乡镇检验人员培训免疫课件

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1、乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫1 第 一 章 免 疫 学 基 础 知 识2010. 4. 3 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 2 一 、 免 疫 （ Immune） 的 定 义n 免 疫 的 最 初 概 念 ： 免 除 瘟 疫n 免 疫 的 传 统 概 念 ： 抗 感 染 免 疫n 现 代 免 疫 的 概 念 ： 是 机 体 识 别 “ 自 身 ” 与“ 非 己 ” 抗 原 ， 对 “ 非 己 ” 抗 原 产 生 排 斥 作用 ， 对 自 身 抗 原 形 成 天 然 耐 受 的 一 种 生 理 功能 。 第 一 节 免 疫 的 基 本 概 念 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免

2、 疫 3 正 常 情 况 下 ， 这 种 生 理 功 能 对 机 体 有 益 ，可 产 生 抗 感 染 、 抗 肿 瘤 和 维 持 机 体 生 理 平 衡及 稳 定 的 保 护 作 用 。 当 免 疫 功 能 失 调 时 ， 在 一 定 条 件 下 ， 也会 对 机 体 产 生 不 利 的 影 响 ， 如 ： 超 敏 反 应 、自 身 免 疫 病 和 肿 瘤 等 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 4 二 、 免 疫 的 功 能 免 疫 功 能 是 免 疫 系 统 在 识 别 和 清 除 “ 非 己 ” 抗 原 的过 程 中 所 产 生 的 各 种 生 物 学 作 用 的 总 称 。

3、主 要 包 括 ： 1.免 疫 防 御 （ Immunologic defence)： 是 机 体 针 对 外 来 病 原 体 的 抗 感 染 功 能 。 正 常 时可 防 御 病 原 体 的 感 染 ； 防 御 功 能 过 强 可 产 生 超 敏 反应 ， 过 弱 则 表 现 为 免 疫 缺 陷 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 5 2.免 疫 自 稳 (immunologic homeostasis)： 免 疫 系 统 维 持 机 体 内 环 境 相 对 稳 定 的生 理 机 能 。 正 常 ： 可 及 时 清 除 体 内 损 伤 、 衰 老 、 变 性 的 细胞 和 抗 原 抗

4、 体 复 合 物 ， 而 对 自 身 成份 保 持 免 疫 耐 受 ； 异 常 ： 可 发 生 生 理 功 能 紊 乱 、 自 身 免 疫 病 等 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 6 3.免 疫 监 视 (immunologic surveillance)： 是 机 体 免 疫 系 统 识 别 、 清 除 体 内 突 变 、 畸变 细 胞 以 及 被 病 毒 感 染 细 胞 的 生 理 性 保 护 作 用 。 丧 失 ： 机 体 突 变 细 胞 失 控 ， 可 能 导 致 肿 瘤发 生 或 出 现 病 毒 的 持 续 感 染 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 7 乡 镇

5、检 验 人 员 培 训 免 疫 8 三 、 免 疫 的 类 型 及 其 特 征一 、 固 有 免 疫 ：概 念 ： 出 生 时 即 有 的 天 然 免 疫 ， 经 遗 传 获 得 ， 非 特 异 性 ， 也 称 非 特 异 性 /先 天 性 免 疫 。组 成 ： 屏 障 结 构 、 吞 噬 细 胞 、 某 些 体 液 因 子 。二 、 适 应 性 免 疫 ：概 念 ： 出 生 后 接 触 特 定 抗 原 获 得 的 针 对 该 物 质 的 免 疫 ， 也 称 获 得 性 /特 异 性 免 疫 。包 括 体 液 免 疫 、 细 胞 免 疫 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 9 第 二

6、节 抗 原 基 础 知 识 一 、 抗 原 概 念 （ antigen， Ag） 是 能 刺 激 机 体 免 疫 系 统 产 生 特 异 性免 疫 应 答 、 并 能 与 相 应 的 应 答 产 物 （ 抗体 和 /或 效 应 淋 巴 细 胞 ） 在 体 内 或 体 外 发生 特 异 性 结 合 的 物 质 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 10 二 、 抗 原 的 特 性 1 免 疫 原 性 ： 抗 原 能 刺 激 特 异 性 免 疫细 胞 ， 使 之 活 化 、 增 生 、 分 化 ， 最 终 产生 抗 体 和 效 应 淋 巴 细 胞 的 特 性 。2 免 疫 反 应 性 : 抗

