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1、第二章第二章 固相萃取固相萃取学学习习要要点点 概概 述述固相萃取的基本原理、分离模式及操固相萃取的基本原理、分离模式及操作步骤作步骤固相萃取方法的建立及应用固相萃取方法的建立及应用 固相萃取的操作步骤固相萃取的操作步骤固相萃取的装置固相萃取的装置与液液萃取相比，固相萃取具有如下优点：与液液萃取相比，固相萃取具有如下优点：回收率和富集倍数高回收率和富集倍数高有机溶剂消耗量低，可减少对环境的污染有机溶剂消耗量低，可减少对环境的污染采用高效、高选择性的吸附剂，能更有效的将分析物与干扰组分采用高效、高选择性的吸附剂，能更有效的将分析物与干扰组分分离分离无相分离操作过程，容易收集分析物无相分离操作过程
2、，容易收集分析物能处理小体积试样能处理小体积试样操作简便、快速，费用低，易于实现自动化及与其他分析仪器连操作简便、快速，费用低，易于实现自动化及与其他分析仪器连用。用。Survey response %一个完整的固相萃取步骤包括固相萃取柱的预处一个完整的固相萃取步骤包括固相萃取柱的预处理、上样、洗去干扰物质、洗脱及收集分析物四理、上样、洗去干扰物质、洗脱及收集分析物四个步骤。个步骤。将样品倒入活化后的SPE 小柱，然后利用加压、抽真空或离心的方法使样品进入吸附剂。采取手动或泵以正压推动或负压抽吸方式，使液体样品以适当流速通过固相萃取柱，此时，样品中的目标萃取物被吸附在固相萃取柱填料上。（1）固
3、相萃取柱商品化的固相萃取柱（cartridge）外形类似于一个注射器针筒。还可自行填装固相萃取柱。（2）固相萃取过滤装置固相萃取加样过程中，需通过适当的方法使样品溶液通过固相萃取柱，使待分析物吸附在填料上。洗脱过程中，同样需要使溶剂通过固相萃取住，使待分析物解析。以上步骤需借助于固相萃取过滤装置完成，采用柱前加压或柱后加负压抽吸的方式实现。a.固相萃取过滤-加压操作固相萃取加压操作可通过在液体样品储液槽上方用高压空气或氮气施加一定压力来实现的。如果样品较少，可以用手动加压的方式实现。美国Supelco公司提供的给单个固相萃取小柱加压的单管处理塞。b. 固相萃取过滤-负压抽吸负压抽吸是在固相萃取
4、柱的出口用注射器手动抽负压，或与水泵或真空泵相连，用泵施加适当真空度，从而使样品溶液抽吸通过固相萃取柱。最常用的是用抽滤瓶实现负压抽吸。也可以采用固相萃取过滤装置同时处理多个样品也可以采用固相萃取过滤装置同时处理多个样品c. 固相萃取过滤-离心法全自动固相萃取仪全自动固全自动固相萃取仪相萃取仪能自动完能自动完成固相萃成固相萃取的全部取的全部步骤步骤固相萃取联用装置键和硅胶吸附剂键和硅胶吸附剂常用的键合硅胶常用的键合硅胶吸附剂表面积在吸附剂表面积在5050500m500m2 2/g /g 之间，之间，孔径为孔径为5 550nm 50nm ，粒径大于粒径大于40m 40m 。一般应选择粒径一般应选
5、择粒径小、比表面积大小、比表面积大的吸附剂，以获的吸附剂，以获得更好的萃取效得更好的萃取效果。但要注意若果。但要注意若粒径过细，萃取粒径过细，萃取时阻力增加，萃时阻力增加，萃取速度下降。取速度下降。应根据分析对象、检测手段及实验室条件合理选择。应根据分析对象、检测手段及实验室条件合理选择。2. 2.固相萃取溶剂的选择固相萃取溶剂的选择在固相萃取固定相活化、上样富集、淋洗杂质、分析物洗脱过程中，都涉及到溶剂选择问题。a.固定相活化溶剂的选择一般使用两种活化溶剂。第一种溶剂（初始溶剂）用于净化固定相，对于常用的C18键和硅胶固定相，可用甲醇有效地除去其所含杂质。第二种溶剂（终溶剂）使固定相溶剂化，
