兽药残留分析技术PPT课件

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1、 陈 品华 中 农 业 大 学 动 物 医 学 院 第 一 节 概 述 一 、 基 本 概 念指 给 畜 禽 等 动 物 用 药 后 蓄 积 或 贮 存 在 动 物 细 胞 、 组 织 和器 官 内 的 药 物 或 化 学 物 质 的 原 形 、 代 谢 产 物 和 杂 质 。1.兽 药 残 留 （ veterinary drug residue) 2.总 残 留 物 （ total residue)指 食 品 动 物 用 药 后 ， 动 物 产 品 的 任 何 食 用部 分 中 某 种 药 物 残 留 的 总 和 ， 或 指 动 物 组 织 中可 被 提 取 的 原 型 药 物 及 任 何

2、具 有 毒 理 学 意 义 的代 谢 产 物 的 总 称 。 3.标 示 残 留 物 （ marker residue)4.靶 组 织 (target tissue）指 总 残 留 物 中 ， 在 动 物 体 内 消 除 缓 慢 、残 留 量 高 、 残 留 期 长 、 性 质 稳 定 、 有 灵 敏 方法 检 测 的 组 分 。指 残 留 量 高 、 残 留 物 最 后 消 除 的 组 织 。 二 、 兽 药 残 留 的 原 因不 正 确 用 药不 遵 守 休 药 期宰 前 用 药 物 掩 饰 临 床 症 状 ， 以 逃 避 检 查以 未 经 批 准 的 药 物 作 饲 料 添 加 剂药 物

3、 标 签 指 示 用 法 不 当 加 工 贮 存 过 程 中 污 染接 触 环 境 中 污 染 的 药 物 三 、 兽 药 残 留 种 类 -兴 奋 剂 克 伦 特 罗 沙 丁 胺 醇 来 克 多 巴 胺抗 菌 药 硝 基 咪 唑 类 、1.违 禁 药 物 甲 状 腺 抑 制 剂 丙 硫 氧 嘧 啶 甲 巯 咪 唑激 素 己 烯 雌 酚 、 睾 酮 、 群 勃 龙 、 雌 二 醇 、 孕 酮 等镇 静 剂 氯 丙 嗪 、 安 定 、 利 血 平皮 质 激 素 类 地 塞 米 松 、 氢 化 可 的 松呋 喃 类 、 氯 霉 素 2.毒 性 较 大 、 休 药 期 较 长 的 药 物呋 喃 唑

4、酮 阿 维 菌 素 类 磺 胺 类 磺 胺 二 甲 嘧 啶 磺 胺 喹 恶 啉 喹 恶 啉 类 卡 巴 氧 喹 乙 醇 乙 酰 甲 喹二 氨 嘧 啶 类 TMP四 环 素 类 金 霉 素 土 霉 素苯 并 咪 唑 类 阿 苯 达 唑 氟 苯 咪 唑 左 咪 唑 氯 羟 吡 啶 双 甲 咪 二 嗪 农 等 工 业 污 染 物 如 重 金 属 环 境 污 染 物 如 二 恶 英3.其 他 四 、 兽 药 残 留 的 危 害过 敏 反 应毒 性 作 用激 素 样 作 用耐 药 性环 境 污 染 1.过 敏 反 应 经 常 食 用 含 低 剂 量 抗 菌 药 物 的 食 品 能 使 易感 个 体 出

5、现 过 敏 反 应 ， 如 青 霉 素 、 四 环 素 、 磺胺 胺 类 药 物 及 某 些 氨 基 糖 苷 类 抗 生 素 等 。 这 些 药 物 具 有 抗 原 性 ， 刺 激 机 体 内 抗 体 的形 成 ， 造 成 过 敏 反 应 ， 严 重 者 可 引 起 休 克 、 喉头 水 肿 、 呼 吸 困 难 等 严 重 症 状 。 呋 喃 类 引 起 人 体 的 不 良 反 应 主 要 是 胃 肠 反 应 和过 敏 反 应 ， 表 现 在 以 周 围 神 经 炎 、 药 热 、 嗜 酸 性 白细 胞 增 多 为 特 征 的 过 敏 反 应 。 磺 胺 类 药 物 的 过 敏 反 应 表 现

