第八章实验一寄生虫粪便检查法(共19页)

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1、实 验 一寄 生 虫 粪 便 检 查 法 一 、 目 的 要 求掌 握 粪 便 中 寄 生 虫 虫 卵 检 查 的 饱和 盐 水 漂 浮 法 ；应 用 显 微 镜 观 察 粪 便 中 虫 卵 的 形态 结 构 。 二 、 方 法 概 述用 以 检 查 蠕 虫 卵 、 原 虫 的 包 囊 、 滋 养 体 和 卵 囊 。 方法 简 便 ， 连 续 作 3 次 涂 片 ， 可 提 高 检 出 率 。 1 、 蠕 虫 卵 检 查 ： 2 、 原 虫 检 查 ：1 ） 活 滋 养 体 检 查 2 ） 包 囊 的 碘 液 染 色 检 查3 ） 隐 孢 子 虫 卵 囊 染 色 检 查 ： 改 良 抗 酸 染

2、 色 法 （ 一 ） 直 接 涂 片 法 （ 二 ） 浮 聚 法原 理 ： 利 用 比 重 较 大 的 液 体 ， 使 原 虫 包 囊或 蠕 虫 卵 上 浮 ， 集 中 于 液 体 表 面 。 常 用 的方 法 有 三 种 ：1、 饱 和 盐 水 浮 聚 法2、 硫 酸 锌 离 心 浮 聚 法3、 蔗 糖 离 心 浮 聚 法 虫 卵 比 重 与 漂 浮 液 比 重虫 卵 种 类 比 重 漂 浮 液 的 种 类 比 重 贾 第 虫 包 囊 1.040-1.060 饱 和 盐 水 1.17 1.19猪 蛔 虫 卵 1.045 硫 酸 锌 溶 液 1.14钩 虫 卵 1.085 1.09 氯 化 钙

3、 溶 液 1.05毛 圆 线 虫 卵 1.115 1.13 氯 化 钙 溶 液 1.25猪 后 圆 线 虫 卵 1.200 硫 代 硫 酸 钠 1.37 1.39肝 片 吸 虫 卵 1.200 饱 和 硫 酸 镁 1.26姜 片 吸 虫 卵 1.200 饱 和 硝 酸 钠 1.2 1.49华 枝 睾 虫 卵 1.200 甘 油 1.226复 腔 吸 虫 卵 1.200 饱 和 蔗 糖 溶 液 1 .2 8 饱 和 盐 水 漂 浮 法 操 作 示 意 图1. 自 粪 便 不 同 处 挑 取如 蚕 豆 大 小 的 粪 块 ，置 于 盛 有 少 量 饱 和 盐水 的 漂 浮 管 中 2. 将 粪 便

4、 捣 碎 ， 与盐 水 搅 匀 ， 再 加 饱和 盐 水 3. 将 满 时 ， 改用 滴 管 ， 加 至略 高 于 管 口 但不 超 出 为 止 4. 取 洁 净 载 玻 片 一 张 盖在 管 口 上 ， 静 止 30分 钟左 右 5. 如 图 垂 直 向 上 提起 载 玻 片 6. 敏 捷 地 翻 转 ，覆 以 盖 片 镜 检 （ 三 ） 沉 淀 法 原 虫 包 囊 和 蠕 虫 卵 的 比 重 大 可沉 集 于 水 底 ， 有 助 于 提 高 检 出 率 。 但 比 重 较小 的 钩 虫 卵 和 某 些 原 虫 包 囊 则 效 果 较 差 。 1 、 自 然 沉 淀 法 2 、 离 心 沉

5、淀 法 （ 四 ） 漂 浮 -沉 淀 法 该 法 的 原 理 是 利 用 粪 便 中 各 种虫 卵 及 粪 渣 中 其 它 成 份 比 重 的 差 别 ， 将 不 同 比 重 的虫 卵 分 别 集 中 进 行 检 查 ， 即 先 按 漂 浮 法 检 查 比 重 较小 的 虫 卵 ， 然 后 将 管 中 上 层 液 倒 掉 ， 取 沉 淀 物 检 查不 能 上 浮 而 沉 在 下 面 的 比 重 较 大 的 卵 ， 所 以 ， 该 法可 用 于 检 查 比 重 大 小 各 异 的 寄 生 虫 卵 。 （ 五 ） 拭 子 检 查 法适 用 于 在 肛 周 、 皮 肤 产 卵 （ 蛲 虫 ） ， 或

