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1、 中国医科大学博士学位论文体外诱导人骨髓间充质干细胞向类视网膜色素上皮细胞分化的研究姓名：安刚申请学位级别：博士专业：眼科学指导教师：洪晶20070401 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。日期：垒豪迹海豪糩本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许日期： 的，具有复杂的结构和特殊 接种于孔板的软件：分别加入不同引物、内参照
2、铮琍终体系山。三、检测分化的色素上皮样细胞的吞噬功能参照等的双重荧光标记法。用含有终浓度为蚓的生长液孵用荧光显微镜观察， 细胞结合及吞噬谋浠榭觯唤玀细胞设为对照组。洗一次，加入的戊二醛固定，备电镜观察。薓的培养及鉴定 三、检测分化的色素上皮样细胞的吞噬功能只纳厣掀赴哂蠷细胞特异的基因表达。只纳厣掀赴哂型淌蒖的功能。视网膜色素上皮细胞；骨髓间充质干细胞；籑；吞噬 甌 甴甿 ，瓵瓺 甀 瓵琑 畆， 瑃 琣， 猚狿甌 ；籑； 上皮样细胞。实验方法一、细胞培养人骨髓间充质干细胞的培养及鉴定 痬离心，取含有的单核细胞层，加入含孵箱中培养。小时后，更换新鲜培养液，去除未贴壁细胞，以斯撬鐼表型特点鉴定 体及
3、视网膜神经上皮层，撼逑囱郾次，将眼杯移入另外一个无菌平皿中，三、分化细胞的角蛋白鉴定 结 图，人的表达阳性，绿色荧光遍及胞质 的色素颗粒 颗粒；与人赴餐嘌腗榭龌鞠嗨疲琈小时贴壁，呈 图，对照组始终为长梭形，未出现色素样细胞 。目前鉴定的方法都是通过在培养过程中出现分化表型，然后逆推得知是 能否被诱导成色素上皮样细胞目前还未有报道。本研究利用双层组始终为长梭形，未出现色素样细胞。 功能的对比研究 超净台、倒置显微镜、离心机、培养箱、程序化降温仪、液氮罐，免疫荧光痳胄，取含有的单核细胞层，胰蛋白酶消化，胎牛血清终止。 G嗔疵顾兀俅吻崆岽荡虺蒖细胞悬液后均匀的种在二、质量检测水，在分光光度计上测 按
4、照公布的蚆基因序列，应用互联网提供的软件反应：反转录产物 痯甶三、分化的色素上皮样细胞吞噬动力学检测 量。合并三次离心所得上清，并加入二倍于其体积的撼逡，参照鹊乃赜獗昙欠煤兄张任用荧光显微镜观察， 吞噬现象 吞噬脱落的视细胞外节膜盘的功能维持至关重要。蚆对于维持正 只纳厣掀赴哂型淌蒖的功能。 共培养体系的骨髓间充质干细胞形态学变化。 参考文献刘厚奇，冯根生人干细胞的分化研究及薮灿锰剿鳎诙酱笱：；：浚瓻甋，甋叮： 甁 甐甌 瓾；：！：；：】 ，； 甒： 珻 印現，甈猺。甊；： 李光艉吴乐正；视网膜移植技出版社：第页甅 籺； 瓾甊； 籧瓾甈： 一、骨髓间充质干细胞研究进展的体外培养始于世纪年代中期
5、甋等开始能多次传代，这些细胞就是。 龉撬栌泻讼赴性己个，并且随着年 地塞米松，胰岛素，谆一异丁基黄嗦吟，血小板衍生生长因子狟碱性成纤维生长因子二甲基枉枫，地塞米松 是指损害眼表功能与结构的疾病【”。解剖学 此降亩嗡鹕死砺 斯衔H死嗍油乇湫钥赡苡蒖缺陷所致，但 的标本，分离到浦灿谩视隦移植相同。性玻璃体视网膜病变、黄斑水肿等一系列问题不能得到解决，而不能取得实质性的进展，还有很长的路要走。组织细胞工程尤其是干细胞工程的兴起为视网膜损伤的治疗提供了一种新的途径。于细胞、组织工程学以及神经细胞发育、分化调控与定向生长研究的进展，为我们最终有效治疗这些眼疾，恢复患者视功能提供了个契机。现研究发现利用胚胎干细胞在体外成功定向诱导成为神经细胞及在脑组织内外扩增；这与来源稀少、取材较困难、体外培养条件苛刻的神经干细胞、胚胎干 参考文献瓻；甋，；： 琣：琑 出琒；，髓刘艳，隋虹，罗志忠，卢明俊糖尿病性视网膜病变与糖尿病控制状态研究亘糖尿病杂志 珽；】篢病杂志；：琀產 期谝蛔髡科研课题：在洪晶导师的指导下获得如下科研课题资助：泄娇拼笱油厣掀赴淌晒苡隡【基因表达调控关系的 个人履历：
体外诱导人骨髓间充质干细胞向类视网膜色素上皮细胞分化的研究
