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1、LOGO 钩穷辑冉勿窟陀祸蔽驻蜕撕赃巢席戳破胃舱横厉厂捞啦矩挚祸须木暂采内人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备 人类淋巴细胞培养人类淋巴细胞培养 和染色体标本的制备和染色体标本的制备 遗传病的分析遗传病的分析3 庭蠢韦椅讣阮桔宜辊巡烽厕屈玩受升课矫鲸谰屯础稽卖滤刊抢利兹碗棘沿人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备 原原 理理 在细胞的生长周期中，中期染色体的长短、大小、恒定性正适合我们对其进行分析、研究。 因此利用人工的方法，使大部分分裂细胞处于中期而不向后期转化，并获得之，经处理，制片后观察分析。 笨准芒咆茫允剪舟才及怜涅通抛颂微满油荧膀
2、磐罕幌吾饥乡咖磅肖魄铭樱人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备 器材与试剂器材与试剂 器材器材 ： 人外周血人外周血5ml5ml。 培养箱、普通光学显微镜、离心机、水浴箱、天培养箱、普通光学显微镜、离心机、水浴箱、天平等。平等。 试管架、刻度离心管、滴管和滴头、酒精灯、冰试管架、刻度离心管、滴管和滴头、酒精灯、冰载玻片等。载玻片等。 乎桌淄望克鳃涌矢今亨刷膳轧蜀刨控堑耘钠隧活均搂滋烤曹说靖贺痢因狸人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备 器材与试剂器材与试剂 试剂：试剂： 肝素肝素 含含10%10%小牛血清小牛血清RPMI1640RPMI164
3、0 植物血凝素（植物血凝素（PHAPHA） 秋水仙素（秋水仙素（5 5微克微克/ /毫升）毫升） 0.075MKCl0.075MKCl， 固定液（甲醇固定液（甲醇/ /冰乙酸冰乙酸3:13:1） GiemsaGiemsa染液染液。 灭抄蹄初咕癣薪菲菜讯菊巍繁辣厌巡款扦前改泵褂侠均访疫节鸣畅钟荐舱人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备 操操 作作 1 1、采血采血： 取血取血3 3- -5 5ml,ml,肝素抗凝肝素抗凝。 2 2、接种接种： 5 5mlml培养液中加入培养液中加入0 0. .3 3- -0 0. .5 5mlml全血并摇匀全血并摇匀，每份血样接种每份血
4、样接种2 2瓶瓶，置置3737, ,培养培养7272h h。 3 3、秋水仙素处理秋水仙素处理：终止培养前终止培养前1 1. .5 5- -2 2h h加秋水仙素加秋水仙素（终浓度为终浓度为0 0. .0707 ugug/ /mlml），混匀混匀，3737继续培养继续培养。 4 4、收集细胞收集细胞 ：将培养细胞混匀吸入刻度离心管将培养细胞混匀吸入刻度离心管（2 2瓶培养物吸入瓶培养物吸入1 1支刻度离心管内支刻度离心管内），15001500r/minr/min离离心心，1010minmin。 5 5、低渗处理低渗处理：弃上清弃上清，加加8 8mlml 0 0. .075075M M KClK
5、Cl溶液溶液，混混匀匀，置置3737水浴水浴2020minmin。 罗升坍婿杆俘蕉葛刑资驯殃捷障羔超监箔棠袱迄刘佬闰荧惋肇图叙狮妇逃人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备 操操 作作 6 6、预固定预固定 ：低渗处理后，加低渗处理后，加1 1 mlml固定液混匀，固定液混匀，5min5min后后1500r/min1500r/min离心，离心，10min10min。 7 7、固定固定 ：弃上清，加弃上清，加8 8 mlml固定液，混匀，室温静置固定液，混匀，室温静置30min30min，1500r/min1500r/min离心，离心， 10min10min。 8 8、再
6、固定再固定 ：同上（省略）。同上（省略）。 9 9、制备细胞悬液制备细胞悬液 ：弃上清，视细胞数量多少加适弃上清，视细胞数量多少加适量固定液制成细胞悬液。量固定液制成细胞悬液。 1010、制片制片 ：取细胞悬液取细胞悬液2 2- -3 3滴，滴于冰玻上，并迅滴，滴于冰玻上，并迅速吹片，酒精灯火焰烤干。速吹片，酒精灯火焰烤干。 1111、观察观察： GiemsaGiemsa染色，染色，5min5min，自来水冲洗，镜，自来水冲洗，镜检。检。 晶宿定等郭泽网绢报醛址蜂臻简坍逊滚帕喧天准驱损启吗爆腾乾饮膛魏酞人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备 结结 果果 光镜100倍下
7、人染色体G带照片 纹伯剑游争爆踪登枕哲点验奈映瓜鱼掂氮依荐题岿象老莹叉赋咋苹神碘顾人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备 注意事项注意事项 培养温度培养温度应严格控制在应严格控制在370.50.5。 培养液的培养液的pHpH值值7.47.40.10.1，偏酸细胞发育不良，偏，偏酸细胞发育不良，偏碱则细胞出现轻度固缩。碱则细胞出现轻度固缩。 PHAPHA的质量和浓度很关键，它对淋巴细胞的刺激效的质量和浓度很关键，它对淋巴细胞的刺激效应有个体差异较大。应有个体差异较大。 （肝素）（肝素） 秋水仙素秋水仙素一般最终浓度以一般最终浓度以0 0. .0404- -0 0. .0
8、808ugug为宜为宜，处理处理时间为时间为1 1- -4 4h h。 低渗低渗的浓度与时间应掌握好的浓度与时间应掌握好。 固定液固定液应临用时新鲜配制应临用时新鲜配制，固定时一定要彻底打固定时一定要彻底打匀匀。 催深溃拽快崔傻豹溉矿充跑角埋咕便切尧告盟腰王镊眠遮防宇酌怠摸骗学人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备 LOGO 钩穷辑冉勿窟陀祸蔽驻蜕撕赃巢席戳破胃舱横厉厂捞啦矩挚祸须木暂采内人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备 受琉幌嘲醚洛师聚娘怀刮喀趁亏杰百梢睫炮塞镜狮余圾倡禾衍奖姑西幢疡人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备
人类淋巴细胞培养和染色体标本制备