7、 原 可 在 体 内 、 外 与 相 应 的 抗 体 /效 应 淋 巴 细 胞 发 生 特 异 性 结合 ， 产 生 免 疫 反 应 的 特 性 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 11 三 、 完 全 抗 原 、 半 抗 原 、 载 体1、 完 全 抗 原 （ complete antigen): 既有 免 疫 原 性 又 有 抗 原 性 的 物 质 ， 如 多 数 蛋白 质 分 子 。2、 半 抗 原 （ Hapten):又 称 不 完 全 抗 原 ，单 独 存 在 时 只 具 有 免 疫 反 应 性 而 无 免 疫 原性 的 物 质 ， 如 二 硝 基 酚 、 青 霉 素 。 乡

8、 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 12 3、 载 体 与 半 抗 原 结 合 后 使 其 具 有 免 疫 原 性 的物 质 ， 即 半 抗 原 +载 体 =完 全 抗 原 。 四 、 耐 受 原 与 变 应 原 1 耐 受 原 (tolerogen):引 起 机 体 产 生免 疫 耐 受 的 抗 原 。 2 变 应 原 (allergen): 引 起 机 体 产 生变 态 反 应 的 抗 原 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 13 五 、 抗 原 的 特 异 性 与 交 叉 反 应 免 疫 原 性 的 特 异 性 ： 某 种 抗 原 只 能 刺 激 机体 产 生 某 种 特 定

9、的 应 答 产 物 。如 ： 伤 寒 杆 菌 免 疫 动 物 产 生 抗 伤 寒 杆 菌 抗 体 抗 原 性 的 特 异 性 ： 抗 原 只 能 与 其 相 应 的 抗体 或 致 敏 淋 巴 细 胞 结 合 。如 ： 伤 寒 杆 菌 只 能 与 抗 伤 寒 杆 菌 抗 体 结 合 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 14 1 、 表 位 与 抗 原 决 定 簇 抗 原 决 定 簇 （ antigenic determinant,AD） : 又 称 表 位 （ epitope） ， 指 抗 原 分 子 中 决 定 抗 原 特 异 性 的 特 殊 的 化 学 基 团 ， 是 抗 原 分 子 与

10、抗 体 及 TCR/BCR受 体 特 异 结 合 的 部 位 ， 也 是 被免 疫 细 胞 识 别 的 标 志 及 免 疫 反 应 具 有 特 异 性 的物 质 基 础 。 表 位 的 性 质 、 数 目 和 空 间 构 象 决 定 了 抗 原 的 特 异 性 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 15 2、 抗 原 抗 体 反 应 的 特 异 性 抗 原 的 特 异 性 是 相 对 的 ， 因 为 天 然 的 抗原 分 子 表 面 可 存 在 着 多 种 表 位 ， 不 同 的 抗原 分 子 表 面 存 在 相 同 或 相 似 的 表 位 ， 可 引起 交 叉 反 应 。3、 抗 原

11、结 合 价 ： 能 和 相 应 抗 体 结 合 的 功 能 性 表 位 的 数 目 半 抗 原 单 价 天 然 抗 原 多 价 多 价 抗 原 可 同 时 与 多 种 /多 个 抗 体 结 合 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 16 4、 共 同 抗 原 和 交 叉 反 应 （ 1） 共 同 抗 原 ： 两 种 或 两 种 以 上 抗 原 具有 的 相 同 或 相 似 的 表 位 。 表 位 1 表 位 2 表 位 3表 位 1 A抗 原 B抗 原 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 17 （ 2） 交 叉 反 应 ： 抗 体 与 具 有 相 同 或 相 似 的 表 位 的抗 原 之

12、 间 出 现 的 反 应 。 血 清 (Ab1、 Ab2) + AgA 特 异 性 反 应 Ab1+AgB 交 叉 反 应 意 义 与 疾 病 发 生 有 关 ： 如 急 性 肾 小 球 肾 炎 用 于 疾 病 诊 断 ： 如 外 斐 反 应表 位 1 表 位 3表 位 1A抗 原 B抗 原表 位 2 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 18 1、 病 原 微 生 物 及 其 代 谢 产 物（ 1） 病 原 微 生 物 如 细 菌 、 病 毒 、 螺 旋 体 ，对 机 体 有 较 强 的 免 疫 原 性 。（ 2） 细 菌 的 代 谢 产 物 外 毒 素 ： 类 毒 素 :外 毒 素 经

