地中海贫血的遗传筛查和产前诊断

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1、a和卩地中海贫血的it传舞查和产前诊新Genetic Screening and Prenatal Diagnosis fora and 卩 thalassemia in Guangdongizleizhou 2006 Decen±)er 07南方医科大学，医学遗传学教研宣南方医阮产前诊断和遗传病诊断技术中心Southern Medical University地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一中国南方a和0地贫的人群携带率地区携带率(%)a地贫P地贫广东8.532.54广西14.956.78四川1.922.18贵州4.72台湾4.201.10香港5.023.41b东珠海湛江南广

2、东省五个地区地中海贫血遗传流行病学调查Journal of Clinical Pathology, 2004; 57(5):517-22.广东省人群中a地贫的携带者频率遗传变异Allele数 %a地贫染色体(sea) Deletion (-a3-7) Deletion (-a") Deletion (-acs) Mutation4788.532324141743.10530951001820.042004100210.0210.022004(thai) Deletion (-aQS) Mutation (11-1) Deletion a2CD118 (+TCA) -a-gene de

3、letion Undetermined广东省人群中0地贫的携带者频率遗传变异Allele 数%0地贫染色体1982.54Deletion of CTTT at codons 41-42720.92C->T at position 654 in IVS2480.62A->G at nucleotide-28330.42G->A at codon 2610013A->T at codon 1780.09Insertion of A atcodons71-7270.09G->T at codon 4370.09A->G at nucleotide-2940.05I

4、nsertion of A atcodons27-284005p-gene deletion1001Undetermined30.06广东省年富凤险幺姬狈测数据(95%CI丿重型或中间型0地贫： 645(480, 835) Barfs胎儿水肿综合征：1714 (1498, 1945)血红蛋白(Hb) H 病： 1677 (1467, 1901)广州市主要出生缺陷的发生率(1998-2001)排序出生缺陷分析例数发生频率(/10,0 00)1先天性心脏病26019.662重型01地贫20815.733多指20015.124肢体短缩1118.395唇裂/腭裂1098.24rw I重型Ot地贫:胎儿

5、水肿综合征早产死胎或出生前后死亡可导致严重产科并发症无理想治疗方法地贫纯合子：致死性出生缺陷重型卩地贫出生后1年内发病多于未成年前因严重贫血而夭折 输血和去铁治疗可维持，代价昂贵研究地中海贫血的意义重症地贫患儿的出生是世界公认的公共卫生问题通过产前诊断阻止重症患儿出生是首选预防措施 WHO优先推荐在发展中国家实施预防的遗传性疾病 预防地贫是中国南方高发区减少出生缺陷的战略需求应用于地贫控制的人群卸查策略基于医院水平的预防计划 基于社区水平的预防计划 扩展的家系筛查计划中国南方地贫人群预防的管个飾瞻性舞查计划时间:1993.01,012003.12.31基于医院的预防计划：广州市妇婴医院 占广州

6、市出生数的1 /17策略：孕期杂合子筛查结合现行的孕期健康产科检查实施被检对象（婚前或孕中期）血液学分析（MCVl，Hb A2变化）I 排除地贫遗传咨询二双亲基因分析胎儿产前诊断地贫携带者遗传咨询，配偶检查血液学分析（MCVl HbA2变化）IJI地贫携带者排除地贫地贫携带者卸查及产前诊断流程筛查结果异常血红蛋匂節查结果异常血红蛋白孕妇阳性病例 配偶数总数频率%0Hb E46349091Hb H21223043Hb CS153180.34Hb G*141150.28Hb Q*13215028Hb N*12113024Hb D*101110.20HB New York808015Total139

7、13152283(00T)（8-96）(OP(厶P(乙g)（£）(厶g)8£乙8乙98TS8S99DTT089T09666T（00T）（00T）（8乙）(6-T)(os)（8-£）(8-g)8L1乙T8LTZL1£9乙g乙方乙£9866T(00T)（£"98）（9乙）(厶P(乙g)（9£）(厶GL8T0TLTS89Tog乙TOD686"乙6£匸L66T（00T）©68)（9乙）(厶Pd)（9飞）(厶G8LTST86TT8TS8S方汕09方方厶 66P966T（00T）（2*88）(&#

8、163;£)(6-T)W)（9飞）(8-g)L9T2TLLT乙仇L乙乙T9STSLTL乙06£S66T（00T）（6-88）(T-S)(6P(£S)（9飞）(8-g)89T688T992乙方L131L 9"方66T（9厶8）（£乙6）（6乙）（£乙）（厶£）（乙£）(8-g)LST0T8£T6乙T乙£乙0S££6£89686££661(%)(%)（%）总时(%)(%)(%)湮來Dd/»（%）尊祂尊科D尊Wl碉D旺¥种華鄭淇W

