台州地区非结核分枝杆菌流行趋势研究

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1、台州地区非结核分枝杆菌流行趋势研究 摘要目的了解台州地区临床流行的非结核分枝杆菌的种类和感染趋势，为临床诊疗NTM肺病提供依据。方法回忆性分析20212021年来源于台州市不同地区就诊和送检于恩泽医疗中心集团的1156株临床别离分枝杆菌菌株，采用基因芯片进行菌种鉴定。结果1156例分枝杆菌别离出非结核分枝杆菌228例，其中胞内分枝杆菌125例，浅黄分枝杆菌45例，鸟分枝杆菌20例，龟/脓肿分枝杆菌11例，草分枝杆菌16例，不产色分枝杆菌4例，金色分枝杆菌2例，堪萨斯分枝杆菌2例，瘰疬分枝杆菌1例，戈登分枝杆菌1例，海/溃疡分枝杆菌1例。男141例，占61.84%，女87例，占38.16%。结论

2、台州地区非结核分枝杆菌感染有逐年上升的趋势，主要以胞内分枝杆菌为主，别离人群以男性居多。关键词结核;非结核分枝杆菌;基因芯片;菌种鉴定中图分类号R521文献标识码B文章编号1673-9701202126-0132-04AbstractObjectiveTounderstandthetypesandinfectiontrendsofnon-tuberculousMycobacteriaclinicallyprevalentinTaizhou，andtoprovideevidenceforclinicaldiagnosisandtreatmentofNTMpulmonarydisease.Meth

3、odsAtotalof1156clinicallyisolatedMycobacteriumstrainsadmittedfromdifferentregionsofTaizhouCityandsentforinspectiontoEnzeMedicalCenterGroupfrom2004to2004wereretrospectiveanalyzed.Genechipwasusedforstrainidentification.Results228casesofnon-tuberculousMycobacteriawereisolatedfrom1156casesofMycobacteria

4、，including125casesofintracellularMycobacteria，45casesofMycobacteriumluteus，20casesofMycobacteriumavian，11casesofMycobacteriumtortoise/abscess，16casesofMycobacteriumtuberculosis，4casesofMycobacteriumchromogenes，2casesofMycobacteriumaureus，2casesofMycobacteriumkansas，1caseofMycobacteriumdysentery，1cas

5、eofMycobacteriumgordonand1caseofMycobacteriumulcerans.141menaccountedfor61.84%and87womenaccountedfor38.16%.ConclusionNon-tuberculousmycobacterialinfectionshavebeenincreasingyearbyyearinTaizhou，andthemajorityareintracellularmycobacteria.Thesegregatedpopulationismostlymale.KeywordsTuberculosis;Non-tub

6、erculousmycobacterium;Genechip;Strainidentification近年來由非结核分枝杆菌Non-tuberculousmycobacleria，NTM引起的肺部疾病在全球范围内呈增多趋势【1】，已成为全球性公共卫生挑战的疾病【2】。非结核分枝杆菌病是指除人型、牛型结核杆菌及麻风分枝杆菌以外由NTM引起的疾病，主要引起肺部的变化，与肺结核病的临床病症和病理变化极为相似，NTM别离鉴定有一定难度，临床往往误诊为结核病，且NTM对多种抗结核药物耐药【3】，故NTM感染性疾病诊治成为临床难点之一4-8。文献相继报道了不同地区非结核杆菌感染的分布情况，而台州地区无相关

7、报道。恩泽医院属台州地区结核病诊治的定点医院，其他各县区定点医院培养阳性标本送检该单位进行鉴定和药敏实验。本次研究对台州地区20212021年就诊和送检于恩泽医院的1156株临床别离分枝杆菌菌株进行菌种鉴定，为台州地区NTM的流行趋势及菌种分布情况提供详细研究数据，现报道如下。1资料与方法1.1.1标本来源收集台州地区2021年8月2021年12月就诊和送检于恩泽医疗中心集团恩泽医院分枝杆菌阳性患者的标本。1.1.2仪器和试剂仪器：梯度PCR仪型号T100THERMALCYCLER，芯片杂交仪型号BioMixer，芯片洗干仪型号SlideWasher8，微阵列芯片扫描仪结核型号LuxScan-

