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1、疫苗分离纯化技术宫喜魁为什么？疫苗生产过程中不可避免的有一些杂质，如细菌菌体、 细胞碎片、血清、杂蛋白、核酸等。为了得到具有高纯度、无菌性和安全性的疫苗，要除 去这些杂质。有哪些？传统疫苗的分离纯化方法连续离心、沉淀、过滤或萃取等物理、化学方法。我国 采用酸沉淀法生产百日咳灭活疫苗，就是由菌体培养液 加甲醛杀菌灭活后，用HC1调pH至3.8牛4,静置十几小 时自然沉淀出菌体和可溶性抗原，再离心、洗涤而得。现驚驚隘析、离子交换层析、亲和层析等怎么样?传统纯化分离技术盐析盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。如：加浓（NH4）2SO4使蛋白质凝聚的过程。盐析可以通过各种
2、物质的溶解度的不同进行分离，但是 溶解度相同或差异不大很难进行分离。Myoglobin in diluto bufferSeveral daysAddition of(NH4)2SO4Q结晶Myoglobin crystalsMyoglobin in3 m (NH4)2SO4, pH 7酸沉淀酸沉淀是指溶液的ph改变, 度降低，从而凝聚沉淀。过酸容易使得蛋白质变性。使得溶液中某些物质的溶解超速离心蔗糖、CsCl、KBr密度梯度离心 处理样品量太少、操作复杂、难以控制采用此技术纯化嗜血流感细菌(Haemophilus influenzae)外膜脂蛋白P6，先连续离心(9ooog)收获菌 体超声破
3、碎，再高速离心(21OOOg)沉淀出肽聚糖和含 有P6的未破碎细胞，最后超速离心(looooog)除去肽聚 糖，加压透析得到目的抗原组分。膜过滤膜过滤是一种与膜孔径大小相关的筛分过程，以膜 两侧的压力差为驱动力，以膜为过滤介质，在一定 的压力下，当原液流过膜表面时，膜表面密布的许 多细小的微孔只允许水及小分子物质通过而成为透 过液，而原报中体积大于膜表面微孔径的物质则被 截留在月莫的途裱侧，成另冰缩液，因而实现对原液 的分离和浓缩的目的。分子筛层析（凝胶过滤层析） 使用有一定大小孔隙的凝胶 作层析介质（如葡聚糖凝胶、 琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝 胶等），利用凝胶颗粒对分子 量和形状不同的物质进行
4、分 离的层析技术。由于各种分 子的大小、形状不同，扩散 到凝胶孔隙内的速度不同， 因而通过层析柱的快慢不同 而分离。(1)小 分、 子子胶 颗分X O0000 ODOOpcfoo oooo（5）擬胶层析的原理0 00 00 I0 0 i 000 J 00 I 9 00000 /QQGGO. ?V7擬胶层析的原理离子交换层析固定相是离子交换剂的层析分离技术。样品中待分 离的溶质离子，与固定相上所结合的离子交换，不 同的溶质离子与离子交换剂上离子化的基团的亲和 力和结合条件不同，洗脱液流过时，样品中的离子 按结合力的弱强先后洗脱。在生物化学和分子生物 学领域此法常用于分离蛋白质、核酸等生物大分子。
5、亲和层析 利用分子与其配体间特殊的、欲纯化的线白质（如肚肋索受体）5)可逆性的亲和结合作用而进行 分离的一种层析技术。可以选 用生物化学、免疫化学或其他 结构上吻合等亲和作用而设计 的各种层析分离方法。如用寡 月氧胸昔酸-纤维素分离纯化 信使核糖核酸；用DNA-纤维 素分离依赖DNA的DNA聚合 酶；用琼脂糖抗体制剂分离 抗原；用金属螯合柱分离带有 成串组氨酸标签的重组蛋白质 等。离心V田O (非洲绿猴肾细胞株系)细胞培养液,两步深层过滤进一步净化超滤Grand/FlexStand中空纤维超滤系统和柱.75ONMWCO 组分分离(Group Separation)Sepharose 6 Fast Flow穿透式”阴离子交换层析(AIEX Chromatography)Q Sepharose1 6 Fast Flow超滤浓缩FlexStand中空纤维超滤系统和柱,75ONMWC纯化过的人流感病毒
疫苗分离纯化技术
