【农学课件】《植物组织培养》电子教案

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1、植物组织培养教案课程：植物组织培养学时：30学时班级：植保、农学、园艺、园林一、教学进度计划教学进度表周次学时教学内容备注12绪论及组织培养的试验室组成22组织培养的设备、环境调控及培养基的种类和成分32培养基的培制、选择和对前三讲的复习总结42消毒、灭菌、接种、培养和驯化52试管苗增殖率的计算及营养器官的培养62离体叶的培养及生殖器官的培养72培育无病毒苗木的意义及方法82无病毒苗木的鉴定、繁殖、保存和利用92花药和花粉粒的培养102原生质体的培养112非洲菊的组织培养122香石竹的组织培养及对前面所学知识进行总结132兰科花卉的组织培养142水果作物的组织培养152马铃薯和番茄的组织培养二

2、、授课内容及学时分配授课内容及学时分配章节各章名称理论课周次理论课时数实验课时数总课时数1绪论112组织培养的试验设备及培养条件2.52.53培养基2.52.54操作技术335植物器官的培养446植物无病毒苗木的培育447花药和花粉粒的培育228原生质体培养339草木花卉的组织培养2210兰科花卉的组织培养2211水果作物的组织培养2212马铃薯和番茄的组织培养22 合 计3030三、单元教学计划名称第一章 绪论目 的要 求熟练掌握植物组织培养的概念、原理和类型；掌握组织培养的特点；初步掌握组织培养的发展史；基本掌握组织培养在农业生产实践上的应用。重 点难 点组织培养的概念、原理、类型及其特点

3、时 间教学组织教学方法1学时第一节 植物组织培养的意义一、 植物组织培养的狭义概念、广义概念、外植体概念及组织培养的特点二、组织培养的理论基础三、植物组织培养的类型第二节植物组织培养的发展一、 探索阶段二、奠基阶段三、迅速发展阶段 第三节植物组织培养与农业的关系一、 快速繁殖苗木二、获得脱毒苗木三、为农作物育种提供有利的手段四、实现工厂化育苗启发式讲授；并配合多媒体课件名称第二章 组织培养的试验设备及培养条件目 的要 求基本掌握组织培养实验室的设计；熟练掌握实验仪器、设备及使用方法；掌握组织培养的主要环境条件。重 点难 点组织培养常用仪器的使用及组织培养的主要环境条件的调控。时 间教学组织教学

4、方法2.5学时第一节组织培养的实验室组成一、洗涤室1作用：2组成： 二、配置室1作用： 2组成： 三、无菌室1作用：2组成： 四、培养室1作用： 2需要具备的条件： 第二节常用设备与器材一、 玻璃器皿试管、三角瓶、培养皿，其中最常用的是三角瓶（一）、对玻璃器皿的要求： （二）、玻璃器皿的规格： 二、器材用具镊子、剪刀、解剖刀、解剖针第三节影响组织培养的各种环境因素的调控一、 温度二、光照1光强：2光质：3光照时间： 三、湿度1培养瓶内的湿度2环境湿度四、渗透压五、pH值六、气体讲授式；并配合多媒体课件作为辅助手段名称第三章 培养基目 的要 求掌握培养基的种类和特点；基本掌握培养基的组成成分和适

5、宜的剂量；熟练掌握培养基的制备方法和步骤；初步掌握培养基的筛选方法。重 点难 点培养基的种类、制备方法和步骤；培养基的选择。时 间教学组织教学方法2.5学时第一节培养基的种类和成分一、培养基的种类、特点及相应的组成培养基特点组成二、培养基的成分及相应作用（一）、成分：1水2无机化合物3有机化合物4植物激素5培养材料的支持物6抗生物质7抗氧化物质8活性碳（二）、各成分的相应作用第二节培养基的培制一、母液的配制1种类：2母液的浓缩倍数：二、工作培养基的培制（一）、量取母液（二）、定容（三）、加热（四）、灭菌第三节培养基的选择（一）单因子试验法一、培养基的选择方法（二）多因子试验法（三）广谱试验法讲

6、授法（讲述、讲解、讲读）；并配合多媒体课件作为辅助手段名称第四章 操作技术目 的要 求熟练掌握与组织培养相关的灭菌方法和无菌操作技术；掌握培养和驯化的方法和步骤；基本掌握褐变和玻璃化原因及采取的对策。重 点难 点重点为无菌操作技术以及褐变和玻璃化原因及采取的对策；难点为对试管苗增殖率计算公式的理解时 间教学组织教学方法3学时第一节消毒、灭菌与接种一、消毒和灭菌的概念及区别（一）、消毒与灭菌的概念和区别（二）、灭菌的方法种类：二、灭菌方法（一）、培养基的高压灭菌方法（二）、接种工具、植物材料的灭菌方法（三）、不耐热物质的灭菌方法（四）、一些物体表面的灭菌方法（五）、接种室和超净工作台的灭菌方法三