9、43谟M审【诬3脏尊華鄭酱转身陳井尋勢E002-E661觀多酋瞬* “ J(conf d)年份筛查 孕妇数广州总 孕妇数筛查 丈夫数筛查发现的 阳性孕妇数检阳；a地贫 (%)测 出 性夫妇P地贫 (%)的 数岬 地贫()完成的诊断a地贫(%)产前 数卩地贫(沟a地贫(%)P地贫 (%)200044928181741825617221716217(5.7)(3.8)(5.0)(1.7)(3.8)(100)(100)200145218015241125416417812178(5.6)(3.6)(4.1)(1.9)(2.9)(100)(100)200246958066741526016316811

10、168(5.6)(3.4)(3.9)(1.9)(2.7)(100)(100)200341248639337222715215613156(5.5)(3.6)(4.0)(1.6)(3.5)(100)(100)Total492218607584503280417831988313118782(5.7)(3.6)(4.4)(1.8)(2.9)(95.8)(98.8)产前诊断：187例a地贫82例卩地贫1234筛查发现的阳性孕妇或阳性夫妇 a地贫勺 P地贫a地贫B地贫5.7%3.6%4.4%1.8%pauags se-dnoo 2SV0 -£01广州申如婴医隨1993-2003卸查计划的结果

11、产箭诊断结果地中海贫血的产前诊断胎儿取样技术 DNA诊断技术a 地贫的诊断B 地贫的诊断DNA诊断技术多重PCR （ multiplex PCR）等位基因特异性性寡核昔酸杂交（ASO）反向点杂交（RDB）变性高效液相色谱（DHPLC）多重引物延伸 DHPLC （multiplex PE/DHPLC）用于(X和B地贫产前诊新的方(1993-2003)年份主要诊断技术产前诊断例数总数a地贫B地贫PNDs1993 一 2003胎儿血分析1261261999 一 2003超声诊断6161(DNA: Gap-PCR)19931-199312DNA: AS0 杂交771994 - 2002DNA:反向点杂

12、交707020031-200312PE/DHPLC66BarfsAFA2originPatient3Patient2FetalAdultDiagnosisPatient 1Barfs hydrops fetalisPatient 2Hb H diseasePatient 3a thal trait於儿朋带血血红蚕匂电冰图谱本卖殓童应用的主要技术应用对象Gap-PCRa地贫常见突变RDBa地贫/ 0地贫半变性DHPLC*a地贫/。地贫SBE/FP*B地贫常见突变PE/DHPLC。地贫5种常见突变q-链ELISA assaya地贫一sea缺失突变¥轸国聲身両諮回幺身疇硏D净普qwq”oz

13、QMOTq”oqmot-uoiiapa （z£ Q ） uoijQpa （乙 p q -） uoiiaiaa（V3S-）C3mvRPl>采用Gap-PCR进行“sea优地贫基因缺失的基因分憂M 纯合子杂合子正常 MFamily 1 Family 2 Family3M N P B Fa Mo Fe Fa Mo Fe Fa Mo Fe NormalMutantNormal Heterozygote Homozygote三个a地贫家庭的产侖诊断结系与美国商嬴化UB1渕利盒的对此研老卜UBl Kit. USA1 SGI System. IM方医大1图3-4侵用他I KIT. USA和S

14、G= 57stern对样品宦淤的比较Figure 3一4Ccaparison of deteiminatiion Ucir；g UBI kit sr.d 3GI syztem注册号：粵食药监械（准）字2006第2400333号珠海经济#区海泰生物制药有艰公司:你单住生产的东南亚型x 地中海贫血Zeta链蛋白检测试列盒.经审查.符合医疗器域产品市场准入規定，准许注册 自批准之日起有效期至二OO年匕月十二日止°中华人民共和国PEOPLES REPUBLIC Ol CHINA 医疗器械注册证 REGIS I RAI ION CERTIFICATE FOR MFDICAI DEVICE特此证

15、明。局2'的6年7 ；推附件：法疗器械注册登记長中国南方B地贫灾变的变异类矍和住置TranscriptionFrameshift:RNA splicingNonsense codonInitiator codonDouble heterozygote中国南方B地贫灾变的变异类矍和住置DHPLC分析人B珠妥匂基因: 三个PCR片段扩增5 UTR IVS1IVS23， UTRA B Fragment size: A = 453 bpB = 364 bpC = 423 bp One set of PCR conditionsfcjDHPLC的三种操作栈式非变性分析(50 °C )双

16、链DNA大小测定半变性分析(52-78 °C ) 突变鉴定全变性分析(78-80 °C ) Oligo和RNA分析PCR产物的半变性分析(52-78 °C )Reference SamplesMutantHeteroduplexesHomoduplexes+G CIIheatcoolA C G TA T G CVVIIDouble-stranded DNA Fragmento 9 s e 6® e o ©PtiosphaLe+ t temperature JCH2CH3Trithyl AmmoniumPartially Single-stran

