴、深圳赛保尔、深圳新鹏、开封大鹰、山西威奇达共 13 家制药厂生产。基因工程乙型肝炎疫苗 长春所、兰州所、武汉所、成都所、华北制药、北京华尔盾 6 家。重组人II型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白（益赛普 ） 上海中信国健药业。目前拥有 2条300L抗体药物细胞培养中试工艺验证生产线， 4条750L抗体药物细胞培养生产线和新增2个2500L的细胞反应罐。生产能力为年产2ml西林瓶装12.5mg冻干粉针剂400万支（50kg），生产能力仍滞后于市场

18、需求。v处于临床研究阶段：处于临床研究阶段：重组抗EGFR人源化单抗（泰欣生 ） 百泰生物重组Her2人源化单抗 中信国健重组抗CD25人源化单抗 中信国健重组人MNV-骨形态发生蛋白-2 重组人尿激酶原v临床前：重组人促卵泡激素长春金赛长生研长生研国内国内CHO细胞表达系统的两大技术瓶颈细胞表达系统的两大技术瓶颈v 表达量低表达量低表达量表达量 g/(106cells d)生产生产100g/年年需要细胞罐（需要细胞罐（L）生产成本生产成本（美元（美元/克）克）中国中国55000L60000-100000美国美国50500L6000-10000v 生产方式落后生产方式落后 中国：贴壁、转瓶培养

19、 美国：悬浮或微载体、罐培养以tPA为例，达到年产量100克长生研长生研目的蛋白表达载体目的蛋白表达载体CHO 细细 胞胞 株株细胞大规模培养技术细胞大规模培养技术普通普通CHO工程化工程化CHO基因工程改造基因工程改造提高提高CHO细胞产量的策略细胞产量的策略u目的基因u各种调控元件-基因拷贝数、转录、翻译、折叠、分泌u生物反应器的选择u培养方式的选择：流加、灌流、批式还是反复批式培养。u至少70%的产品采用搅拌式悬浮培养。表达量低、表达量低、产量不稳定产量不稳定表达量提高、更表达量提高、更适合大规模培养适合大规模培养长生研长生研构建自分泌生长型构建自分泌生长型CHO细胞细胞改善细胞的糖基化

20、功能改善细胞的糖基化功能改变细胞的能量代谢途径改变细胞的能量代谢途径工程化工程化CHO细胞改造策略细胞改造策略控制细胞增殖速率控制细胞增殖速率增强细胞抗凋亡活性增强细胞抗凋亡活性长生研长生研增强细胞抗凋亡活性增强细胞抗凋亡活性v 细胞凋亡是大规模培养中细胞死细胞凋亡是大规模培养中细胞死亡的主要原因，是实现高密度培亡的主要原因，是实现高密度培养的最大障碍。因此防止细胞死养的最大障碍。因此防止细胞死亡可以提高细胞密度，延长培养亡可以提高细胞密度，延长培养周期，从而提高产量。周期，从而提高产量。过表达过表达 bcl-2 或者或者 沉默沉默 caspase-3凋亡信号的传递过程v培养周期延长培养周期延

21、长v细胞活性提高细胞活性提高2-4倍倍v细胞碎片减少细胞碎片减少10倍以上倍以上v细胞密度提高细胞密度提高2-3倍倍v产量增加产量增加3倍左右倍左右长生研长生研控制细胞增殖速率控制细胞增殖速率特点：将细胞周期调节基因至于特点：将细胞周期调节基因至于可诱导性启动子之后。可诱导性启动子之后。细胞周期调控示意图细胞周期调控示意图v 细胞生长静止，可持续几周细胞生长静止，可持续几周v 产量增加产量增加10-30倍倍长生研长生研改变细胞的能量代谢途径改变细胞的能量代谢途径引入基因血红蛋白血红蛋白己糖磷酸激酶己糖磷酸激酶 丙酮酸羧化酶丙酮酸羧化酶谷氨酰胺合成酶谷氨酰胺合成酶沉默基因乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶葡萄