7、、无菌接种技术（一）、无菌接种的含义（二）、无菌接种的步骤第二节培养和驯化一、 培养的概念和方法（一）、培养的概念（二）、培养的方法二、培养的步骤（一）、初代培养（二）、继代培养三、试管苗的驯化移栽1移栽用的基质和容器2移栽前的练苗3移栽和幼苗的管理第三节试管苗增殖率的计算试管苗年增殖率的计算公式YXnY:年增殖率（瓶）X:每周期增殖的倍数n：一年增殖的周期数365/增殖周期增殖周期：指从接种开始到再次接种所需要的天数增殖倍数：每个增殖周期中一瓶能接种多少瓶注：只要每年能增殖810次，每次能增殖34倍以上，就可满足快速繁殖的要求。采用类比法，并配合实例讲授；同时运用多媒体课件作为辅助手段名称第

8、五章 植物器官的培养目 的要 求一般掌握离体根培养的取材部位、培养基的选择、胚胎培养的类型与各自的注意事项。熟练掌握茎尖培养的种类和操作步骤；茎段培养中材料的选择、处理及培养基的调整；离体叶片的培养步骤。重 点难 点茎尖和离体叶片培养的操作步骤。时 间教学组织教学方法4学时第一节营养器官的培养一、离体根的培养（一）、意义培养基的选择（二）、培养方法无性系的建立培养条件二、离体茎的培养1材料处理：（1）取材（2）消毒（3）接种（一）、茎尖培养2培养方法：（1）培养基的选择（2）培养条件（3）继代培养（4）生根培养3驯化移栽：（1）炼苗（2）移栽1材料处理：（1）取材（2）消毒（3）接种（二）、茎

9、段培养2培养方法：（1）培养基的选择（2）培养条件（3）继代培养（4）生根培养3驯化移栽：（1）炼苗（2）移栽三、离体叶的培养（一）、叶的结构：叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶1材料选取（二）、叶片的培养方法2消毒与接种3培养条件第二节生殖器官的培养一、 花器官和种子的培养1取材、消毒和接种（一）、花蕾培养2培养基和培养条件1种子培养的意义（二）、种子培养2培养基、灭菌和接种培养1胚胎培养的意义（三）、胚胎培养2成熟胚的培养幼胚培养的方式3幼胚培养影响培养成功的因素（四）简单介绍胚株和胚乳的培养采用讲授法；同时运用多媒体课件作为辅助手段名称第六章 植物无病毒苗木的培育目 的要 求初步掌握植物无病

10、毒苗培养的意义；深入掌握热处理和微茎尖脱毒的原理及方法；基本掌握无病毒植物的鉴定和利用；一般性掌握脱毒苗木的保存和利用方法。重 点难 点热处理和微茎尖脱毒的原理和方法。时 间教学组织教学方法4学时第一节培育无病毒苗木在生产上的意义一、无病毒苗木的概念二、培育无病毒苗木的意义第二节培育无病毒苗木的方法一、热处理脱毒（一）、热处理脱毒的发现及原理（二）、热处理脱毒的方法1温汤浸渍处理2热空气处理二、微茎尖培养脱毒1）基本培养基1微茎尖培养的培养基2）激素1）外植体预处理2培养方法2）茎尖的剖离与接种3）培养条件三、其它的脱毒方法 1）方法1愈伤组织培养脱毒2）原理 3）缺点1）含义2茎尖微体嫁接脱

11、毒2）方法3花药培养脱毒4化学药物脱毒第三节无病毒苗木的鉴定方法一、指示植物鉴定法1含义2优点3对指标植物的基本要求4鉴定方法1）汁液涂抹法2）小叶嫁接法二、抗血清鉴定法1原理与含义2鉴定方法3优点三、电子显微镜检查法简要介绍该方法的基本原理四、酶联免疫鉴定法简要介绍该方法的基本原理 第四节无病毒苗木的繁殖、保存与利用（自学）问答题：无病毒苗木的保存方法？采用引导、讲授与学生自学相结合的教法方法，并辅助多媒体课件等现代化教学手段名称第七章 花药和花粉粒的培育目 的要 求初步掌握花药和花粉培养的意义、花药与花粉的区别、花药培养的最佳接种时期、花药培养的大致过程；基本掌握花药培养中花粉的发育途径；

12、并初步掌握花粉培养的过程。重 点难 点花药、花粉培养的大致过程；花粉发育的四种途径。时 间教学组织教学方法2学时第一节花药和花粉粒培养的意义一、花药和花粉粒培养的概念1花药培养2花粉粒培养二、花药和花粉粒培养的意义 第二节花药的培养一、培养基的选择基本培养基：MS、B5、B61诱愈培养基2分化培养基3生根培养基二、花药材料的选取时期具体依据：1生理状态2外观形态三、材料处理与培养1消毒与接种2培养条件四、花药培养中花粉的发育途径1营养细胞发育途径2生殖细胞发育途径3营养细胞和生殖细胞共同发育途径4花粉粒均等分裂发育途径第三节花粉粒的培养一、培养基的选择二、材料的低温预处理三、花粉粒的分离四、培

