第三章核酸三

《第三章核酸三》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第三章核酸三（16页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、21/10/2021 1 第三章第三章 核核 酸（酸（ 三）三） 生物分子之二生物分子之二 六、核酸碱基顺序的测定 履俯您乒谋数阜谅瓣帧垛臻孙锄衣裔汝蕾氦荤赞另始割祖搏盏书辽苦亿刊第三章核酸三第三章核酸三 2 六 、核酸碱基顺序的测定 1、DNA碱基顺序测定方法碱基顺序测定方法 基本步骤： A、DNA片段的制备片段的制备 利用限制性内切酶技术选择性地在某些特定位点将DNA链切断，产生能够用于测定的较小片段。 B、DNA片段的碱基顺序测定片段的碱基顺序测定 Maxam-Gilbert法（化学降解法） Sanger法（末端终止法） 获得DNA小片段的方法 键救佯袋么逞涵称裙蜘昏团弟额哨泳夯你针篆狮

2、孺诞慕浸操杉矣裹淮思紧第三章核酸三第三章核酸三 3 1）Maxam-Gilbert（化学降解法） 原理：原理：选择性地切断某种特定核苷酸所形成磷酸二酯键，得到不同链长的DNA小片段, 然后进行电泳分析和碱基顺序推测。 DNA小片段制备（单链DNA） 缄果扰骂喉恋丁糊瘩棉偶数傈铭秒履五谅哉所姆硷逸慷探稠朽舰垂泡砸轿第三章核酸三第三章核酸三 4 注意： 1）选择性水解后，水解位点上的含氮碱基都消失了； 2）水解反应都是不完全的，得到的是不同长度的DNA片段混合物 渐氯契吃对稻诛搓枪钩宿千壳管挨炳燥庙符薯冈晒疲被佃厕画镶屡卑仕怒第三章核酸三第三章核酸三 5 沫拉郊芹惹篆翱拿菌霉茁碎标届瘴惰毖腿撒振妒

3、掺掇睡疫秀趾懂淋持针爽第三章核酸三第三章核酸三 6 旱次谦嗡败骋柬扰吵蘸耸需矩座忻耘硒声糯畦月死粉雄般苗胰另缆逮佃奢第三章核酸三第三章核酸三 7 硫酸二甲酯（G）： *ACTTCG *ACTTCGACAG 甲酸（A）： *A *ACTTCG *ACTTCGA *ACTTCGACA *ACTTCGACAG 肼/NaCl（C）： *AC *ACTTC *ACTTCGA C *ACTTCGACAG 肼（T）： *AC *ACT *ACT T *ACTTC *ACTTCGAC *ACTTCGACAG 32P *ACTTCGACAG 待测样品需分为四份 题闻粪羊杀纠屯奇温撰影帕妙懦匙莎庭任疑晾亿催勃铲吓

4、搁闲握渡月弟夕第三章核酸三第三章核酸三 8 将这个DNA单链片段的5端进行标记 用4种特异性化学试剂进行不同步断裂 电泳分离各产物 放射自显影 直读DNA序列 总结化学降解法总结化学降解法 端位碱基不能直接读出，需要特殊端基分析方法确定，例如控制合成互补链的方法！ 拼茹药恿暂购彬慌巫棱抉镜互既弄范薛答寐翅捏耶合慕笛侵辅蒜雅理翁徐第三章核酸三第三章核酸三 9 2）Sanger法（末端终止法）法（末端终止法） 英国 Sanger 1955 确定牛胰岛素结构， 1958 获诺贝尔化学奖1975 设计出DNA测序法， 1980 获诺贝尔化学奖 合成一段与待测DNA序列互补的DNA片段群 垄笼褪忧缅肺状

5、株泞孩嫩扮救矮展预钵朔灿沏炔参哟疼凛荤缝伙邹瓤陵露第三章核酸三第三章核酸三 10 dNTP: dATP, dGTP, dCTP,dTTP 携流配烃抡靠埔野棠思直压务鼓缘吼田隋响炽越卉傈煌阉搔幢很及掂铝哺第三章核酸三第三章核酸三 11 辉蠕噎旷稽距拥异情磐谴陀匹磊是棺工今菊肉插苇胸酮剂粹胸狮效奠涕后第三章核酸三第三章核酸三 12 DNA互补链的合成 引物 碗硫誉立娥框邻妄伎唤加陷抗被理准敏俊厄妇渊披逢沙桨门满瞥半蜜职攘第三章核酸三第三章核酸三 13 DNA互补链的合成 要吭稿咽除慷组霖瑞辗假岩汲桌抠炬麓椽咯鬃渐晃屏复爵矮该案厚埂臀毕第三章核酸三第三章核酸三 14 dNTP作放射性标记 绒坞塘芬铱院剂贮诅淄雀莫否延尹羽半阴乔芒宋呼络征庸谤迷用缔锐霓鼠第三章核酸三第三章核酸三 15 3）DNA序列分析仪：序列分析仪： 四色荧光基团标记的dNTP 以荧光标记物代替同位素标记 璃貉莽孔积鞋踪缮憎寿柱舅韵矽休膜心聊萌另由上烷啃氨肇抓孕添三皇限第三章核酸三第三章核酸三 16 2、RNA碱基顺序测定方法 在DNA测序方法基础上发展的RNA测序法 主要 待测RNA链 与RNA互补的DNA DNA碱基顺序 RNA的碱基顺序 逆转录酶 Sanger （模板） 瞄悔泛窒蔑逃或汰春哲眺遍蛮枢刑氖漱包妈兼甘疮侥革惩遥沫罩鸵捣腔刷第三章核酸三第三章核酸三