13、0.3%-0.4%的 甲 醛 处 理后 ,使 其 失 去 毒 性 而 保 留 免 疫 原 性 的 物 质 。六 、 医 学 上 重 要 的 抗 原 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 19 2、 动 物 免 疫 血 清 用 类 毒 素 免 疫 动 物 后 ， 动 物 的 血 清 中可 含 有 大 量 的 抗 毒 素 ， 即 动 物 的 免 疫 血 清 。这 种 抗 血 清 对 人 体 而 言 既 提 供 特 异 性 抗 体 ，又 是 异 种 蛋 白 。3、 异 嗜 性 抗 原 又 称 Forssman抗 原 ， 指 一 类 与 种 属 无关 ， 存 在 于 人 、 动 物 、 植 物 和

14、微 生 物 之 间的 共 同 抗 原 。 如 ： 溶 血 性 链 球 菌 /人 肾 小球 基 底 膜 之 间 的 共 同 抗 原 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 20 4、 同 种 异 型 抗 原 同 一 种 属 不 同 个 体 之 间 的 不 同 抗 原 。如 人 类 的 ABO、 Rh血 型 抗 原 、 HLA等 。5、 自 身 抗 原 隐 蔽 的 自 身 抗 原 与 自 身 免 疫 系 统 隔 绝的 组 织 受 到 外 伤 等 因 素 而 暴 露 ， 如 ： 脑 组织 、 精 子 外 伤 暴 露 。 被 修 饰 的 自 身 抗 原 自身 组 织 在 理 化 、 生 物 等 作

15、 用 下 结 构 发 生 改变 ， 如 ： 变 性 的 IgG。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 21 6、 肿 瘤 抗 原 肿 瘤 特 异 性 抗 原 （ Tumor Specific Antigen， TSA）肿 瘤 相 关 抗 原 （ Tumor Associated Antigen， TAA）7、 超 抗 原 (super antigen,SAg) 只 需 极 低 浓 度 即 可 激 活 5%-20%T细 胞 克 隆 ，产 生 极 强 的 免 疫 应 答 的 抗 原 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 22 8、 其 他 有 丝 分 裂 原 ： 植 物 血 凝 素 、

16、刀 豆 蛋 白 A T细 胞 细 菌 脂 多 糖 、 葡 萄 球 菌 A蛋 白 B细 胞 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 23 七 佐 剂 概 念 ： 一 类 与 抗 原 一 起 或 预 先 注 入 机体 ， 能 增 强 机 体 对 抗 原 的 免 疫 应 答 或 改 变免 疫 应 答 类 型 的 非 特 异 性 免 疫 增 强 剂 。 如 ：羊 毛 脂 ， 石 蜡 油 ， 内 毒 素 。 常 见 为 福 氏 佐剂 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 24 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 25 一 概 述Ab： 是 由 抗 原 刺 激 B 淋 巴 细 胞 转 化 为浆

17、细 胞 后 所 产 生 ， 并 能 与 相 应 抗 原特 异 性 结 合 、 具 有 免 疫 功 能 的 球 蛋白 ， 也 称 为 抗 体 （ antibody,Ab） 。Ig： 把 具 有 抗 体 活 性 或 化 学 结 构 与 抗 体 相似 的 球 蛋 白 统 称 为 免 疫 球 蛋 白 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 26Ig与 Ab的 关 系Ig与 Ab的 区 别 ： Ig是 化 学 结 构 的 概 念 ， Ab 是生 物 学 功 能 的 概 念 。 所 有 的 Ab都 是 Ig， 但 Ig并非 都 有 抗 体 活 性 。 IgAb 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫

18、27 二 、 Ig的 基 本 结 构1、 基 本 结 构 ： 由 两 条 相 同 的 重 链 和两 条 相 同 的 轻 链 通 过 二 硫 键 连 接而 成 的 四 肽 链 结 构 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 28 抗 体 的 立 体 模 型 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 29Ig的 基 本 结 构 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 30 2、 免 疫 球 蛋 白 的 功 能 区 VH和 VL： 与 抗 原 特 异 性 结 合 的 部 位 ； CL和 CH1： 某 些 同 种 异 型 Ig遗 传 标 记 ； IgG的 CH2、 IgM的 CH3： 补 体 C1q