13、养方法1微室培养法2看护培养法采用讲授教法，并辅助多媒体课件等现代化教学手段名称第八章 原生质体培养目 的要 求初步掌握原生质体培养的意义、原生质体的分离方法、原生质体培养方法；基本掌握原生质体融合的方法。重 点难 点重点为原生质体的分离和培养方法，难点为原生质体融合的方法。时 间教学组织教学方法3学时第一节原生质体培养的概念和意义一、概念1原生质体2原生质体培养二、意义 第二节原生质体的分离与培养一、植物材料根、茎、叶、花、果和种子等均可主要是叶肉组织、愈伤组织和县浮培养的细胞二、原生质体的分离方法1机械分离方法1）酶种类2酶分离法：2）步骤三、影响原质体分离的因素1胞壁降解酶2酶液的渗透势

14、3酶液的酸碱度4分离的环境条件5通气条件6植物栽培条件四、原生质的培养方法1）固体培养法1培养方法2）液体培养法3）固液结合培养法1）细胞壁的再生2原生质体的再生2）细胞分裂3）植株再生3影响原生质体分离和再生的因素1）培养基成分2）原生质体密度3）光照和温度第三节原生质体的融合一、融合方式（一）、自发融合（二）、诱导融合1物理方法2化学方法二、操作过程（学生自学达到了解即可）采用讲授教法，并辅助多媒体课件等现代化教学手段名称第九章 草木花卉的组织培养目 的要 求掌握非洲菊、香石竹快繁的方法；基本掌握菊花花瓣培养方法及香石竹茎段培养技术。重 点难 点非洲菊和香石竹两种花卉的组织培养育苗。时 间

15、教学组织教学方法2学时第一节非洲菊的组织培养一、生物学特性1形态特性：1）科属2）花色3）植株外貌2生态习性：1）温度2）水分3）光照4）pH值5）盛花期二、自然繁殖与育苗1播种繁殖2分株繁殖3组培繁殖三、组织培养育苗四、栽培管理1土壤准备与定殖2肥水管理3剥叶与疏蕾4温度管理 第二节香石竹的组织培养一、生物学特性与栽培习性1形态特性：1）科属2）花色3）植株外貌2生态习性：1）温度2）水分3）光照4）pH值5）盛花期二、自然繁殖与育苗1采穗母本园2插穗3扦插苗床4扦插方法5扦插时间三、组织培养育苗1取材、灭菌和接种2培养基和培养方法3芽的诱导和繁殖4生根培养5移栽驯化四、栽培管理1土壤准备2

16、作畦与定殖3摘心4张网5肥水管理6摘芽和摘蕾采用示例讲授法，并辅助多媒体课件等现代化教学手段名称第十章 兰科花卉的组织培养目 的要 求掌握蝴蝶兰的组织培养技术、培养部位、接种方法；初步掌握兰科植物主要属的培养方法。重 点难 点兰科植物主要属的组织培养方法。时 间教学组织教学方法2学时第一节兰花的组织培养技术一、取材部位1新芽的茎尖2休眠芽3茎的隐芽4花梗二、茎尖的选取、灭菌和接种1选取、灭菌2接种第二节兰科植物主要属的培养一、卡德兰属的培养1材料的准备和灭菌2采芽3培养条件和继代培养4防止培养材料变褐二、蝶兰属的培养1茎尖的培养：1）采芽的准备2）采芽3）培养基采用Vacin和Went培养基4

17、）培养条件2花梗腋芽的培养：1）采芽的准备2）采芽不带花梗组织，仅取腋芽，接种到培养基3）培养基和培养条件4）继代培养5）育苗3叶片的培养：1）培养准备和接种2）培养基和培养条件3）叶片的培养4）叶片的切取培养5）继代培养6）育苗采用示例讲授法，并辅助多媒体课件等现代化教学手段名称第十一章 水果作物的组织培养目 的要 求掌握草莓茎尖脱毒培养的一般操作步骤和苹果茎尖培养的主要环节；基本掌握鉴定草莓无病毒苗的方法、苹果组织培养的类型和草莓花粉培养的大致步骤。重 点难 点草莓无病毒苗的鉴定方法、苹果组织培养的类型和草莓花粉培养的大致步骤。时 间教学组织教学方法2学时第一节草莓的组织培养一、生物学特性

18、1形态特征：1）科属2）果肉花色3）植株外貌2生物学特性：1）温度2）水分3）光照4）pH值二、栽培方法三、草霉的脱毒培养1热处理脱毒2微茎尖培养脱毒3花药培养脱毒四、草霉脱毒苗的鉴定1草霉病毒的种类2草霉病的鉴定方法五、草霉脱毒苗的苗的繁殖与利用1防蚜2繁殖程序及提高繁殖率的措施3生产管理工作第二节苹果的组织培养（给出自学提纲）一、生物学特性1形态特征：1）科属2）果肉花色3）植株外貌2生物学特性：1）温度2）水分3）光照4）pH值二、苹果的花粉培养三、苹的茎尖培养四、胚的培养五、栽培管理1育苗2土壤管理3施肥时期和方法4灌溉和排水5疏花疏果，调整负载量6整形技术7修枝技术采用示例讲授、练习

