中草药消毒剂杀菌效果的研究

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1、中草药消毒剂杀菌效果的研究中国畜牧兽医2010年第37卷第11期经验交流?227?中草药消毒剂杀菌效果的研究王金和,边传周,金登宇,陈益(郑州牧业工程高等专科学校,郑州450011)摘要:为研究中草药消毒剂的杀菌效果,选取大黄,艾叶等中草药在实验室制备了复方中草药消毒剂,并对其进行了定量杀菌试验,l床现场消毒试验等研究.结果表明,以大黄,艾叶等中草药组方的中草药消毒剂对金黄色葡萄球菌作用】0rain,杀灭率达99.9,作用30min,可达100;对大肠杆菌作用10min以上,杀灭率达100;对枯草芽孢杆菌作用15min以上杀灭率达99.9;表面现场消毒对细菌杀灭率达99.96;54温箱中放置1

2、4d后,杀菌效果基本不变;有机物的存在对消毒效果有一定影响.结果提示中草药消毒剂用于养殖场消毒稳定有效,并可进行相关消毒剂的开发.关键词:中草药消毒剂;金黄色葡萄球菌;大肠杆菌;枯草芽孢杆菌;杀菌效果中图分类号:S53.75文献标识码:B文章编号:16717236(201O)11022703临床消毒剂种类很多,常用的兽用消毒药主要是酚,醛,醇,酸,碱,氯制剂,碘制剂,重金属盐类,表面活性剂等类型消毒剂.这些消毒剂不同程度地存在污染环境,药物残留,产生抗药性,部分属于原浆毒等副作用,制约了它们的广泛应用(高慧等,2002).而中草药消毒剂对环境无污染,无刺激性和安全,符合研制和开发环保消毒剂的发

3、展趋势.胡晓蕙等(2002)对一种主要由野菊花,厚朴等制成的水提剂预防上呼吸道感染进行观察,结果表明,空气中的病原微生物,可降低上呼吸道感染发病率;孟庆增等(1998)用蟾酥,苦参,蛇床子等中药提取液配制成蟾酥复方消毒剂,在实验室对其杀灭微生物效果进行了试验观察,结果表明,蟾酥复方消毒剂对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作用5min,对白色念珠菌作用2min,杀灭率为99.99100.本试验通过在实验室选择具有抗菌作用的中草药制备成中草药消毒剂,在实验室和养殖场对其杀菌效果及稳定性进行研究.1材料与方法1.1中草药消毒剂的制备取大黄,艾叶,丹皮,蛇床子,大青叶,苦参,五倍子等中草药分别混碎,按照一定比

4、例混合装入中药提取罐中,加入一定量水后收稿日期:2010-0421作者简介:王金和(】971一),男,河南人,讲师,硕士,主要从事预防兽医教学与科研工作.通信作者:边传周(1966一),男,河南人,教授,博士,主要从事预防兽医教学科研管理工作.基金项目:河南省科技发展计划重点项目牧场生物消毒剂的研究与应用(0921023lO145).加热煮沸,放出提取液,再加水加热煮沸,放出提取液,2次提取液合并后微滤,微滤液放入低温浓缩装置中浓缩即得消毒剂.1.2中和剂选择试验试验菌株为大肠杆菌8099(源于中国兽医药品监察所),将试验菌株连续传代培养至第3代,用灭菌生理盐水制成约lO.CFU/mL的菌液;

5、中和剂为含2.0卵磷脂,3吐温一80,0.5硫代硫酸钠的PBS.试验分6组:分别为消毒剂+菌悬液,(消毒剂+菌悬液)+中和剂,中和剂+菌悬液,(消毒剂+中和剂)+菌悬液,稀释液+菌悬液,稀释液+中和剂+培养基.将以上各组混合液各取0.5mL倾注平皿,37培养48h,计算菌落数,按稀释倍数计算回收菌数(CFU/mL);3,4,5组间菌落数误差率及试验所用试剂按消毒拄术规范(卫生部,2002)计算和配制.试验重复3次.1.3定量杀菌试验试验菌包括金黄色葡萄球菌(郑州牧业工程高等专科学校微生物实验室),枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC9372(中国兽医药品监察所),大肠杆菌8099.在(201)水浴环境