22、糖转运蛋白葡萄糖转运蛋白烯醇化酶烯醇化酶v葡萄糖消耗速率下降葡萄糖消耗速率下降1-4倍倍v乳酸生成降低乳酸生成降低1-2.5倍倍v谷氨酰胺消耗降低谷氨酰胺消耗降低2倍左右倍左右v氧消耗增加氧消耗增加3倍左右倍左右v批式培养周期延长批式培养周期延长2-3天天v细胞密度提高细胞密度提高1-2.5倍倍v产量增加产量增加3倍左右倍左右长生研长生研改善细胞的糖基化功能改善细胞的糖基化功能v 表征糖蛋白的诸多参数：糖基化氨基酸百分率、表征糖蛋白的诸多参数：糖基化氨基酸百分率、N-N-连接寡糖和连接寡糖和多糖的糖链形式、末端糖残基数、多糖的糖链形式、末端糖残基数、N-N-羟乙酰神经氨酸的切割位羟乙酰神经氨酸

23、的切割位点、糖链与糖链之间的连接方式、寡糖链末端唾液酸化百分率点、糖链与糖链之间的连接方式、寡糖链末端唾液酸化百分率等。等。v 糖链影响糖蛋白的药理活性、生理生化特性（溶解性、稳定性、糖链影响糖蛋白的药理活性、生理生化特性（溶解性、稳定性、折叠和分泌）及药代动力学（半衰期、靶向性、免疫原性和抗折叠和分泌）及药代动力学（半衰期、靶向性、免疫原性和抗原性）原性）v 不同的细胞由于糖基转移酶的种类和活性有很大不同，其表达不同的细胞由于糖基转移酶的种类和活性有很大不同，其表达的糖蛋白糖链的结构各不相同。的糖蛋白糖链的结构各不相同。v 主要策略：引入编码糖基转移酶或糖苷酶的基因，或者封闭不主要策略：引入

24、编码糖基转移酶或糖苷酶的基因，或者封闭不希望的糖基化形式。希望的糖基化形式。v 效果：经过糖基化改进的效果：经过糖基化改进的CHOCHO细胞表达的蛋白，其在体内的生物细胞表达的蛋白，其在体内的生物活性是原蛋白的活性是原蛋白的10-2010-20倍倍。长生研长生研构建自分泌生长型构建自分泌生长型CHO细胞细胞v目的目的：实现无血清培养。 FDA自2002年起已不再批准用含血清培养液生产的生物制品。现在50%以上的细胞产品采用无血清培养方式。v血清的缺点：血清的缺点：含有具细胞毒作用的多胺氧化酶成分。不能保证批与批之间的稳定性。杂蛋白含量多，增加下游分离纯化的难度和成本，使产品的质量下降。成本高，

25、使用10%浓度就占培养液成本的90% 。v适于适于CHO细胞生长的商业化无血清培养液细胞生长的商业化无血清培养液有CHO-S-SFM II ( LTI )、CCM5( HyClone )和proCHO-CDM ( BioWhittaker ) ，但价格较高。现有的无血清培养通常是在细胞生长期添加血清，而在细胞生产期逐渐降低血清浓度，用各种生长因子来替代，并非真正的无血清培养。v目前导入的热点基因主要是各种细胞因子，如目前导入的热点基因主要是各种细胞因子，如IGF-1、EGF和转铁蛋白和转铁蛋白基因。基因。长生研长生研重组蛋白重组蛋白CHO表达平台的构建流程表达平台的构建流程获得抗凋亡、增殖可控

26、、代谢途径优化和不依赖血清培养的工程化CHO细胞CHO细胞的细胞的工程化工程化构建目的基因构建目的基因表达载体表达载体克隆目的基因和与之相应的整合、转录、翻译、筛选等相关元件，装配表达质粒将载体导入工将载体导入工程化程化CHO细胞细胞筛选稳定、高筛选稳定、高表达细胞株表达细胞株扩大培养规模扩大培养规模获得表达量不低于 50g/106cellsd 的稳定细胞株实验室-中试-生产规模 建立培养工艺长生研长生研2007 年 TOP 10 生物技术药品销售情况排位 产品及销售企业销售收入（亿美元）1 Enbrel (AMG/Wythe) 52.90 2 Aranesp (AMG) 44.15 3 Re

27、micade(J&J/S-P) 42.20 4 Rituxan (DNA) 37.14 5 Neulasta (AMG) 35.56 6 Herceptin (DNA) 32.55 7 Erypo/Procrit (J&J) 32.91 8 Epogen (AMG) 29.82 9 Avastin (DNA) 28.47 10 Humira (ABT) 27.90 前十位合计 363.59 CHO细胞产品合计213.79（58.8%）注：红色字体的为注：红色字体的为CHO细胞表达产品细胞表达产品长生研长生研产品产品商品名商品名公司公司首次批首次批准时间准时间适应证适应证激素激素follitro