19、与学生自学相结合的方法，并辅助多媒体课件、图片等现代化教学手段名称第十二章 马铃薯和番茄的组织培养目 的要 求掌握马铃薯的脱毒培养技术和马铃薯无病毒苗的鉴定方法；基本掌握番茄组织培养类型的差别和番茄栽培管理中的调节因素。重 点难 点马铃薯的生物学习性；马铃薯脱毒苗的培育和无毒苗的鉴定方法。时 间教学组织教学方法2学时第一节马铃薯的组织培养一、生物学特性1形态特征：1）根2）茎3）叶4）花5）果实和种子2生物学特性：1）温度2）对土壤的要求二、栽培管理1催芽2播种和管理三、马铃薯的脱毒技术1脱毒种薯生产程序2茎尖培养脱毒：1）取材和培养2）继代和生根3花药培养脱毒四、马铃薯脱毒苗的鉴定1指示植物

20、鉴定2培养鉴定3嫁接鉴定五、马铃薯脱毒苗的苗的繁殖与利用1无毒病株的繁殖2无毒病株的保存第二节番茄的组织培养（给出自学提纲，引导学生自学）一、 基本掌握番茄组织培养中各类型的主要差别二、 番茄栽培管理中的调节因素采用示例讲授、练习与学生自学相结合的方法，并辅助多媒体课件、图片等现代化教学手段四、教案内容名称第一讲 绪论及组织培养的试验室组成目 的要 求熟练掌握植物组织培养的概念、原理和类型；掌握组织培养的特点；初步了解组织培养的发展史；基本掌握组织培养在农业生产实践上的应用和组织培养的实验室组成。重 点难 点组织培养的概念、原理、类型、特点及其实验室组成。主要内容：第一部分绪论第一节植物组织培

21、养的意义一、 植物组织培养的狭义概念、广义概念、外植体概念及组织培养的特点（一）、概念：1狭义概念2广义概念3外植体概念（二）、组织培养的特点：1培养条件可以人为控制2生长周期短，繁殖率高3管理方便，利于工厂化生产和自动化控制二、组织培养的理论基础细胞全能性理论三、植物组织培养的类型根据外植体的不同，可以分为以下几种类型：1植株培养2组织培养 3器官培养4细胞培养5原生质体培养第二节植物组织培养的发展一、 探索阶段（20世纪初至30年代中）11902年德国著名的植物生理学家Haberlandt提出了高等植物的细胞全能性理论；21934年White创立了离体根的（怀特）培养基，并发表了植物组织培

22、养手册的专著。二、奠基阶段（30年代中至50年代末）1四十年代，Skoogt和催徵确定了腺嘌呤/生长素的比例是控制根和芽形成主要条件之一； 21956年Miller等发现了激动素可以代替腺嘌呤促进成芽。三、迅速发展阶段（60年代至现在）1原生质体培养取得重大突破2花药培养取得显著成绩3微繁技术取得广泛就用第三节植物组织培养与农业的关系一、 快速繁殖苗木二、获得脱毒苗木三、为农作物育种提供有利的手段四、实现工厂化育苗第二部分组织培养的试验设备及培养条件（其中一节）第一节组织培养的实验室组成一、洗涤室作用：用于玻璃仪器的清洗、干燥和贮存组成：大型水槽、塑料筐、烘干箱、干燥架二、配置室作用：用于培养

23、基配制、分装、包扎和灭菌组成：药品柜、电子分析天平、大型工作台、蒸馏水器、磁力搅拌器、普通冰箱、电炉或电饭锅、酸度计、培养基分装设备、高压灭菌锅、恒温培养箱或生化培养箱、烘干箱三、无菌室作用：用于植物材料的无菌分离、接种转移培养物组成：接种箱、超净台、解剖镜、无菌操作用的器具、搁架四、培养室作用：用于培养接种后植物材料需具备的条件：1温度：2327左右2湿度：7080%3光照强度：15003000lx 4光照时间：1016h 课目第二讲组织培养的设备、环境调控及培养基的种类和成分目 的要 求熟练掌握实验仪器、设备及使用方法；掌握组织培养的主要环境条件；基本掌握培养基的种类和特点，培养基的组成成

24、分和适宜的剂量。重 点难 点组织培养常用仪器的使用，组织培养的主要环境条件的调控及培养基的主要特点。主要内容：第一部分组织培养的试验设备及培养条件（另两节）第二节常用设备与器材一、 玻璃器皿试管、三角瓶、培养皿，其中最常用的是三角瓶（一）、对玻璃器皿的要求：1耐腐蚀、高温、高压2透明度好、3易于放置外植体 （二）、玻璃器皿的规格：三角瓶（100、250、500ml）、培养皿（9、12cm）、试管（18180mm或20200mm）二、器材用具镊子、剪刀、解剖刀、解剖针第三节影响组织培养的各种环境因素的调控一、 温度适宜温度为252二、光照1光强：可以影响细胞的增殖、组织和器官的分化，同时对幼苗的

25、生长也有影响2光质：3光照时间：一般情况下，时间的加长，对植株的形态建成有促进作用三、湿度1培养瓶内的湿度2环境温度四、渗透压适宜的范围为12个大气压，两个以上对生长不利五、pH值适宜的范围为55.6；一般为5.8六、气体氧气是组织培养中必需的因素，增加通气利于组培第二部分培养基（其中一节）第一节培养基的种类和成分一、培养基的种类、特点及相应的组成1MS培养基： （1）特点（2）组成3White培养基：（1）特点（2）组成4N6培养基： （1）特点（2）组成5KM8P培养基：（1）特点（2）组成二、培养基的成分及相应作用1水1）作用2）对其要求：要用蒸馏水2无机化合物1）作用2）常用成分（1）