8、10K/B为北京博奥提供。试剂：分枝杆菌鉴定基因芯片试剂盒购自博奥生物集团。方法1.2.1标本处理向标本如痰液中参加等体积10%NaOH溶液，涡旋振荡，根据液化情况考虑延长液化时间或增加0.51.0mL10%NaOH溶液。1.2.2核酸提取将核酸提取管10000rpm离心1min备用;将液化后的样品取1mL上清到1.5mL离心管中，12000rpm离心5min，弃上清;向离心管中参加1mL生理盐水，同一份样品用1mL生理盐水转移至一个离心管中，旋涡振荡混匀，12000rpm离心5min，弃上清;向每个离心管中参加50L核酸提取液，用移液器吹吸沉淀，将液体和沉淀一起转移到核酸提取管中;将核酸提取

9、管置于振荡器上，最大转速振荡5min;将核酸提取管置于95金属浴中，加热5min;10000rpm离心1min，备用。从4冰箱取出PCR扩增试剂，向每管参加2L模板DNA。每份PCR反應体系总体积为20L。1.2.3核酸扩增先将反应管放入PCR仪中进行PCR扩增反应。扩增结束前半小时左右，取出杂交反应液放入杂交仪温浴使其完全融化;扩增结束后，直接95变性5min，变性结束后立即放入冰盒中至少3min，准备杂交反应。反应反应混合物，迅速盖上杂交盒并密封。立即将密封好的杂交盒水平放入50预热的杂交仪中，杂交2h，转速为5rpm。1.2.5芯片洗涤杂交结束前10min，翻开芯片洗干仪，将芯片放入洗干

10、仪中，开始洗干芯片。1.2.6扫描判读洗涤枯燥好的芯片插入扫描仪进行结果判读。观察指标对所有收集的标本进行NTM检测，根据鉴定结果对NTM菌种每年的分布情况进行统计分析。2结果共检测2021年8月2021年12月收集的标本3132例，其中分枝杆菌阳性1156例，鉴定出非结核分枝杆菌228例，别离率为19.72%，20212021年每年的NTM检出率见表1。其中男141例，占61.84%，女87例，占38.16%，NTM的主要别离人群以男性为主。此次鉴定出的228例非结核分枝杆菌中，其中以胞内分枝杆菌为主占54.82%，其余各种NTM别离率及每年的别离情况见表2。3讨论目前分枝杆菌感染已经严重影

11、响公共卫生健康，成为社会关注的重要问题9-10。分枝杆菌分为结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌等。非结核分枝杆菌广泛存在于自然界中，在动物、土壤、水中都有发现11，不发生人与人之间的传播，但感染后能引起人体的广泛疾病，它可导致皮肤和软组织感染、淋巴结炎、慢性肺病及全身播散型NTM病12。NTM病在亚洲地区和欧美国家发病率逐年上升13，在我国从5次的流行病学调查数据显示，NTM的检出率已从原来的4.2%增加到22.9%14。在韩国2021年NTM的感染率比2021年增加了一倍15-16。日本报道每年10万人中有14.7例感染17。台湾从20212021年每10万患者感染46.0例18。N

12、TM的感染率和菌种分布不同地域、不同气候环境存在差异，呈现出南方高于北方，沿海高于内地，气候温和地区高于寒冷地区的流行特点19。台州位于中国东南沿海，气候温暖潮湿，是NTM的高发区。本研究检测了2021年8月2021年12月台州市不同地区就诊和送检于台州恩泽医疗中心集团恩泽医院的1156例临床别离分枝杆菌菌株，通过基因芯片鉴定的方法，最终鉴定228例为非结核分枝杆菌，NIM总感染率或别离率为19.72%，明显高于内地湖南省的10.17%20、衢州市的4.78%21，接近全国20%25%的感染率或别离率22-24，且逐年呈现上升的趋势。别离种类较多，其中排名前5的分别是胞内分枝杆菌54.8%、浅

13、黄分枝杆菌19.8%、鸟分枝杆菌8.8%、草分枝杆菌7.%、龟/脓肿分支杆菌4.8%，说明台州地区主要以胞内分枝杆菌感染为主，与温州、南京地区报道一致25-26。在我国海南、广州、上海以龟/脓肿分枝杆菌为主，北京以鸟/胞分枝杆菌复合群和堪萨斯分枝杆菌为主，山东和福建以鸟/胞分枝杆菌复合群为主，因此菌种应地理环境的不同相差较大。NTM别离人群男性明显高于女性，与余斐等27的研究一致，与海南报道女性多于男性有一定的差异。NTM的感染主要与人体免疫力相关，随着人们寿命延长，老年人口增多，老年人由于免疫器官衰退，免疫力低下是NTM的易感人群。近年来艾滋病患者人数越来越多，其感染HIV病毒后，人体CD4