6、 为 皮 炎 、 白 细 胞 减少 、 溶 血 性 贫 血 和 药 热 。 抗 菌 药 物 残 留 所 致 变 态 反应 比 起 食 物 引 起 的 其 他 不 良 反 应 所 占 的 比 例 小 。青 霉 素 药 物 引 起 的 变 态 反 应 ， 轻 者 表 现 为 接 触性 皮 炎 和 皮 肤 反 应 ， 严 重 者 表 现 为 致 死 性 过 敏 性 休克 。 2.毒 性 作 用急 性 中 毒 如 -兴 奋 剂慢 性 中 毒 磺 胺 类 肾 损 害氯 霉 素 再 生 障 碍 性 贫 血四 环 素 骨 骼 和 牙 齿 发 育 苯 并 咪 唑 类 致 畸 、 致 癌 、 致 突 变二 恶

7、英 肺 、 肝 肿 瘤 3.耐 药 性动 物 在 经 常 反 复 接 触 某 一 种 抗 菌 药 物 后 ， 其 体内 的 敏 感 菌 株 将 受 到 选 择 性 的 抑 制 ， 细 菌 产 生 耐 药性 ， 使 耐 药 菌 株 大 量 繁 殖 。人 体 经 常 食 用 含 药 物 残 留 的 动 物 性 食 品 ， 动 物体 内 的 耐 药 菌 株 可 传 播 给 人 体 ， 当 人 体 发 生 疾 病 时 ，就 给 临 床 上 感 染 性 疾 病 的 治 疗 带 来 一 定 的 困 难 ， 延误 正 常 的 治 疗 。 已 发 现 长 期 食 用 低 剂 量 的 抗 生 素 能 导 致 金

8、 黄 色葡 萄 菌 耐 药 菌 株 的 出 现 ， 也 能 引 起 大 肠 杆 菌 耐 药 菌株 的 产 生 。 在 正 常 条 件 下 ， 人 体 肠 道 内 的 菌 群 与 人 体 能 相互 适 应 ， 如 某 些 菌 群 能 抑 制 其 他 菌 群 的 过 度 繁 殖 ，某 些 菌 群 能 合 成 B族 维 生 素 和 维 生 素 K以 供 机 体 使用 。 过 多 应 用 药 物 会 使 这 种 平 衡 发 生 紊 乱 ， 造 成 一些 非 致 病 菌 死 亡 ， 使 菌 群 的 平 衡 失 调 ， 从 而 导 致 长期 的 腹 泻 或 引 起 维 生 素 缺 乏 等 反 应 。 4.

9、激 素 样 作 用 -兴 奋 剂 （ 瘦 肉 精 ） 引 起 中 毒 。长 期 食 用 含 低 剂 量 激 素 动 物 性 食 品 ， 肿 瘤 发 生率 上 升 。同 化 激 素 用 于 促 进 动 物 生 长 ， 提 高 饲 料 利 用 率 ，目 前 多 数 国 家 已 禁 用 。 5.环 境 污 染动 物 用 药 后 ， 药 物 随 粪 、 尿 排 到 环 境 中 ， 对 土壤 微 生 物 和 昆 虫 、 水 体 均 造 成 影 响 ；在 土 壤 中 检 测 到 金 霉 素 ；在 土 壤 中 残 留 的 药 物 ， 可 通 过 生 物 富 集 和 生 物放 大 作 用 影 响 人 和 其

10、他 动 物 ； 五 、 最 高 残 留 限 量 和 休 药 期1.食 品 动 物 （ food-producing animal) ： 指 各 种 人 工养 殖 供 人 食 用 的 动 物 。2.可 食 组 织 （ edible tissue) ： 指 全 部 可 食 用 的 动 物 组织 ， 包 括 肌 肉 和 脏 器 等 。 3.最 高 残 留 限 量 （ maximum residue limit， MRLs)：指 食 品 动 物 用 药 后 ， 允 许 存 在 于 食 物 表 面 或 内部 的 残 留 药 物 或 化 学 物 质 的 最 高 量 或 浓 度 。 一 般 以鲜 重 计 ，

