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1、缓冲液 AP1 和 AP3/E 可能在储藏过程中沉淀， 使用前检查， 必要时 65 摄氏度预热溶解（注 意加完乙醇后就不能再加热） 缓冲液 APW 和 AP3/E 第一次使用时要加入适量乙醇（ 96%-100% 1. 研磨前擦拭工作台。 2. 研钵里加入液氮， 预冷。研磨材料，加 3-5 次材料，充分研磨。液氮预冷离心管 后 加入材料，加至 1/2 或 2/3 处。若暂时不加缓冲液，就放入至液氮冷冻，用时拿出。拿 出后立即轻轻开盖，防止材料喷出。 3. 力口入 440 I 缓冲液 AP1 （必须为预热好的），。盖好后使劲颠倒混匀材料和缓冲液。 4. 加 4 IRNase 后，剧烈涡旋，使管底的
2、材料也与液体混合。 5. 将混合物在 65 摄氏度下温浴 15min,每 5min 中上下轻轻颠倒试管 2-3 次。准备冰盒。 6. 加入 130 l 缓冲液 AP2,上下颠倒混匀，在冰上放置 5Min。 7. 14000rpm/min 离心 5min. 8. 仔细缓慢将上层液体 （500 l ） 置于 QIAshredder Mini Spin Colum （柱） 中 （紫色）。 14000rpm/min 离心 2min. 9. 将上步中的滤液（450 l）缓慢吸至一新的离心管（自己准备的 Axygen 离心管）中， 注意别吸到管底细胞碎片小球 。 10. 在溶解清液中仔细缓慢加入倍体积（6
3、75 l ）的缓冲液 AP3/E。一定要仔细，慢慢 抽吸至两者充分混匀。 11. 将上步中 650 l 混合液（包括形成的沉淀）加入 Dneasy Mini Spin Colum （柱）中（白 色），其余的混合液留着，用于再次抽提。 8000rpm/min （一般用 14000rpm/min ）离心 1Min，丢弃废液。准备灭菌的去离子水于 65 摄氏度水浴锅中预热。 12. 剩余的混合液继续加入上一步的 Dneasy Mini Spin Colum （柱）中， 8000rpm/min （一 般用 14000rpm/min ）离心 1Min，丢弃废液和收集管。 13. 将 Dneasy Min
4、i Spin Colum （柱）下置试剂盒提供的 2ml 离心管（取时手不要伸进去， 隔着塑封袋捏出离心管）。加入 500 l 缓冲液 AW 放置 3-5min， 8000rpm/min （般 用 14000rpm/min ）离心 1Min,丢弃废液，收集管再用一次。 缓冲液 AP1 和 AP3/E 可能在储藏过程中沉淀， 使用前检查， 必要时 65 摄氏度预热溶解（注 14. Dneasy Mini Spin Colum （柱）中加入 500 l 缓冲液 AW，放置 3-5min， 14000rpm/min 离心 3Min,丢弃废液，收集管再用一次。 15. Dneasy Mini Spin Colum （柱）中加入 500 l 无水乙醇， 放置 3-5min , 14000rpm/min 离心 3Min,丢弃废液和收集管 16. 在 Dneasy Mini Spin Colum （柱）下置或 2ml 离心管（自己准备的 Axygen 离心管）, 吸取 100 l 灭菌的去离子水（必须为预热的）加到 Dneasy 膜上。65 摄氏度水浴 5min。 8000rpm/min （一般用 14000rpm/min ）离心 1min 洗提 DNA
QIAGEN试剂盒提取DNA步骤