26、大量元素：N，P，K，Ca，Mg，S等；（2）微量元素：Fe，B，Mn，Cu，Mo，Co等3有机化合物1）作用2）常用成分（1）碳水化合物（2）维生素（3）肌醇（4）氨基酸（5）天然化合物：椰乳、香蕉、马铃薯、酵母提取液、麦芽提取液、苹果和番茄的果汁、黄瓜的果实、未熟玉米的胚乳4植物激素1）作用2）常用成分（1）生长素类：IAA、NAA、IBA、2,4D（2）赤霉素类：GA3（3）细胞分裂素类：6BA、Kt5培养材料的支持物1）作用2）常用成分（1）琼脂（2）其它：玻璃纤维、滤纸桥、海绵6抗生物质1）作用2）常用成分如青霉素、链霉素、庆大霉素7抗氧化物质1）作用2）常用成分半胱氨酸、Vc、二硫

27、苏糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、及二乙基二硫氨基甲酸酯8活性碳主要作用为：课目第三讲培养基的培制、选择和对前三讲的复习总结目 的要 求熟练掌握培养基的制备方法和步骤；初步掌握培养基的筛选方法。重 点难 点培养基的制备方法、步骤和对前三讲知识点的融会贯通。主要内容：第一部分培养基（另两节）第二节培养基的培制一、母液的配制1种类：大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机物质母液、激素母液2母液的浓缩倍数：一般1015倍二、工作培养基的培制（一）、量取母液1先量取大量元素母液2再量取微量元素母液及铁盐母液3量取激素母液（二）、定容（三）、加热（四）、灭菌第三节培养基的选择一、 单因子试验法指培养基中的其

28、它成分保持不变，只改变其中的一种成分，从而筛选出最佳培养基的方法。二、多因子试验法 指改变培养基中两种或两种以上成分，从而得到最佳浓度配比及筛选出最佳培养基的方法。根据其复杂程度可以分为完全试验法与正交试验法三、广谱试验法把培养基中所有组分分为4大类：无机盐、有机营养物质(蔗糖、氨基酸和肌醇等)、生长素、细胞分裂素。对每一类物质选定低(L)、中(M)、和高(H)3个浓度。4类物质各3种浓度的自由组合即构成了一项包括81个处理的实验。在这81个处理中最好的一个可用4个字母表示。第二部分前三讲的复习总结一、 对前三讲的主要内容进行概括和总结，使学生有一个整体的思路二、 复习题（利用复习题加深对所学

29、知识的理解）1什么是广义的植物组织培养?什么是狭义的植物组织培养?什么是外植体“?2按照外植体的不同，植物组织培养可以分成几类?比较常用的是哪些?3植物组织培养有哪些特点?4因地制宜建一个组织培养实验室，需要哪些分实验室?各分室的作用是什么?常规组织培养时，需要什么设备和器械?怎样使用?5组织培养中，pH值起什么作用?如果pH值过高或过低会有什么后果? 6目前，常用的培养基种类有哪些?各有什么特点?培养基包括哪些成分?各有什么作用?7简要说明MS培养基的基本组成?8配制培养基时，为什么要先配母液?如何配制母液?怎样利用母液配制培养基?9培养基内加入活性炭的目的是什么?应注意什么问题?10配制培

30、养基时，为什么要加入一定量的植物生长物质?11怎样进行培养基的高压湿热灭菌?12试比较选择培养基时几种方法的优劣?课目第四讲消毒、灭菌、接种、培养和驯化目 的要 求熟练掌握组织培养相关的灭菌方法和无菌操作技术；掌握培养和驯化的方法和步骤；基本掌握褐变和玻璃化原因及采取的对策重 点难 点无菌操作技术以及褐变和玻璃化原因及采取的对策主要内容：第一节消毒、灭菌与接种一、消毒和灭菌的概念及区别（一）、消毒与灭菌的概念1有菌和无菌的含义2消毒与灭菌含义（二）、消毒与灭菌的区别（三）、灭菌的方法：1加热灭菌2过滤灭菌3照射灭菌4化学药剂灭菌二、灭菌方法（一）、培养基的高压灭菌方法1灭菌步骤（1）加水（2）

31、装锅（3）盖严锅盖（4）加热（5）排放气体（6）升压保温（7）降压排气（8）出锅冷却2灭菌时间的调整（二）、接种工具、植物材料的灭菌方法1接种工具（剪刀、镊子、解剖针）的灭菌先在95%的酒精中沾一下，置于酒精灯火燃上灼烧灭菌使用2玻璃器皿的灭菌置于电烘箱中，160180维持1.52小时3植物材料的灭菌流水冲洗植物材料75%的酒精中灭菌1060秒0.1%升汞浸315分钟无菌水冲洗三次以上（三）、不耐热物质的灭菌方法一些不耐热的物质，如赤霉素、玉米素、脱落酸和某些维生素，不能用高压灭菌处理，通常采用过滤灭菌方法其常采用过滤灭菌（四）、一些物体表面的灭菌方法一些物体的表面，如桌面、墙面、双手、植物材