19、结 合 点 激 活 补 体 经 典 途径 ； CH3/CH4 结 合 不 同 细 胞 表 面 FcR 不 同 生 物学 效 应 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 31 1、 IgG 血 清 含 量 最 多 ； 半 衰 期 最 长 ； 出 生 后 3个 月 开 始 合 成 ， 3-5岁 接 近 成 人 水 平 ； 是 唯 一 能 通 过 胎 盘 的 Ig， 发 挥 自 然 被 动 免 疫功 能 ； 具 有 活 化 补 体 经 典 途 径 的 能 力（ IgG3IgG1IgG2） ； 具 有 调 理 作 用 、 ADCC作 用 。 是 主 要 的 抗 感 染 抗 体 ， 具 有 抗 菌

20、、 中 和 病 毒和 中 和 毒 素 的 作 用 ；三 五 类 Ig的 特 性 和 功 能 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 32 2、 IgM 为 五 聚 体 ， 分 子 量 最 大 ， 称 为 巨 球 蛋白 ； 个 体 发 育 中 最 先 出 现 的 Ig， 胚 胎 晚 期即 能 产 生 ， 脐 带 血 IgM增 高 提 示 胎 内 感染 （ 如 风 疹 病 毒 、 巨 细 胞 病 毒 感 染等 ） ； 抗 原 刺 激 机 体 时 ， 是 体 内 最 先 产 生 的Ig； 血 清 IgM升 高 说 明 有 近 期 感 染 ； 有 强 大 激 活 补 体 能 力 ， 在 机 体 免 疫

21、 防御 的 早 期 中 具 有 重 要 作 用 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 33 3、 IgA 有 单 体 的 血 清 型 和 分 泌 型 IgA； 分 泌 型 IgA是 机 体 粘 膜 局 部 抗 感 染 免 疫 的重 要 因 素 （ 呼 吸 道 和 消 化 道 ） ； 初 乳 中 的 sIgA可 对 婴 幼 儿 发 挥 自 然 被 动免 疫 作 用 。 4、 IgE 属 亲 细 胞 抗 体 ， 可 与 肥 大 细 胞 、 嗜 碱 性粒 细 胞 表 面 Fc R结 合 ， 介 导 I型 超 敏 反应 ； 是 血 清 中 含 量 最 低 的 Ig； 主 要 由 呼 吸 道 、

22、胃 肠 道 粘 膜 固 有 层 的 浆细 胞 产 生 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 34 5、 IgD 血 清 中 含 量 低 ， 其 生 物 学 作 用 尚 不 清楚 ； SmIgD可 作 为 B细 胞 分 化 成 熟 标 记 ， 成熟 B细 胞 同 时 表 达 SmIgM和 SmIgD。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 35 4 免 疫 球 蛋 白 的 生 物 学 活 性(1)特 异 性 结 合 抗 原(2)激 活 补 体 (3)通 过 与 细 胞 FcR结 合 发 挥 生 物 效 应 ：(4)选 择 性 传 递 IgG通 过 胎 盘 ； sIgA穿 过 粘 膜 的

23、功 能(5)具 有 免 疫 原 性 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 36 免疫球蛋白的功能 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫37 第 二 章 抗 原 或 抗 体 的 检 测南 充 中 心 医 院 免 疫 室 李 欣 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 38 第 一 节 概 述 抗 原 -抗 体 反 应 包 括沉淀反应、凝集反应、溶解反应、补体结合反应和中和反应等 。 抗 原 -抗 体 反 应 可 用 已 知 的 特 异 性 抗 体 检测 未 知 的 抗 原 ； 也 可 用 已 知 的 抗 原 检 测未 知 的 抗 体 。 免 疫 荧 光 技 术 、 免 疫 酶 技 术 、 同

24、 位 素 标记 技 术 、 发 光 免 疫 分 析 等 免 疫 标 记 技 术提 高 了 抗 原 抗 体 反 应 的 敏 感 性 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 39 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 40 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 41 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 42 二 抗 原 -抗 体 反 应 受 多 种 因 素影 响 1 电 解 质 ： 抗 原 -抗 体 反 应 通 常 应 用0.85%的 氯 化 钠 作 为 稀 释 液 ， 以 供 给适 应 浓 度 的 电 解 质 。 2 温 度 ： 一 般 常 使 用 反 应 在 37度 水 浴 或 孵