6、条件下进行定量杀菌试验,试验分试验组和对照组.分别取0.5mL细菌悬液剂与4.5mL消毒剂(对照组用PBS代替)混匀,消毒剂作用至5,10,15,30rain;分别取0.5mL混合液加入含4.5mL中和剂溶液的试管中,中和作用10min;去除消毒剂后,取1.0mL样液接种平皿,倾注培养基并涂布均匀,于37恒温培养2472h(大肠杆菌24h,金黄色葡萄球菌48h,枯草芽孢杆菌72h),计菌落数,计算杀灭率.杀灭率及试验所用试剂按消毒拄术规范计算和配?228?经验交流中国畜牧兽医2010年第37卷第l1期制.试验重复3次.1.4有机物影响试验在金黄色葡萄球菌菌液中加小牛血清至10,15及20,用不

7、含小牛血清的菌液做对照,检测有机物对消毒剂杀菌效果的影响.1.5稳定性试验取原液6份.3份用于保存前测定杀菌效果,另3份置54.C温箱保存至第14天时,同样方法测定其对金黄色葡萄球菌的杀灭效果.1.6表面现场消毒试验以新乡市某种鸡场为场地,选定两栋鸡舍,一栋作为试验舍,使用中草药消毒剂消毒,一栋作为空白对照舍,不使用任何消毒剂;圈舍平均面积60m.,试验前对两圈舍均用自来水进行冲洗.试验舍消毒前与消毒后1h内对3个试样点分别在圈舍地面,墙壁,饮水器,食槽等不同部位采样,取样时将棉拭子用中和剂浸润后,在面积为55cm的地面或其他表面横直各用力擦拭10次,并不断转换拭子擦拭面,将拭子棉花端剪入采样

8、液内用力振摇100次,将菌洗脱,洗液在含有10血清的马丁琼脂平皿中培养,作活菌计数.空白对照舍采样和细菌计数同试验舍.2结果2.1中和剂选择试验结果见表1.由表1可知,试验的第1组仅有极少数试验菌菌落生长;第2组菌落较第1组多;第3,4,5组菌落最多,且有相似量试验菌生长,3,4,5组回收菌数的组间菌落数误差率为4.5oA;第6组无菌生长.结果表明,以2.0卵磷脂,3吐温一80,0.5硫代硫酸钠的磷酸盐缓冲液作为中和剂进行中和试验可有效中和中草药消毒剂杀菌作用,为合格有效的中和剂.表1中草药消毒剂的中和试验结果注:试验温度为20C.2.2定量杀菌试验试验结果见表2.结果表明,.菌作用10min

9、以上,杀灭率达100;对枯草杆菌中草药消毒剂作用10min,对金黄色葡萄球菌的杀黑色变种芽孢作用15min以上杀灭率达99.9.灭率达99.9%,作用30min可达100;对大肠杆表2中草药消毒对金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,枯草芽孢杆菌的杀菌效果注:试验温度为20.C.2.3有机物的影响试验结果见表3.结果表明,影响,有机物含量越多,影响越大.要达到相同消毒有机物对中草药消毒剂杀灭金黄色葡萄球菌有一定效果时,应相应延长消毒时间或增加消毒剂浓度.表3有机物对中草药消毒剂杀灭金黄色葡萄球菌的影响注:试验温度为20C,消毒前金黄色葡萄球菌菌数为5.610CFU/ml.2.4稳定性试验试验结果见表4.结

10、果表明,消毒剂置于54.C温箱中存放14d,对金黄色葡萄球菌的杀灭效果无明显下降.2.5现场消毒试验试验结果见表5.结果表明,中草药消毒剂对养鸡场表面现场的杀菌率为99.96.中国畜牧兽医2010年第37卷第t1期经验交流?229?注:存放温度为54.C,试验温度为20C.表5中草药消毒剂表面现场消毒效果注:试验温度为室温.3讨论与分析杀菌试验结果表明,以大黄,艾叶等中草药组方的中草药消毒剂对大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢均有较好的抑制作用,其稳定性受温度影响不大,临床现场消毒效果明显,证明本中草药消毒剂安全有效,可用于养殖场消毒.试验中均用消毒剂的原液进行试验,目的是为了保证试验效果.本