14、+T淋巴细胞严重破坏，使淋巴细胞数量进行性下降，更容易发生NTM的感染。且不同的NTM对治疗药物的敏感性存在差异，感染的宿主也存在差异。因此，如何快速准确鉴定到种对临床提早明确诊断和NTM流行病学研究非常重要。传统的分枝杆菌鉴定主要是PNB、TCH改良的罗氏培养法，操作繁琐，分枝杆菌的生长速度较慢，培养时间长，干扰因素多，无法精准的鉴定到种，极易对临床的诊治造成延误和产生耐药。本实验主要采用基因芯片技术，操作简便，鉴定时间短，结果更加准确，为临床及时诊断疾病和针对性用药提供参考。本研究还存在一定的局限，首先，这是一项回忆性分析，仅收集了一家医院的数据，未对台州地区其他医院所有分枝杆菌阳性标本进

15、行鉴定。其次，本研究采用基因芯片的方法，由于方法学限定鉴定的菌种有限，存在漏检的可能。再次，本研究只对非结核分枝杆菌的菌种分布作了分析，未对其耐药情况进行研究，今后针对以上问题还需做进一步的研究。参考文献【1】KhanK，WangJ，MarrasTK.NontuberculousmycobacterialsensitizationintheUnitedStates：NationaltrendsoverthreedecadesJ.AmJRespirCritCareMed，2021，1763：306-313.【2】PrevotsDR，MarrasTK.Epidemiologyofhumanpulm

16、onaryinfectionwithnontuberculousmycobacteria：AreviewJ.ClinChestMed，2021，361：13-14.对抗结核药物耐药情况分析J.山东医药，2021，5612：72-73.【4】CassidyPM，HedbergK，SaulsonA，eta1.Nontuberculousmycobacterialdiseaseprevalenceandriskfactors：AchangingepidemiologyJ.ClinInfectDis，2021，4912：124-129.【5】LiuG，WangQ，HanXH，etal.Analysis

17、ofdrugsusceptibilitytestresultsin110casesofNTMJ.ChinJTubercRespirDis，2021，358：616-617.2021-2021J.JTubercLungHealth，2021，31：15-20.【7】LaiCC，TanCK，ChouCH，etal.Increasingincidenceofnontuberculousmycobacteria，Taiwan，2000-2021J.EmergInfectDis，2021，162：294-296.8YooJW，JoKW，KimMN，etal.Increasingtrendofisolat

18、ionofnontuberculousmycobacteriainatertiaryuniversityhospitalinSouthKoreaJ.TubercRespirDis，2021，725：409-415.9ThomsonRM.NTMworkinggroupatqueenslandTBcontrolcentreandqueenslandmycobacterialreterencelaboratory.ChangingepidemiologyofpulmonarynontubereulousmycobacteriainfectionsJ.EmergInfectDis，2021，1610：

19、1576-1583.10ChuH，ZhaoL，XiaoH，etal.Prevalenceofnontuberculousmycobacteriainpatientswithbronchiectasis：Ameta-analysisJ.ArchMedSci，2021，104：661-668.11李莉，劉航，姚孝元，等.公共场所中非结核分枝杆菌的健康危害J.环境与健康杂志，2021，338：749-751.12JarzembowskiJA，YoungMB.NontuberculousmycobacterialinfectionsJ.ArchPatholLabMed，2021，1328：1333-1

20、341.13沙魏，肖和平.再议非结核分枝杆菌的危害性J.中华结核和呼吸杂志，2021，412：83-85.14全国第五次结核病流行病学抽样调查技术指导组.2021年全国第五次结核病流行病学抽样调查报告J.中国防痨杂志，2021，348：572-580.15KimN，YiJ，ChangCL.Recoveryratesofnon-tuberculousmycobacteriafromclinicalspecimensareincreasinginKoreantertiary-carehospitaJ.KoreanMedSci，2021，328：1263-1267.16KeeSJ，SuhSP.IncreasingburdenofnontuberculousmycobacteriainKoreanJ.KoreanMedSci，2021，328：1215-1216.17NamkoongH，KurashimaA，MorimotoK，etal.Epidemiologyofpulmonarynontuberculousmycobacterialdisease，JapanJ.EmergInfectDis，2021，226：1116-1117.