32、料表面等，可用70的酒精反复涂擦灭菌，1-2的来苏儿溶液以及025-1的新洁尔灭也可以（五）、接种室和超净工作台的灭菌方法1熏蒸灭菌2紫外线灭菌三、无菌接种技术（一）、无菌接种的含义（二）、无菌接种的步骤1接种室灭菌2超净工作台的灭菌3人员准备4接种工具的灭菌5无菌接种：（1）植物材料灭菌（2）接种（3）封口第二节培养和驯化一、 培养的概念和方法（一）、培养的概念（二）、培养的方法1固体培养法：1）优点2）缺点2液体培养法：1）优点2）缺点二、培养的步骤（一）、初代培养1顶芽和腋芽的发育2不定芽的发育3体细胞胚状体的发育4初代培养外殖体的褐变原因及其控制措施（二）、继代培养1方法：切割茎段、分

33、离芽丛、分离胚状体、分离原球茎等2继代培养时材料的玻璃化原因及对策三、试管苗的驯化移栽1移栽用的基质和容器基质：河砂、草炭土、腐殖土容器：栽培容器可用6X 6em-10XlOcm的软塑料钵，也可用育苗盘2移栽前的练苗3移栽和幼苗的管理（1）保持小苗的水分供需平衡（2）防止菌类滋生（3）一定的温、光条件（4）保持基质适当的通气性课目第五讲试管苗增殖率的计算及营养器官的培养目 的要 求熟练掌握试管苗增殖率的计算方法；基本掌握营养器官的培养方法重 点难 点难点为试管苗增殖率的计算，重点为营养器官的培养。主要内容：第一部分操作技术（后一节）第三节试管苗增殖率的计算试管苗年增殖率的计算公式YXnY:年增

34、殖率（瓶）X:每周期增殖的倍数n：一年增殖的周期数365/增殖周期增殖周期：指从接种开始到再次接种所需要的天数增殖倍数：每个增殖周期中一瓶能接种多少瓶注：上述公试表明，增殖周期越短，增殖倍数越高，年增殖率就更高。只要每年能增殖810次，每次能增殖34倍以上，就可满足快速繁殖的要求。例如：现有100瓶试管苗，每瓶10株，每次增殖3倍，每次45天，1年可增殖8次，年底可增殖为多少瓶与多少苗呢？答案为65.6万瓶，6560株苗第二部分植物器官的培养（其中第一节）第一节营养器官的培养一、离体根的培养（一）、意义：不仅是研究根系生理生化的优良材料，而且也能得再生植株。（二）、培养方法1培养基的选择：多为

35、无机离子浓度低的White培养基，其他培养基如MS，B5，等也可采用，但必须将其浓度稀释到23或12。2无性系的建立：种子萌发切取1.2cm 根尖接种于培养基上待侧根长出一周后再切取1.2cm侧根根尖接种于培养基上继代培养几次后建立起根尖的无性系根段培养愈伤组织分化出芽苗3培养条件：2527，暗光二、离体茎的培养（一）、茎尖培养1茎尖培养的概念2材料处理：（1）取材（2）消毒（3）接种3培养方法：（1）培养基的选择：培养基选择的依据（2）培养条件：每天光照16h，光照强度15003000Lx，温度252，一个月或一个月以后进行继代培养。（3）继代培养（4）生根培养3驯化移栽：（1）炼苗：不开封

36、口23天，打开封口23天。（2）移栽：（二）、茎段培养1材料处理：（1）取材：取生长健壮无病虫的幼嫩枝条或鳞茎盘，若是木本，取当年生嫩枝或一年生枝条，剪去叶片，剪成3-4cm的小段，在自来水中冲洗1-3h。（2）消毒：在无菌条件下用75酒精灭菌30-60s，再用体积为0.1升的汞浸泡3-8min，或用饱和漂白粉浸泡10-20min，因材料老嫩和蜡质多少而定时间。最后用无菌水冲洗数次，以备接种。（3）接种2培养方法：（1）培养基的选择：MS培养基，附加3%的蔗糖、生长素类和细胞分裂素类物质，如BA、KT等。（2）培养条件：与茎尖培养相似（3）继代培养（4）生根培养：采用1/2MS培养基，附加生长

37、素类物质，最好加入一定量的活性炭（0.3%）3驯化移栽：与茎尖培养基本相似，参考茎尖培养。课目第六讲离体叶的培养及生殖器官的培养目 的要 求熟练掌握离体叶片的培养步骤，花器培培养和种子培养的方法；一般掌握胚胎培养的类型与各自的注意事项。重 点难 点离体叶片的培养步骤，胚胎培养的类型与各自的注意事项。主要内容：上接第一节三、离体叶的培养离体叶培养包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶在内的叶组织的无菌培养。它大多经脱分化形成愈伤组织，再由后者分化出茎和根。（一）、叶的结构：叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶（二）、叶片的培养方法由离体叶片再生成植株的方式有二种：一种是先诱导形成愈伤组织，再由愈伤组织分化