11、 用 mg/kg、 g /kg或 mg/kg、 g/L。 兽 药 最 高 残 留 限 量 （ MRL） 的 确 定最 大 无 毒 性 作 用 剂 量 是 根 据 最 敏 感 实 验 动 物（ 一 般 为 大 鼠 、 兔 、 狗 ） 的 毒 理 学 试 验 ， 对 动 物 不产 生 任 何 毒 性 的 最 大 剂 量 。 实 际 是 一 种 从 实 验 动 物外 推 到 人 的 安 全 性 数 据 。 具 体 来 讲 ， 就 是 根 据 兽 药的 三 性 （ 急 性 、 亚 慢 性 慢 性 ） 和 三 致 （ 致 突 变 、致 畸 胎 、 致 癌 ） 试 验 结 果 得 来 。（ 1） 最 大

12、无 毒 性 作 用 剂 量 （ No observed effect level， NOEL） 的 确 定 （ 2） 每 日 允 许 摄 入 量 （ Acceptable Daily Intake，ADI） 的 确 定 每 日 允 许 摄 入 量 是 指 可 以 被 一 个 人 安 全 地 消 费而 不 产 生 任 何 作 用 的 量 。 ADI=NOEL/安 全 因 子 ， 其 中安 全 因 子 ， 如 果 NOEL是 根 据 急 性 试 验 得 到 的 ， 安 全因 子 为 1000； 如 果 NOEL是 根 据 慢 性 试 验 得 到 的 ， 安全 因 子 则 为 100。 （ 3） 最

13、 高 残 留 限 量 （ Maximum Residue Limit， MRL）的 确 定根 据 ADI， 计 算 出 各 种 组 织 中 的 最 高 残 留 限 量 。 天组 织 消 费 量 天/60kgADIMRL 其 中 ， 组 织 消 费 量 如 下 （ 按 WTO推 荐 ） ： 肌 肉 300g 脂 肪 50g 肝 脏 100g 肾 脏 50g 蛋 100g 奶 1.5L 4.休 药 期 （ withdrawal time)指 食 品 动 物 从 停 止 给 药 到 许 可 屠 宰 或 其 产 品 许可 上 市 的 间 隔 时 间 。 （ 1） 影 响 药 物 残 留 消 除 和 休

14、 药 期 的 因 素药 物 的 剂 型 与 剂 量给 药 途 径合 并 用 药 和 重 复 用 药动 物 年 龄 、 性 别 、 品 种 、 个 体 差 异胃 肠 道 环 境 及 机 能 状 态 （ 2） 休 药 期 估 算 方 法估 算 休 药 期 的 程 序 确 定 靶 组 织 确 定 被 测 残 留 物 研 究 组 织 残 留 消 除 规 律 数 据 统 计 处 理 根 据 动 物 实 验 估 算 按 实 际 给 药 剂 量 和 途 径 给 药 后 停 药 在 MRLs附 近 设 置 至 少 4个 采 样 点 ， 采 取 靶 组 织 样 品 对 样 品 进 行 残 留 分 析 绘 制 残

15、 留 消 除 半 对 数 曲 线 图 ， 用 直 线 回 归 法 对 数 据 进 行 统 计 处 理 将 MRLs作 为 统 计 量 估 计 时 间 的 99%置 信 区 间 ， 取 上 限 时 间 作 为 休 药期根 据 组 织 药 动 学 参 数 估 算 六 、 监 控 和 防 范 兽 药 残 留 的 措 施加 强 药 物 生 产 和 使 用 管 理 ， 完 善 法 规严 格 规 定 药 物 的 休 药 期 和 允 许 残 留 量对 药 物 进 行 安 全 性 毒 理 学 评 价加 强 兽 药 残 留 分 析 方 法 的 技 术 研 究 第 二 节 残 留 分 析 1.筛 选 方 法 （