17、ded DNA FragmentFragment A765432 1098765432109575 5432101222222 221111111111 -CXE) 2UU代qssqa一 060602 一 060516060530- 080449060524- 060544 一 060546 一 080651 一 060635060637 一 060536DHPLC检测B地贫吏变的结果Time (Minutes)525046464442403s363432302826242220181e14121086420txE) 2UU 傀qssqa一 0605110607037 一 0607044 -0

18、6060510607045 一 0607046 一 06070470606050 一 08080270608023DHPLC检测B地贫吏变的结果Fragment C2423-222120191817-16154 A141312-1110CAUJ) QuueqssqqTime (Minutes)DHPLC检测B地贫吏变的结果GenotypeFatherCDs4142(CTTT)/NMotherIVS-2-654 (C-T) / NFetusCDs41-42 / IVS-2-654Normal controlN / NRDB analysis: application to rapid prena

19、tal diagnosis for eight pthalassaemia mutations83例卩地贫富凤险於儿产前诊断结果诊断结果基因型例数正常30杂合子(total)35CDs 41-42(-TCTT)/ N14IVS-2-654(C>T) /N8-28 (A>G)/ N5CD17 (A>T)/ N3CD26 (G>A)/ N2-29 (A>G)/ N1CDs27-28 (+C) / N1Unknown /N or Normal1(confd)诊断结果基因型例数纯合子或双重杂合子(总数)18CDs 41-42(-TCTT)/IVS-2-654(C>T

20、)6CDs 41-42(-TCTT)/-28 (A>G)4CDs 41-42(-TCTT)/CD17 (A>T)2IVS-2-654(C>T)/CD17 (A>T)2CDs 41-42(-TCTT)/CDs 41-42(-TCTT)1CDs 41-42(-TCTT)/CDs 27-28(+C)1IVS-2-654(C>T)/CDs71-72 (+A)1IVS-2-654(C>T)/ CD43(G>T)1总数83266例富风险妹振的产前诊新结果胎儿诊断产前诊断例数总数(%)a地贫卩地贫正常413069 (25.6)携带者9235125 (46.3)受累胎

21、儿*541872 (26.7)胎儿流产213 (1.11)误诊000.0总数(%)187 (693)83 (30.7)270 (100)* Three Hb H disease involved49221例被筛查的孕妇4503 (98.2%)84 (1. 8%)4222例非风险妊娠4587 (9. 3%)地贫特征/病例 2804 (5.7%) oc地贫 1783 (3,%)。地贫139例其他异常Hb个体44495例正常表型个体例配偶未接受筛查281(6. 2%)例高风险妊娠 198重型a地贫 83重型卩地長281 (100%)例高风险妊娠孕妇 进入爾随访269 （95. 7%） 孕妇实施产前诊

22、断 187 a地贫 83 。地贫（1双胞胎）72 （26.7%）孕妇要求终止妊娠 54重型a地贫69重型地贫被预防 51水肿胎 18重型卩地贫（1双胞胎）12孕妇不接受产前诊断2例水肿胎出生197例孕妇继续妊娠 18重型。地贫（1双胞胎）广东省oc和P地中海贫血预防模式研究现场:广东省四会市时间：2001.1-2005.12 人口： 40万目标：为制定2006年广东省全境地贫预防计划提供方法和经验产前遗传学的临床和公共卫生问题1利用有效的公共卫生教育资源，首先使医生 和公众了解更多的地贫知识和知晓选择遗传 服务及其对待产前诊断的态度是我们面临的一个重要课题2为满足大规模预防工作的需要，我们须大

23、力 加强专科医生，遗传咨询师，及其他相关专业 人员的培训工作；(confd)3预防监测系统建立过程中，要特别注重转诊、 病例登记、实验室质量控制的把关；4.政府在组织、基础建设、制定政策法规和行 政管理上的主导作用是推动预防计划的关键 因耒。结论我们建立的基于医院水平的孕妇人群的筛查计划可有效的降低a和卩地贫的出生率本计划中建立的遗传服务平台可扩展到我国其它高发地区开展a和卩地贫的监测和预防敷谢Guangzhou Maternal and Neonatal Hospital (GZMNHI)广州市妇婴医院Liao Canz Li Jianz Huang Yiningz Li QiumingzFeng Qionz Zhong Huizhz Cui Yongyi fFirst Military Medical UnivwsBty Southern Medical Uniwirsify第一军医大学 j 南方医科大学Zeng Rongz Mo Qiuhuaz Li LiyanA Hua Liang，Zhang Jizengz Jia Shiqi f Luo ChenGuangzhou Municipal Health Bureau广州市审卫生局Zhang Li