6、以便样品中的分析物能更好的保留。b. b.上样萃取溶剂的选择上样萃取溶剂的选择为了使分析物更好地保留在固相萃取柱上，上为了使分析物更好地保留在固相萃取柱上，上样萃取时应采用尽可能弱得溶剂。样萃取时应采用尽可能弱得溶剂。c. c.淋洗溶剂的选择淋洗溶剂的选择淋洗溶剂用于洗去吸附在固定相上的干扰组分。淋洗溶剂用于洗去吸附在固定相上的干扰组分。淋洗溶剂的强度选择非常重要，其强度不能太淋洗溶剂的强度选择非常重要，其强度不能太高，也不能太低，应大于或等于上样溶剂，又高，也不能太低，应大于或等于上样溶剂，又小于洗脱溶剂。淋洗溶剂的选择原则：尽可能小于洗脱溶剂。淋洗溶剂的选择原则：尽可能将干扰组分从固定相上
7、洗脱完全，但又不能洗将干扰组分从固定相上洗脱完全，但又不能洗脱任何分析物。脱任何分析物。1 1）固相萃取测定生物检材中安眠酮（导数紫外）固相萃取测定生物检材中安眠酮（导数紫外）2 2）双柱富集固相萃取测定钯、锶（）双柱富集固相萃取测定钯、锶（FAASFAAS）3 3）固相萃取富集水中多环芳烃（）固相萃取富集水中多环芳烃（HPLC)HPLC)4 4）固相微萃取富集多环芳烃）固相微萃取富集多环芳烃GC-MSGC-MS柱色谱实验柱层析法：是分离，纯化和鉴定有机化 合物的重要方法之一。基本原理：利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性能的差异，混合物的溶液流经该种
8、物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。n当加入的洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，因而以不同的速度沿柱向下流动，继续洗脱时，吸附能力弱的组分随溶剂首先流出。在连续洗脱过程中，不同组分或不同，色带就能分别收集，从而达到分离纯化的目的。n1 、吸附剂n常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭或纤维素粉。n选择吸附剂的首要条件：不与被分离物或展开剂发生化学反应。n吸附能力与以下几点有关：（1）吸附剂颗粒大小（2）吸附剂含水量n2 溶剂n通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活性等来考虑。n先将带分离的样品溶于尽量少的非极性溶剂中，从柱顶流入柱中，依次增大溶剂的极
9、性，将不同化合物依次洗脱。n常用洗脱剂的极性：n石油醚 环己烷 四氯化碳 甲苯 苯 二氯甲烷 氯仿 乙醚 乙酸乙酯 丙酮 乙醇甲醇水 乙酸三、实验步骤及注意事项1、在玻璃色谱柱(d=1cm,l=10cm)底部用脱脂棉轻轻塞紧 ,称取 4g 硅胶于小烧杯中 ,加入 15mL蒸馏水 ,用玻璃棒调好。2、在柱中先加入1/2 柱高的蒸馏水 ,打开活塞 ,在搅动下把糊状硅胶加入柱中 ,同时调整活塞使流速为1滴/s。n3、当柱中液面将要露出硅胶面时 ,加入 5mL左右的A 液 ,当硅胶面又将要露出时 ,关紧活塞 ,用移液管准确加入 0.50mL以A液做溶剂的混合液(含甲基橙和亚甲基蓝各为0.400gL-1
10、) 。nH2O 95 %乙醇 = 1 1 (A 液) n0.2mol L-1HCl 95 %乙醇 = 1 1 (B 液) 。4、待此混合液将要渗入柱内时 ，立即用 A 液洗脱 ，此时可以观察到有鲜明的黄、 蓝两条色带形成。黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移 ，而其顶部蓝色带不移动 ，当黄色带到达柱底部时 ，更换接受器 ，全部收集此黄色带 ，洗脱时间约 10 min。5、此后改用B 液做洗脱剂 ，这时可看到蓝色带开始下移 ，当亚甲基蓝色带到达底部时 ，更换接受器 ，全部收集此蓝色带 ，洗脱时间约 30 min。n【洗脱时切勿使溶剂流干！ 】n使用过的吸附剂倒入垃圾桶里，切勿倒入水槽，以免堵塞水槽习题n固相萃取包括哪几个步骤？n柱色谱（柱层析）实验过程中的注意事项有哪些？n正相型和反相型固相萃取中常用溶剂的极性大小（P32）
第二章 固相萃取技术