11、中草药消毒剂的组方是从多种中草药精选出来的,每种都具备一定的抗菌作用.组方中大黄具有抑菌,抗炎,抗病毒作用,大黄对金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌,痢疾杆菌,伤寒杆菌及大肠杆菌等均有一定抑制作用,大黄鞣质对多种细菌,真菌及酵母菌有明显抑制能力(张向红等,2009).大量的药理研究结果表明,艾叶水浸剂,艾叶烟熏和艾叶油有抗细菌,抗真菌,抗病毒,抗支原体作用(李慧,2002);艾叶的主要抗菌化学成分为挥发油,艾叶挥发油具有抗菌,增强免疫力,抗肿瘤作用(孙蓉等,2009),宋建勇等(1998)制备的艾叶复方消毒剂原液在2O25下作用210min,可对悬液中各种细菌和真菌均杀灭99.99以上.丹皮具有抗菌

12、,抗病毒,抗炎作用,丹皮对金黄色葡萄球菌,白色葡萄球菌,炭疽杆菌,甲型链球菌,乙型链球菌等均有明显的抑菌作用(丁凤荣等,2003).蛇床子主要活性成分为蛇床子素,具有较强的广谱抗菌作用(孙海峰等,2007);苦参为豆科植物的根,含多种生物碱,有抗病原体作用.体外试验证明1苦参碱对金黄色葡萄球菌,链球菌,痢疾杆菌,大肠杆菌及变形杆菌均有较明显的抑菌作用(马丙祥等,20OO).金银花所含成分有绿原酸,异绿原酸,黄酮化合物,芳樟醇,双花醇等,对小鼠流感病毒性肺炎有明显抑制作用(畅凤英等,2001).大青叶,五倍子具有清热解毒,杀菌止痒,抑制病毒,杀灭寄生虫,提高免疫力的功效(郑虎占等,1997).从

13、消毒剂发展趋势看,研制杀菌力强,抗菌谱广,用途广泛,使用简便,对人畜毒副作用小,腐蚀性小,稳定性好,价格低廉,易运输包装的新型消毒药仍然是今后的主攻方向,同时减少消毒剂的不良副作用等是要解决的主要目标.中草药消毒剂使用安全,无副作用,无污染,效果理想,气味芳香,有广阔的发展空间.参考文献1丁凤荣,邱世翠,郭丽华,等.牡丹皮的体外抑菌作用研究J.时珍国医国药,2003,12(8):452.2马丙祥,段晓颖,王志超,等.双花喷雾剂治疗小儿上呼吸道感染临床与实验研究EJ.中国中西医结合杂志,2000,20(9):655.3孙海峰,王喜军,王苏艳,等.中药提取物对龙胆叶枯病病原菌抗菌活性的筛选J.时珍

14、国医国药,2007,18(12):28992900.4孙蓉,黄伟,王会.与功效,毒性相关的艾叶化学成分研究进展口.中国药物警戒,2009,11:4546.5宋建勇,刘鹏林.艾叶复方消毒剂杀菌效果的实验观察J.第三军医大学,1998,5(20):46O461.6张向红,程黎晖.大黄的药理作用及临床应用研究进展J.中国药业,2009,22(18):3638.7李慧.艾叶的药理研究进展及开发应用阳.基层中药杂志,2002,16(3):51.8周宛蓉.中草药与细菌耐药性相关问题研究J.中国畜牧兽医,2008,35(1J):122123.9畅凤英,彭清桂.一种中药复方消毒剂杀灭微生物效果的实验研究J.广

15、东药学院,2001,5(17):107108.1O孟庆增,袁青春,姚元庚,等.蟾酥复方消毒剂性能的实验观察J.中国消毒学杂志,1998,15(1):2629.11郑虎占,董泽宏,余靖.中药现代研究与应用M.第1卷.北京:学苑出版社,1997,328335.12胡晓蕙,蒋连泓,高岚.中药空气消毒剂预防上呼吸道感染的观察J.浙江中医杂志,2002(6):269270.13高慧,张思超.中药消毒剂研究现状J.山东中医药大学,2004,28(6):476478.?230?经验交流中国畜牧兽医2010年第37卷第11期替米考星淀粉微球的制备及缓释性能的研究李仲谨,杨威,刘艳,赵燕,熊勇(陕西科技大学化学