25、 育 箱 中 进 行 。 3.酸 碱 度 ： 抗 原 -抗 体 反 应 适 应 的 酸 碱度 为 PH6-8。 4.抗 原 抗 体 比 例 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 43 第 二 节 抗 原 抗 体 的 检 测 方 法 凝 集 反 应 沉 淀 反 应 补 体 溶 血 反 应 和 补 体 结 合 反 应 中 和 反 应 用 标 记 抗 体 或 抗 原 进 行 的 抗 原 抗 体 反 应 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 44 一 .凝 集 反 应 (Agglutination) 细 菌 、 红 细 胞 等 颗 粒 性 抗 原 与 相 应 抗 体结 合 后 形 成 凝 集 现

26、象 ， 称 为 凝 聚 反 应 。 (1)、 直 接 凝 集 ： 将 细 菌 或 红 细 胞 与 相应 的 抗 体 直 接 反 应 ， 出 现 细 菌 凝 集 或 红细 胞 凝 集 现 象 。 又 分 为 玻 片 法 和 试 管 法 。 (2)、 间 接 凝 集 ： 将 可 溶 性 抗 原 包 被 在红 细 胞 或 乳 胶 颗 粒 表 面 ， 与 相 应 抗 体 反应 出 现 颗 粒 凝 集 现 象 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 45 血 球 凝 集 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 46 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 47 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫

27、 48 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 49 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 50 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 51 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 52 三 .免 疫 标 记 技 术 用 荧 光 素 、 同 位 素 或 酶 等 示 踪 物 质 标 记抗 体 （ 或 抗 原 ） 进 行 抗 原 -抗 体 反 应 。 标记 物 质 与 抗 体 （ 或 抗 原 ） 的 化 学 连 接 未改 变 抗 体 （ 或 抗 原 ） 的 免 疫 学 特 性 ， 同时 标 记 物 的 性 质 依 然 存 在 ， 因 而 极 大 的提 高 了 反 应 的 灵 敏 度 ， 可 以

28、 对 微 量 物 质进 行 定 量 、 定 性 或 定 位 检 测 。 免 疫 标 记技 术 主 要 有 四 种 基 本 类 型 ： 免 疫 荧 光 技术 、 免 疫 胶 体 金 标 记 技 术 、 免 疫 酶 技 术和 同 位 素 标 记 技 术 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 53 1.免 疫 荧 光 显 微 技 术 用 荧 光 素 （ 常 用 的 有 异 硫 氰 酸 荧 光素 ） ， 与 抗 体 连 接 成 荧 光 抗 体 ， 再 与 待测 标 本 的 抗 原 反 应 ， 置 荧 光 显 微 镜 下 观察 ， 抗 原 抗 体 复 合 物 散 发 出 荧 光 ， 借 此对 标

29、本 中 的 抗 原 作 鉴 定 和 定 位 。 包 括 直 接 荧 光 法 、 间 接 荧 光 法 和 补 体法 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 54 间接免疫荧光法示意图 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 55 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 56 用 荧 光 抗 体 示 踪 或 检 查 相 应 抗 原 的 方 法称 荧 光 抗 体 法 ； 用 已 知 的 荧 光 抗 原 标 记物 示 踪 或 检 查 相 应 抗 体 的 方 法 称 荧 光 抗原 法 。 因 为 荧 光 色 素 不 但 能 与 抗 体 球 蛋白 结 合 ， 用 于 检 测 或 定 位 各 种 抗 原

30、 ， 也可 以 与 其 他 蛋 白 质 结 合 ， 用 于 检 测 或 定位 抗 体 ， 但 是 在 实 际 工 作 中 荧 光 抗 原 技术 很 少 应 用 ， 所 以 人 们 习 惯 称 为 荧 光 抗体 技 术 ， 或 称 为 免 疫 荧 光 技 术 。 2.免 疫 荧 光 测 定 技 术 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 57 （ 1） 时 间 分 辨 荧 光 免 疫 技 术 原 理 ： TRFIA 是 用 三 价 稀 土 离 子 及 其 螯 合剂 作 为 示 踪 物 ， 如 铕 （ Eu3+) 来 标 记 抗 体 、抗 原 ， 待 反 应 体 系 发 生 后 ， 用 时 间 分

