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1、2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 班级 姓名 一、【学习目标】1.说出培养基对微生物的选择作用2.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌二、【学习重点和难点】 1.学习重点：（1）菌株的筛选与统计 （2）微生物的分离和测量方法微生物的分离和测量方法 2.学习难点：微生物的分离和测量方法3、 研究思路： 筛选菌株统计菌落数目设置对照 （记忆）阅读教材，完成筛选菌株的基础知识部分。（1） 筛选菌株 1、 尿素是一种重要的 氮肥，但不能直接被农作物吸收利用，只有当土壤中的细菌将尿素分解成 之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成 。 2、DNA多聚酶链式反应（PCR技术
2、）是一种在体外将少量DNA大量 的技术。此项技术的自动化，必须要求使用耐高温（930C）的 。3、 (两条途径)：（1）现实生活中微生物的筛选及发现： 1966年美国的微生物学家 在美国黄石公园的一个热泉中从一个耐高温的Taq细菌并从中分离到了耐高温的 。（2）实验室中微生物的筛选： 原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。 4、选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 。和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。根据这一思路，分析课本旁栏中培养基的配方，回答以下的问题：15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgS
3、O47H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4从物理性质看此培养基属于哪类？此培养基中作为碳源、氮源的物质分别是什么？这种培养基对微生物是否有选择作用？如果有，是如何进行选择的？、统计菌落数目： 测定微生物的常用方法有两种： 、 显微镜直接计数法。 前者常用来统计样品中活菌的数目，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 ，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。思考：统计菌落的数与
4、实际数目有何区别，为什么？ 。.设置对照： 设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 阅读课本的实例，分析A同学的结果与其他同学不同，可能的原因是什么？如何通过设置对照、帮助A同学排除是土壤样品不同或是培养基被杂菌污染而引起的 。四、实验的设计： 包括实验方案、所需要仪器、材料、具体实施步骤及时间安排方面的设计。 讨论：请根据课本中实验流程示意图和提供的三个资料，然后完成实验设计流程。 。（课后完成） 5、 课堂小结： 。六、当堂检测五、课堂检测：1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是 （ ） A.在液体培养基上进行 B.至少接种一种细菌 C.接种一个细菌
5、D.及时补充消耗的营养物质 2.使用选择培养基的目的是 （ ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是 ( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入 （） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐 1.2统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有 和 。（2）稀释涂布平板法统计样品中 的数目的原理当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个
6、 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有 直接计数。1.3设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养 的培养基作为空白对照。【开拓视野1】显微镜直接计数将待测样品与等量的已知红细胞含量的血液混匀后，涂布在载玻片上，经固定染色后，在显微镜下随机选取若干个视野进行计数，得出细菌与红细胞的比例，再根据红细胞的含量计算出单位体积内的细菌数目。也可以用血球计数板直接统计细菌含量。2.【合作探究】小组讨论，得出一致结论，
7、并展示小组讨论成果！【思考1】、筛选菌株的培养基KH2PO4 NaHPO4 MgSO4 H2O 葡萄糖 尿素琼脂 1.4g 2.1g 0.2g 10.0g 1.0g 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。思考1、该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 碳源： 氮源： 2、此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 。只有产生脲酶的细菌才能利用 作为氮源而生存。1.【基础知识】（记忆） 关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下： 1 取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 中。 2制备 ：准备牛肉膏蛋
8、白胨培养基和选择培养基 将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 3微生物的 与观察 将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液 ，转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102 依次等比稀释至107稀释度，并按照由107103稀释度的顺序分别吸取 进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。 将涂布好的培养皿放在30温度下培养，及时观察和记录。 挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含 培养基的斜面中，观察能否产生如教材中图2-lO的颜色反应。 4细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。统计菌落数目： 1、活体计数法-稀释涂布平板法 （1）操作方法：稀释涂布平板 统计菌落数。 （2）原理：1个菌落1个活菌。 （3）统计原则 、选 30300 个菌落的平板统计。 、每个稀释度取3个平板取其平均值。课后学习高质量按时完成作业测评【课后反思】5
2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数-导学案