38、出芽和根，另一种是由外殖体直接分化出苗，其中第一种方式最为常见。离体叶片的培养技术如下：1材料选择：选取植物幼嫩叶片，切割成适当大小（23cm），置于流水下冲洗24小时。附属物较多的叶片，可先用洗衣粉水浸泡510min，再用流水冲洗。2消毒与接种：70%酒精浸泡1030s，0.1%升汞浸35min，无菌水冲洗3次，切割成0.5cm或1cm见方，接入MS培养基中（附加BA13mg/L,NAA0.25-1mg/L）。3培养条件：温度：252；光照强度：15003000lx；光照时间1012h。半个月到1个月后，形成愈伤组织，然后转移到分化培养基上（附加BA2mg/L）,1个月后，转移到生根培养基上

39、（附加NAA0.5-1mg/L）,从而使其发育为完整植株。第二节生殖器官的培养一、 花器官和种子的培养（一）、花蕾培养1取材、消毒和接种切取未开放的花蕾，用75%酒精浸30s，0.1%升汞浸35min，无菌水冲洗数次，再将花梗插入培养基中。2培养基和培养条件1）培养基：MS和B5培养基，附加BA1-2mg/L、NAA0.5-1mg/L 2) 培养条件：温度：252；光强：15003000lx；光照时间：1012h（二）、种子培养1种子灭菌种皮厚或不饱满的种子，宜用01升汞消毒10-20min。幼嫩的或发育不全的种子，宜用饱和漂白粉消毒15-30min。若种子上有绒毛或蜡质，应先用95酒精或吐温

40、40处理，提高消毒效果。对壳厚难萌发的种子，可去壳培养。2培养基若以促进种子萌发为目的种子培养，培养基的成分要求较简单，可不加或少加生长激素。当然，对某些发育不全的无胚乳的种子培养，应提供适当的生长激素。种子培养的糖浓度可稍低，一般1-3。3接种培养种子培养的接种较容易，把种子按每瓶3-5粒放人培养瓶中，均匀排列，放在20-28的条件下培养，1000-20001x光强，每天光照10h。（三）、胚胎培养1种子培养的意义 1）克服远缘杂种的不育性；2）使胚发育不全的植物获得后代；3）缩短育种年限，提高育种效率。2成熟胚的培养成熟胚是指子叶期以后的胚。成熟或未成熟的种子，经70%酒精浸数秒钟，然后用

41、无菌水冲洗34次，剖出胚，最后接种在MS培养基中（附加一定量的蔗糖）。3幼胚培养幼胚是指子叶期之前的胚。培养方法与步骤与成熟胚基本相同。1）幼胚培养再生成幼苗的方式A幼胚继续发育至成熟胚，再分化出芽苗；B幼胚不再发育，直接萌发形成幼苗C幼胚形成愈伤组织，再分化成胚状体或分化成芽苗（多数如此）2）影响培养成功的因素A培养基的渗透压增加蔗糖含量B生长调节剂C天然提取物质D光温条件温度一般为2530；光暗交替促进幼胚的分化（四）简单介绍胚株和胚乳的培养胚乳是由两个单倍的极核和一个单倍的精子结合而成的3倍体组织。由它可获得无子结实的3倍体植株，进而可将它加倍成6倍体植株。取授粉4-8d后的幼果，常规消

42、毒后，在无菌条件下切开果实，取出种子，小心分离出胚乳。接种在培养基上，可用MS、White等，加入2，4-D或NAA05-20mg/L，BAO1-1OmgL。在25-27和黑暗条件或散射光下培养，约6-lOd胚乳开始膨大，再培养形成愈伤组织这时应转到分化培养基上培养，分化培养基可加入05-30mgL的BA及少量的NAA。待愈伤组织长出芽后，切下不定芽，插人生根培养基中，光下培养10-15d，切口处可长出白色的不定根。课目第七讲培育无病毒苗木的意义及方法目 的要 求初步掌握植物无病毒苗培育的意义；深入掌握热处理和微茎尖脱毒的原理及方法。 重 点难 点热处理和微茎尖脱毒的原理及方法。主要内容第一节

43、培育无病毒苗木在生产上的意义一、无病毒苗木的概念是指不含该植物主要的危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现为阴性反应的苗木二、 培育无病毒苗木的意义1 去除病毒危害，提高无性繁殖作物的产量和品质。2 减少环境污染，有利于保护环境。第二节培育无病毒苗木的方法一、热处理脱毒（一）、热处理脱毒的发现及原理1889年印度尼西亚爪畦人发现，患枯萎病的甘蔗(现证明为病毒病)，放在50-52的热水中保持30min，甘蔗就可去病生长良好。自1954年Kassanis用热处理防治马铃薯卷叶病以后，这一技术即被用于防治许多植物的病毒病。热处理又称温治疗法(theomtherapy)，其原理是当植物组织处于

44、高于正常温度的环境中时，组织内部的病毒受热之后部分或全部钝化，但寄主植物的组织很少或不会受到伤害。在高温下，不能生成或生成病毒很少，以致病毒含量不断降低，这样持续一段时间，病毒自行消灭，从而达到脱毒的目的。（二）、热处理脱毒的方法1温汤浸渍处理适用范围：适用于休眠器官方法：将植物材料浸在50的温水中10分钟至数小时。特点：简单易行，但易使材料受伤。2热空气处理适用范围：热空气对活跃生长的茎尖效果较好。方法：将生长的盆栽植物移入温热治疗室内，3540的热空气处理几十分钟至数月。特点：简单易行，但易使材料受伤。注：热处理脱毒的主李缺陷：不能脱除所有的病毒，因此热处理应与其它方法结合使用，脱毒效果才