31、 辨 荧光 仪 测 定 最 后 产 物 中 的 荧 光 强 度 ， 根 据 荧光 强 度 和 相 对 荧 光 强 度 比 值 ， 判 断 反 应 体系 中 分 析 物 的 浓 度 ， 达 到 定 量 分 析 的 目 的 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 58 优 点 ： 技 术 集 酶 标 记 、 同 位 素 标 记 技 术的 优 点 于 一 身 ， 具 有 灵 敏 度 高 、 特 异 性强 、 稳 定 性 好 、 标 记 物 制 备 简 便 、 储 存时 间 长 、 无 放 射 性 污 染 、 检 测 重 复 性 好 、操 作 流 程 短 、 标 准 曲 线 范 围 宽 和 应 用

32、 范围 广 泛 等 优 点 ， 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 59 注 意 ： 所 用 试 剂 和 器 材 务 必 防 尘 ； Eu3+标 记 物 的 溶 解 和 稀 释 必 须 尽 量 准 确 ， 务 必 在 加 样 1小 时 内 配 制 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 60 （ 2） 电 化 学 发 光 免 疫 分 析技 术 原 理 ： 电 化 学 发 光 免 疫 分 析 技 术 是 继 放 射免 疫 分 析 法 、 酶 免 疫 分 析 法 、 荧 光 免 疫 分析 法 、 化 学 发 光 免 疫 分 析 法 后 的 最 先 进 的免 疫 分 析 方 法 。 电 化

33、学 发 光 （ ECL） 是 一 种在 电 极 表 面 由 电 化 学 引 发 的 特 异 性 化 学 发光 反 应 ， 实 际 上 包 括 了 电 化 学 和 化 学 发 光两 个 过 程 。 直 接 以 Ru(bpy)32+标 记 抗 体 ，反 应 时 标 记 物 直 接 发 光 。 且 Ru(bpy)32+在 电 极 表 面 的 反 应 过 程 可 以 周 而 复 始 进 行 ，产 生 许 多 光 子 ， 使 光 信 号 得 以 增 强 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 61 优 点 ： 非 放 射 性 标 记 物 避 免 了 放 射 性 核素 的 污 染 ； 磁 性 微 粒

34、（ 2.8m） 为 固 相载 体 表 面 积 大 ， 吸 附 率 高 ， 近 似 均 相 免疫 反 应 ； 链 霉 亲 和 素 与 生 物 素 是 最 特 异及 牢 固 的 结 合 ； 应 用 范 围 广 ； 检 测 敏 感度 高 ； 检 测 所 需 样 本 量 少 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 62 2.酶 免 疫 测 定(Enzyme Immunoassay, EIA) 是 用 酶 （ 常 用 的 有 辣 根 过 氧 化 物 酶 HRP和碱 性 磷 酸 酶 AP) 标 记 的 抗 体 进 行 的 抗 原 抗体 反 应 。 EIA将 抗 原 抗 体 反 应 的 特 异 性 与

35、酶催 化 作 用 的 高 效 性 相 结 合 ， 通 过 酶 作 用 于底 物 后 显 色 来 判 定 结 果 。 常 用 的 方 法 有 酶联 免 疫 吸 附 试 验 和 酶 免 疫 组 化 法 ， 前 者 测定 可 溶 性 抗 原 或 抗 体 ， 后 者 测 定 组 织 或 细胞 表 面 的 抗 原 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 63 (1).酶 联 免 疫 吸 附 试 验 (ELISA) 将 已 知 的 抗 原 或 抗 体 吸 附 在 固 相 载 体 （ 聚 苯 乙 烯 微 量 反应 板 ） 表 面 ， 使 抗 原 抗 体 反 应 在 固 相 表 面 进 行 。 用 洗 涤

36、 法 将液 相 中 游 离 成 分 洗 除 。 主 要 有 双 抗 体 夹 心 法 、 间 接 法 BAS-ELISA等 。 (2) ELISA方 法 有 :a.双 抗 体 / 抗 原 夹 心 法 测 抗 原 / 抗 体 : 包 被 在 固 相 载 体 上 的 抗 体 / 抗 原 与 加 入 的 待 测 抗 原 / 抗 体 及 酶 标 抗 体 / 抗 原 三 者 在 一 定 条 件 下 进 行 温 育 反 应 ，若 待 测 样 本 中 含 有 特 异 性 抗 原 / 抗 体 ， 则 在 孔 内 形 成 抗 体 / 抗 原 -抗 原 / 抗 体 -酶 复 合 物 , 经 过 严 格 洗 涤 后