16、与化丁学院教育部轻化工助剂化学与技术重点实验室,西安710021)摘要:以可溶性淀粉为原料,N,N,_亚甲基双丙烯酰胺为交联剂,采用包埋法制备了替米考星淀粉微球,通过1.9(3)正交试验设计,以载药量和包封率的综合得分为指标,优化了替米考星淀粉微球的制备工艺;分别用激光粒度分布仪,扫描电镜和综合热分析仪对载药微球进行了表征.结果表明最佳工艺条件为:淀粉4g,替米考星0.02g,交联剂0.95g,乳化剂0.75g,反应时间1h;影响因素的大小依次为:交联剂的质量>替米考星和淀粉的投料质量比>反应时间>乳化剂的质量;按优化工艺参数制得的载药微球的总载药量2.24,包封率为89.6

17、;替米考星载药微球具有一定缓释效果,其制备方法合理可行.关键词:淀粉微球;替米考星;包埋载药;回归分析法;体外释药中图分类号:TQ46o.6文献标识码:A文章编号:1671-7236(2oIO)1I-023005淀粉微球(starchmicrospheres)因具有无毒性,生物相容性,可生物降解性,价格低廉等优点,已作为靶向制剂的药物载体在医药卫生领域得到广泛研究和应用(Clovis等,2006;Iena,1998).淀粉微球被用于包载药物(曲荣君等,2001;赵新法等,2007),并证实用淀粉微球包载药物后,药物的缓释效果增强,具有一定靶向性,有望成为理想的靶向给药系统(TDDS)药物载体(

18、王磊等,2007).替米考星(tilmicosin)是一种以泰乐菌素为前体半合成的畜禽专用抗生素(Norcia,1999;Nerland等,2005),是英国Elanco公司于2O世纪8O年代研制开发,具有很强的抗菌活性,抗菌谱广,耐药性低,对所有的革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌,螺旋体,霉形体等均有收稿日期:20lOO528抑制作用(远立国等,2009).目前该药已在许多国家批准上市,但替米考星具有较强刺激性,可能引起过敏反应,甚至对心脏产生较强的毒性(刘晓萍等,2008).鉴于上述不良反应,其在兽医临床上的推广应用受到限制(朱颖等,2009).作者研究了替米考星淀粉微球的制备工艺,并考察了

19、其缓释性能,旨在为替米考星淀粉微球缓释药物的实际应用提供理论依据.1材料与方法1.1仪器与试剂水浴锅,离心机(TDL_40B,上海安亭科学仪器厂),恒温干燥箱(101AI,上海亚明热处理设备有限公司),超声波清洗器(KQ50E,昆山市超声仪器有限公司),UV7518紫外可见分光光度计(天津市拓普仪器有限公司),激光粒度分布仪(BT一9300Z,丹东百特科技有限公司),KYKYStudyonSterilizationEffectofChineseMedicineDisinfectantWANGJinhe,BIANChuanzhou,JINDengyu,CHENYi(ZhengzhouColleg

20、eofAnimalHusbandryEngineering,Zhengzhou450011,China)Abstract:InordertOstudythesterilizationeffectoftheChinesemedicinedisinfectant,preparedrhubarb,mugwortandotherherbsascompounddisinfectantinlahoratory.andquantitativebactericidaltest,on-sitedisinfectiontestsandclinicalexperimentalstudywerecarriedout.

21、Theresultsshowedthat,Chineseherbaldisinffectionbacterialwas99.96%;placedinthe54for14days,sterilizationeffectwasessentiallythesame,presenceoforganicmatterhadacertaininfluencetOthedisinfectioneffect.Theresultssuggestedthat,Chineseherbaldisinfectantwasstableandeffective,thedevelopmentofdisinfectantwaspracticable.Keywords:Chinesemedicinedisinfectant;S户Z0cofcs以”rs,Escherichiacoli;Bacillussubtilis;sterilizationeffect