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1、临床检验实验室ABO血型鉴定页码：第1页，共5页测定原理根据红细胞上有或无 A抗原或/和B抗原，将血型分为 A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗一 A和抗一B分型血清来测定红细胞上有 无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知 A细胞和B细胞来 测定血清中有无相应的抗一A或/和抗一Bo试剂和仪器1 .批批检的抗一A（B型血）、抗一B（A型血）及抗一A十B（O型血）分型血 清。2 .批批检的5 % A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节 附注；3 .离心机，显微镜。标本收集与处理1 ,受检者血清；2 ，枸缘酸钠
2、抗凝血或未稍取血，受检者血液制成5 %红细胞盐水悬液使用，制备方法见本节附注。3,标本出现中度溶血者，为不合格标本，不能用于检测。操作步骤1 .试管法（1）取洁净小试管（内径10mnX60mm）3支，分别标明抗一A、抗一B和抗一A十B，用滴管分别加抗一A、抗一B和抗一A十B分型血清各I滴(约50 ul )于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混和。另取洁净小试管(内径10mnX 60mm)3支，分别标明A B和0细胞。用滴管分别加入受检者血清I滴于试管底部，再分别以滴管加入 A、 B和0型5%试剂红细胞悬液I滴，混和。(3) 立即以 1000r/min 离心 3 min。(
3、4) 将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上， 再以低倍镜检查。(5) 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。ABC血型鉴定页码：第2页，共5页(6) 凝集强度判断标准4 十红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3 十红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2 十红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1 十肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。土 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。MF混合凝集外观(mixed field) 是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数
4、红细胞仍呈分散分布。一 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。2.玻片法(1) 取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型 血清I滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混和。(2) 另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明 A细 胞、B 细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清 1滴，再分别用 滴管滴加A B和0型试剂红细胞悬液1滴。(3) 将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续 约15 min，先以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应；再在低倍镜下 观察结果。结果判定ABO
5、血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞受检者血型受检者血清+试剂红细胞抗-A抗-B抗-A十BA细胞 B 细胞O细胞十一十A十 十十B十一一 O十十一十十十AB注：十为凝集；一为不凝集。ABO血型鉴定版序：2017-6页码：第3页，共5页质量控制与附注1,分型血清必须为批批检试剂，且在有效期内使用；质量性能符合要求。 试剂幵封后必须贴上幵封日期、 幵封人标签，用毕后应放置冰箱保存， 以免细菌污染。试剂幵封后有效期为一周。2，试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。或使用合格的商品诊 断红细胞。试剂红细胞有效期：自制的为15天，商品的为试
6、剂有效期。试剂幵封后必须贴上幵封日期、幵封人标签，用毕后应放置冰箱 保存，以免细菌污染。试剂幵封后有效期为一周。3，生理盐水启用后，有效期为二周。4，所有试剂在幵封或使用时， 必须检查是否有变质； 凡可疑者，必须更 换新的试剂进行检测工作。5 ，试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。6 ，操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。7 ，按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以 4C为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温 (20 24C )内进行试验， 37 C可使反应减弱。8 ，离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假
7、阴性结果。9 ，观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的 区别。10 ，判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。11，对于可能存在不完全抗原的时候，应在各反应方加入凝聚胺试剂,以检验不完全抗原的存在。12,对于可疑结果，必须更换所用的试剂，重新检测。13, 5%红细胞悬液的配制：用生理盐水洗涤红细胞3次。根据下表进行红细胞悬液的配制。悬液浓度(%压积红细胞(滴)盐水(滴)212ml(40)510.8ml(16)1010.4ml(8)2010.2ml(4)ABO血型鉴定版序：2017-6页码：第4页，共5页正反定型结果不一致的原因（一） 原因：有技术性问题或红细胞和血清本身的问题
8、，常见者有以下几种：1 ，分型血清效价太低、亲和力不强。如抗一 A血清效价不高，可将 A亚型误定为 0型，AB型误定为B型。2 ，红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。3 ，受检者红细胞上抗原位点过少 （如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或恶性肿瘤：以及类 B或cisAB等。4 ，受检者血清中蛋白紊乱（咼球蛋白血症），或实验时温度过咼，常引起红细胞呈缗钱状排列。5 ，受检者血清中缺乏应有的抗-A及或抗一B抗体，如丙种球蛋白缺乏 症。6 ，各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体.7 ，由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝
9、集往往是正反定型不符的 原因。8 ，血清中有意外抗体，如自身抗一I，常引起干扰。9,老年人血清中抗体水平大幅度下降正反定型结果不一致的解决办法如发现ABO正反定型结果不一致，先要重复作试验1次。严格执行 操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果， 就 可解决明显的问题，对一些疑难问题月必须进一步研究。（二）检查步骤：另从受检者米取I份新鲜血液标本这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。2 ，将红细胞洗涤数次，配成 5%盐水细胞悬液，用抗一A、抗一B、抗一Al，抗一A十B及抗H做试验可以得到其它有用的信息。3 ，对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏
10、。4 ，用A1、A2、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀疑是抗一I，用0型（或ABO相合的）脐血红细胞检查。5 ，如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4C放置30min,用显微镜检查核实。6 ，如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗一 A或抗一B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A B、H血型物质测定。后者只对80% HAB分泌型的人有用。ABO血型鉴定页码：第5页，共5页7 ，如试验结果红细胞呈绢钱状排列，加等渗盐水 I滴，混和，往往可使绢钱现象消失。应注意不应先加盐水I滴于受检者血清中而后和红细胞作 试验，以免使血清中抗体被稀释。8 ，如受检者为A型血而
11、疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别(1) 观察细胞与抗一A及抗一B的凝集强度，与抗一A的反应要比与抗 B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。(2) 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗一 B不凝集自身 红细胞上的类B抗原。(3) 检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出 A物质而无 B物质。(4) 核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆 菌感染有关。9 ，如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的 Cad抗原活性；被细菌酶激活的T或丁 K受体；或产生机制不太明了的丁 n受体所引起。多凝集 红细胞具有以下特点：(1) 能被人和许多家兔的血清凝集。(2) 能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。(3) 不被脐带血清凝集。(4) 通常不与自身的血清凝集。临床应用用于检验人的ABC血型归属。
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