28、pin beta，促滤泡素，促滤泡素- FollistimAkzo Nobel1997.9不孕症不孕症follitropin alfa，促滤泡素，促滤泡素- Gonal-FSerono S.A.1998.9不孕症不孕症thyrotropin alfa，促甲状腺素，促甲状腺素ThyrogenGenzyme1998.12血清甲状腺球蛋白测试血清甲状腺球蛋白测试酶酶alteplase, tPAActivaseGenentech1987.11急性心梗；肺栓塞，急性脑中风急性心梗；肺栓塞，急性脑中风Laronidase，粘多糖粘多糖- -L-艾杜糖艾杜糖醛酸水解酶醛酸水解酶Aldurazyme Genz

29、yme2003.4粘多糖贮积病粘多糖贮积病Imiglucerase，葡糖脑苷脂酶，葡糖脑苷脂酶CerezymeGenzyme1994.5Gauchers病病IdursulfaseElapraseShire Human Genetic Therapies2006.7艾杜糖硫酸酯酶缺乏症艾杜糖硫酸酯酶缺乏症Algasidase beta，半乳糖苷酶，半乳糖苷酶- FabrazymeGenzyme2003.4Fabrys病病dornase alfa，DNA酶酶Pulmozyme Genentech1993.12囊性纤维化囊性纤维化Tenecteplase，t-PA突变体突变体TNKase Genen

30、tech2000.6急性心梗急性心梗凝血因子凝血因子coagulation factor IXBeneFix Wyeth1997.2血友病血友病Bantihemophilic factor VIIIRecombinate rAHF Baxter Healthcare 1992.2血友病血友病AFactor VIII（无（无B链）链）ReFactoWyeth2000.3血友病血友病A细胞因子细胞因子Interferon -1a，Avonex Rebif Biogen/ IdecSerono S.A./ Pfizer1996.52002.3多发性硬皮病多发性硬皮病darbepoetin alfa，

31、EPO突变体突变体AranespAmgen2001.9肾性贫血肾性贫血epoietin alfa，EPOEpogenProcritAmgenOrtho Biotech1989.61990.12肾性贫血肾性贫血rh Bone morphogenetic protein-2, rhBMP-2INFUSE Bone Graft /LT-CAGEWyeth and Medtronic Sofamor Danek2002.7脊骨退行性病变的脊骨融合脊骨退行性病变的脊骨融合rh Osteogenic protein 1, BMP-7OsigraftStryker2001.8胫骨骨折胫骨骨折治疗性抗体治疗性

32、抗体Bevacizumab (anti-EGFR)Avastin (人源化人源化)Genentech2004.2转移性结肠癌或直肠癌转移性结肠癌或直肠癌Alemtuzumab (anti-CD52) Campath (人源化人源化)Ilex Oncology/ Millennium / Berlex2001.5B-细胞慢性淋巴细胞白血病细胞慢性淋巴细胞白血病Trastuzumab (antiHER-2) Herceptin (人源化人源化) Genentech1998.9转移性乳腺癌转移性乳腺癌Efalizumab (anti-CD11a) Raptiva (人源化人源化)Xoma/ Gene

33、ntech2003.10慢性中重度银屑病慢性中重度银屑病RanibizumabLucentisGenentech2006.6视网膜黄斑退化视网膜黄斑退化Rituximab (Anti-CD20)Rituxan (嵌合嵌合)IDEC/ Genentech1997.11CD20+ B细胞细胞non-Hodgkins淋巴瘤淋巴瘤Omalizumab (Anti-IgE)Xolair (人源化人源化)Genentech/ Tanox/ Novartis2003.6中重度持续性哮喘中重度持续性哮喘Daclizumab (Anti-CD25)Zenapax (人源化人源化)Hoffmann-La Roche1997.12肾移植急性排斥肾移植急性排斥其它其它Alefacept，LFA3-Fc融合蛋白融合蛋白AmeviveBiogen/Idec2003.1中重度银屑病中重度银屑病Etanercept，TNFR-Fc融合蛋白融合蛋白ENBRELAmgen/Wyeth1998.11中重度类风湿关节炎；银屑病中重度类风湿关节炎；银屑病Drotrecogin alfa，活化蛋白，活化蛋白CXigrisEli Lilly2001.11脓毒症脓毒症FDA批准的批准的CHO细胞表达的生物技术药物细胞表达的生物技术药物52.9亿美元亿美元28.47亿美元亿美元长生研长生研