6、 常 在肛 门 附 近 发 现 虫 卵 （ 带 绦 虫 ） 的 虫 卵 检 查 法 。1 、 棉 签 拭 子 法2 、 透 明 胶 纸 法 漏 斗 幼 虫 分 离 法 (贝 尔 曼 法 )。 取 粪 便 1 5 -2 0 g， 放 在 漏 斗 内的 金 属 筛 上 ， 漏 斗 下 接 一 短 橡 皮 管 ， 管 下 再 接 一 个 小 试 管 。加 入 4 0 到 淹 没 粪 球 为 止 ， 静 置 1 -3 小 时 。 此 时 大 部 分 幼虫 游 走 于 水 中 ， 并 沉 淀 于 试 管 底 部 。 取 试 管 底 部 沉 渣 制 成涂 片 镜 检 。 平 皿 法 。 取 被 检 粪 球

7、 3 -4 个 ， 放 于 平 皿 中 ， 加 适 量 4 0 温水 ， 浸 泡 1 0 -1 5 min后 ， 除 去 粪 球 ， 留 下 的 液 体 在 低 倍 显 微镜 下 检 查 。（ 六 ） 粪 便 内 蠕 虫 幼 虫 检 查 法 1、 幼 虫 分 离 法 ： 网 尾 线 虫 、 类 圆 线 虫 2、 粪 便 内 虫 卵 培 养 法 ： 圆 形 线 虫 目 3、 毛 蚴 孵 化 法 ： 结 肠 小 袋 纤 毛 虫Balantidium coli 十 二 指 肠 贾 第 虫Giardia duodenalis 球 虫 隐 孢 子 虫 肝 片 形 吸 虫 虫 卵日 本 血 吸 虫 虫 卵

8、 蛭 形 巨 吻 棘 头 虫 膜 壳 绦 虫 虫 卵 犬 复 孔 绦 虫 卵猪 带 绦 虫 虫 卵 细 粒 棘 球 绦 虫 虫 卵莫 尼 茨 绦 虫 虫 卵 犬 鞭 虫 卵钩 虫 卵 犬 弓 首 蛔 虫 卵 鸽 毛 细 线 虫 卵 ， 球 虫 卵 囊肉 鸽 蛔 虫 卵猪 蛔 虫 卵 通 常 的 镜 台 测 微 尺 是 中 央部 分 刻 有 精 确 等 分 线 的 载玻 片 ， 一 般 将 lmm等 分 为100格 ， 每 格 长 l0m， 是专 门 用 来 校 正 目 镜 测 微 尺的 。 通 常 的 目 镜 测 微 尺 是 一 块圆 形 玻 片 ， 在 玻 片 中 央 把5mm长 度 刻 成

9、 50等 分 、 把10 mm长 度 刻 成 100等 分 或将 1mm长 度 刻 成 100等 分 。 测 微 尺 的 使 用 漏 斗 架 2 个 /组 ； 漏 筛 6 个 /组 ； 小 烧 杯 （ 5 0 ml） 1 2 个 /组 ； 5 0 0 ml烧 杯 2 个 /组 ； 1 0 0 mL烧 杯 1 个 /组 ； 青 霉 素瓶 6 个 /组 ； 离 心 管 6 个 /组 ； 滴 管 1 个 /人 ； 饱 和 盐 水 1瓶 /组 ； 甘 油 水 1 瓶 /组 ； 1 0 0 mL量 筒 1 个 /组 ； 小 方 瓷盘 1 个 /组 ； 擦 镜 纸 1 平 皿 /组 ； 小 棉 块 1 份

10、 /组 ； 载 玻片 、 盖 玻 片 1 份 /组 ； 离 心 机 、 小 天 平 各 1 台 ； 镊 子 2个 /组 ； 显 微 镜 ； 试 管 架 1 个 /组 ； 动 物 粪 便 1 份 /班 ；5 0 mL烧 杯 两 个 用 于 配 平 。一 ） 、 实 验 用 品三 、 试 验 内 容 1. 每 2人 操 作 1份 饱 和 盐 水 漂 浮 法 静 置 滤 液 30分 钟 ；2. 直 接 涂 片 法 （ 每 2人 操 作 1份 ） ；3. 离 心 沉 淀 法 （ 每 2人 操 作 1份 ） ；4. 继 续 “ 1”未 完 的 操 作 。二 ） 实 验 安 排 六 、 注 意 事 项1.高 倍 镜 下 观 察 必 须 加 盖 玻 片2.采 用 直 接 涂 片 法 时 ， 不 要 涂 得 太 多 ， 必 须 分 散 开 ，均 匀3.观 察 寄 生 虫 卵 前 ， 需 校 对 目 镜 每 格 的 长 度 ； 先 在低 倍 镜 下 观 察 ， 发 现 后 换 为 高 倍 镜4.使 用 离 心 机 前 ， 需 配 平 离 心 管七 、 作 业 ： 绘 制 粪 便 样 品 镜 检 看 到 的 虫 卵八 、 思 考 题 ： 粪 便 中 虫 卵 、 卵 囊 的 检 查 需 要注 意 那 些 问 题 ？