16、SCREENING METHOD）指 在 一 定 浓 度 内 ， 用 于 快 速 检 测 大 量 样 品 的 方 法 。如 微 物 法 、 免 疫 化 学 法 。一 、 残 留 分 析 中 的 常 用 术 语v 筛 选 方 法 的 要 求 :必 须 限 定 方 法 的 特 异 性允 许 出 现 假 阳 性 ， 最 低 限 度 控 制 假 阴 性检 测 限 和 定 量 限 必 须 适 合 检 测 目 的方 法 快 速 简 便 2.常 规 方 法 （ ROUTINE MEITHOD） 指 可 以 基 本 确 定 样 品 中 某 种 残 留 物 存 在 和 确 定 其浓 度 的 方 法 。v 要 求

17、具 有 准 确 的 定 量 分 析 能 力不 一 定 具 有 准 确 的 定 性 分 析 能 力v 方 法 HPLCGC 3.确 证 方 法 指 用 于 测 定 并 确 证 筛 选 方 法 和 常 规 方 法 检 测 为 阳 性 结 果的 样 品 中 是 否 存 在 药 物 残 留 及 残 留 量 。v 确 证 方 法 的 要 求特 异 性 高 、 定 量 分 析 能 力 强 精 密 度 、 准 确 度 达到 规 定检 测 限 和 定 量 限 适 合 检 测 目 的 v 常 用 方 法 GC-MS、 LC-MS、 GC-IR、 LC-IR 4.参 比 方 法 （ REFERENCE METHO

18、D）指 以 被 某 国 家 或 国 际 机 构 验 证 和 接 受 的 法 定 性 确 证方 法 ， 可 用 于 验 证 有 关 方 法 的 精 确 度 和 精 密 度 。 5.标 准 分 析 物 （ STANDARD ANALYTE）指 在 分 析 中 用 作 参 比 的 高 纯 度 已 知 物 质 ， 一 般用 于 制 作 标 准 曲 线 或 测 定 添 加 回 收 率 。 6.特 异 性 （ SPECIFICITY ）指 样 品 基 质 中 其 他 组 分 共 存 时 该 分 析 方 法 对 待测 物 的 分 辨 能 力 ， 有 时 称 选 择 性 。 7.准 确 度 （ ACCURAC

19、Y）指 测 定 值 与 其 真 实 值 的 接 近 程 度 ， 反 应 分 析 结 果的 正 确 性 。 通 常 用 添 加 回 收 率 （ recovery） 表 示 。 %100% 添 加 值测 定 值 空 白 值） 回 收 率 （ 添 加 浓 度 m（ mg/kg） 回 收 率 （ ） m0.1 80 110 0.1 m0.01 70 110 001 m0.001 60 120 m0.001 50 120不 同 添 加 浓 度 的 回 收 率 原 则 要 求 如 下 ： 8.精 密 度 （ PRECISION）指 在 限 定 条 件 下 ， 用 某 种 测 定 方 法 重 复 测 定 同

20、 一均 质 样 品 所 得 测 定 值 的 彼 此 接 近 程 度 。 反 应 分 析 结 果的 重 复 性 和 重 现 性 。 通 常 用 变 异 系 数 （ CV） 或 相 对 标准 差 （ RSD） 表 示 。 %100(%) ）平 均 值 （ ）标 准 差 （ XSDCV 不 同 待 测 物 浓 度 的 精 密 度 要 求 9.重 复 性重 复 性 （ repeatability） ： 指 在 短 期 内 相 同 条 件 下 ， 测 得的 同 一 样 品 各 个 相 互 独 立 分 析 结 果 的 符 合 程 度 。相 同 条 件 ： 同 一 实 验 室 、 同 一 操 作 者 、 同