45、好。二、微茎尖培养脱毒1微茎尖培养脱毒的原理感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低，生长点(约0.11.0mm区域)则几乎不含或含病毒很少。这是因为分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度。2微茎尖培养的培养基1）基本培养基：White、Morel或MS2）激素：生长素与细胞分裂素浓度适当的提高（0.10.5mg/L），生长素中宜用NAA或IBA，细胞分裂素可用KT或BA。有时茎尖培养添加活性炭。3培养方法1）外植体预处理将带幼叶的茎尖，置于75%的酒精中浸数秒钟上（叶片包被紧密的顶芽，

46、如菊花、兰花等）或置于0.1%的次氯酸钠溶液中浸510分钟（叶片包被松散的顶芽，如香石竹、大蒜和马铃薯等）2）茎尖的剖离与接种左手持镊子，按住处殖体；右手持解剖针，将茎尖处面的较大的幼叶去除，仅留12个叶原基。然后迅速将微茎尖接种在培养基上。注：解剖和接种要快，经防茎尖褐化死亡。3）培养条件温度：22左右；光强：20003000Lx；光照时间：每天16h；培养时间：一般需要数月。以后的继代培养和生根培养与一般的器官培养相同。4影响微茎尖培养成活的因素1）外植体大小外植体越大，产生再生植株的机会也就越大，但脱毒效果不好，而外植体越小脱毒效果越好，但不容易成活。2）培养条件较高的温度和充足光照有利

47、于茎尖的培养。3）外殖体的生理状态茎尖最好要由活跃生长的芽上切取，在香石竹和菊花中，培养顶芽茎尖比培养腋芽茎尖效果好。但在草莓中，二者没什么差别。取芽的时间也很重要，一般选作萌动期较好。否则采用某种适当的处理、打破休眠才能进行。三、其它的脱毒方法 1愈伤组织培养脱毒1）方法：其它外殖体诱导愈伤组织，可得到部分无毒苗。2）原理：病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度；有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。3）缺点：愈伤组织脱毒的缺陷是植株遗传性不稳定，可能会产生变异植株，并且一些作物的愈伤组织尚不能产生再生植株。2茎尖微体嫁接（MGST）脱毒1）含义：是指将无病毒茎尖（0.141.0mm,具13个叶原

48、基）嫁接在培养基上培养的实生砧木上，以获得脱毒苗木的技术。适用于茎尖培养脱毒生根困难，不能获得完整植株的植物，如桃、苹果、柑橘等。2）茎尖来源：成年无病毒植物、温室培养的植物、热处理植物和脱毒试管苗等。其中普遍采用热处理茎尖。3）方法：A培养砧木B准备微茎尖C嫁接D嫁接苗培养E移栽3花药培养脱毒4化学药物脱毒许多化学药品(包括嘌呤、嘧啶类似物、氨基酸、抗菌素等)对离体组织和原生质体具有脱毒效果。常用的药品有：8-氮鸟嘌呤、2-硫脲嘧啶、杀稻瘟抗菌素、放线菌素D、庆大霉素等。例如，将100ug2-硫脲嘧啶加入培养基可除去烟草愈伤组织中的PVY (马铃薯病毒)。课目第八讲无病毒苗木的鉴定、繁殖、保

49、存和利用目 的要 求深入掌握无病毒苗木的鉴定原理、方法和优缺点；基本掌握无病毒苗木的繁殖、保存和利用。 重 点难 点无病毒苗木的鉴定原理、方法和优缺点主要内容第三节无病毒苗木的鉴定方法一、指示植物鉴定法1含义：利用病毒在其它植物（指示植物）上产生特定症状作为鉴别病毒存在与否及种类的方法，称为指示植物法，适用于草本和木本植物。2优点：灵敏、准确、可靠；操作简便。3对指标植物的基本要求1）根据不同的病毒，选择合适的指示植物；2）容易栽培；3）对要鉴别的病毒第敏感，易接种，易感染，症状显著。4鉴定方法（以草本植物为例，在防蚜虫温室内进行）1）汁液涂抹法A从被鉴定的无毒苗木上取13克幼叶；B将幼叶放在

50、研钵（加10毫升水及少量磷酸缓冲液）中研碎；C用纱布过滤，取滤液，在滤液中加入少量金钢砂（500600目）；D用棉球蘸取上述滤液在指示植物的叶面上涂抹23次，使病毒侵入叶片；E将指示植物保温1525培养，26天后可出现病斑。2）小叶嫁接法取待无病毒植物的小叶，嫁接到指示植物上，嫁接后一般1525天出现症状，由此可鉴别病毒有否及种类（见下图）二、抗血清鉴定法抗血清法是鉴定植物病毒中最有用的方法。1原理与含义病毒（包括植物病毒）侵入动物体后，动物血清中会产生抗体，含抗体的血清称为抗血清。病毒即为抗源。抗源与抗体能发生特异性反应（血清学反应），根据反应症状可鉴别病毒存在与否和种类这种鉴定方法就称为抗血清法。2鉴定方法