21、 一 批 号 试剂 、 同 一 样 品 、 同 一 仪 器 、 同 样 分 析 方 法表 示 方 法 ：日 内 变 异 系 数 或 批 内 变 异 系 数日 间 变 异 系 数 或 批 间 变 异 系 数 10.重 现 性重 现 性 （ reproducibility） ： 指 在 不 同 试 验 条 件 下 ，测 得 同 一 样 品 各 个 相 互 独 立 的 分 析 结 果 的 符 合 程 度 。不 同 条 件 ： 不 同 实 验 室 、 不 同 操 作 者 、 不 同 仪 器 、同 一 样 品 、 相 同 的 分 析 方 法 。 11.检 测 限 与 定 量 限检 测 限 （ limit

22、 of detection， LOD） ： 指 某 种 分 析方 法 能 够 从 样 品 的 背 景 信 号 中 检 出 待 测 物 存 在 的 最 低 浓度 。 反 应 分 析 方 法 的 灵 敏 度 ， 一 般 为 空 白 测 定 平 均 值 加2倍 或 3倍 标 准 差 （ 信 /噪 3） 。 定 量 限 （ limit of quantitation） ： 指 某 种分 析 方 法 能 够 对 样 品 待 测 物 进 行 定 量 测 定 的 最 低 浓度 。 具 有 精 密 度 和 准 确 度 要 求 ， 反 应 方 法 在 低 浓 度端 分 析 结 果 的 可 靠 性 ， 为 空 白

23、 测 定 平 均 值 加 10倍 标准 差 。 二 、 残 留 分 析 的 原 理兽 药 残 留 的 特 点 残 留 水 平 低 ， 大 多 在 0.001 1mg/kg 样 品 基 质 复 杂 ， 残 留 物 不 易 分 离 纯 化v 基 本 原 理 ： 用 物 理 或 化 学 的 方 法 将 待 测 残 留 组 分 从样 品 中 提 取 、 分 离 、 纯 化 ， 溶 于 适 当 溶 剂 ， 利 用 其光 学 或 波 谱 特 性 ， 进 行 定 性 定 量 检 测 。 三 、 残 留 分 析 方 法 的 分 类1.按 分 离 或 检 测 原 理 分 ：v 理 化 分 析 法 波 谱 法 、

24、 色 谱 法 及 联 用 技 术 HPLC、 GC、 TLC、 - 、 LC-MSv 免 疫 分 析 法 放 射 免 疫 酶 联 免 疫 、 荧 光 免 疫 v 生 物 测 定 法 微 生 物 法 放 射 受 体 测 定 法 筛 选 方 法 常 规 方 法 确 证 方 法 参 比 方 法3.按 被 测 组 分 分 单 组 分 多 组 分2.按 残 留 分 析 目 的 和 用 途 分 四、残留分析方法的建立查 阅 文 献 、 设 计 分 析 方 法建 立 基 本 测 定 方 法 包 括 确 定 测 定 方 法 、 线 性 范 围建 立 样 品 处 理 方 法绘 制 标 准 曲 线 外 标 法 内

25、 标 法确 定 检 测 限 和 定 量 限 测 定 样 品 回 收 率 和 变 异 系 数稳 定 性 分 析 温 度 放 置 时 间 （一）残留检测方法标准结构 （二）样品提取及分析技术路线 （三）分析方法评价及其标准检 测 限 与 定 量 限添 加 回 收 率变 异 系 数线 性 范 围特 异 性 与 参 比 方 法 进 行 相 关 性 比 较实 验 室 协 同 研 究 （四）分析结果判定阳 性 结 果MRL为 0 残 留 量 分 析 方 法 的 检 测 限确 定 MRL 残 留 量 MRL筛 选 方 法 和 常 规 方 法 需 用 确 证 方 法 确 证阴 性 结 果MRL为 0 未 能 检 出确 定 MRL 残 留 量 MRL筛 选 方 法 和 常 规 方 法 可 以 肯 定 （五）分析方法报告概 述 依 据 、 现 状 、 问 题样 品 制 备 与 保 存测 定 方 法方 法 评 价附 录 标 准 品 、 空 白 样 品 、 添 加 标 准 品 样 品 、 实测 样 品 的 色 谱 图 、 标 准 曲 线 图 参 考 文 献