37、,复 合 物 与底 物 作 用 后 将 显 色 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 64 b.间 接 法 测 抗 体 ： 将 抗 原 包 被 在 固 相 载 体 上 ， 样 本中 含 有 特 异 性 抗 体 则 结 合 成 抗 原 抗体 复 合 物 ， 再 与 加 入 的 酶 标 记 抗 抗 体结 合 , 形 成 抗 原 抗 体 酶 标 抗 抗 体复 合 物 。 酶 催 化 底 物 显 色 。C.竟 争 法 测 抗 体 ： 包 被 抗 原 于 固 相 载 体 上 ， 检 测 时加 入 样 本 和 酶 标 记 抗 体 ， 如 样 本 中 含有 特 异 性 抗 体 将 与 酶 标 记 抗

38、体 竟 争 与包 被 的 固 相 抗 原 结 合 形 成 抗 原 抗 体复 合 物 ， 固 相 上 无 酶 催 化 底 物 ， 而 不显 色 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 65 包 被 抗 体 于 固 相 载 体 上 ， 检 测 时 加 入 样 本 、中 和 抗 原 和 酶 标 记 抗 体 ， 如 待 测 样 本 中 含 有 特异 性 抗 体 将 与 固 相 抗 体 竟 争 中 和 抗 原 结 合 形 成抗 体 抗 原 抗 体 复 合 物 ， 固 相 上 无 酶 催 化 底物 ， 而 不 显 色 。 d. 固 相 捕 获 法 测 IgM抗 体 ： 将 抗 抗 体 （ 抗 人 链

39、） 包 被 于 固 相 载 体 上 ，如 样 本 中 含 有 特 异 性 抗 体 则 结 合 成 抗 抗 体 抗体 复 合 物 ， 加 入 抗 原 及 酶 标 记 抗 体 则 进 一 步 形成 抗 抗 体 抗 体 抗 原 酶 标 记 抗 体 复 合 物 。酶 催 化 底 物 并 显 色 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 66 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 67 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 68 ELISA原 理 及 分 类 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 69 3.胶 体 金 法 胶 体 金 法 ， 又 称 金 标 法 ， 是 一 种 常 用 的标 记

40、技 术 ， 是 以 胶 体 金 作 为 示 踪 标 志 物应 用 于 抗 原 抗 体 的 一 种 新 型 的 免 疫 标 记技 术 。 目 前 在 医 学 检 验 中 的 应 用 主 要 是免 疫 层 析 法 和 快 速 免 疫 金 渗 滤 法 ， 具 有简 单 、 快 速 、 准 确 和 无 污 染 等 优 点 。 各类 快 速 检 测 试 纸 均 采 用 免 疫 层 析 法 ， 大量 以 塑 料 为 载 体 的 快 速 检 测 块 均 采 用 快速 免 疫 金 渗 滤 法 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 70 层 析 法 免 疫 胶 体 金 检 测 试 剂 结 构 示 意 图 乡

41、镇 检 验 人 员 培 训 免 疫71 C1金 标 记 鼠 抗 人 HCG;T金 标 记 鼠 抗 人 HCG+HCG+抗 HCG; (测 定 区 ) C2-多 余 金 标 记 鼠 抗 人 HCG+羊 抗 小 鼠 HCG.(质 控 区 )此 图 为 双 抗 体 夹 心 法 ， 显 色 为 阳 性 ； 竞 争 法 相 反 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫72 第 三 章 肝 炎 标 志 物 检 测 南 充 中 心 医 院 免 疫 室 李 欣 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 73 第 一 节 五 型 肝 炎 病 毒 一 .乙 型 肝 炎 病 毒 乙 型 肝 炎 病 毒 （ HBV）

42、 是 具 有 复 杂 结 构 的 DNA病 毒 ， 核 心 内 含 有 一 双 股 DNA和 DNA聚 合 酶 ， 外 面 有一 层 含 有 表 面 抗 原 （ HBsAg） 的 外 衣 HBV的 抗 原 复 杂 ，其 外 壳 中 有 表 面 抗 原 ， 核 心 成 分 中 有 核 心 抗 原 和 e抗原 ， 感 染 后 可 引 起 机 体 的 免 疫 反 应 ， 产 生 相 应 的 抗体 。 HBV感 染 的 种 属 范 围 很 窄 ， 只 局 限 于 人 和 黑 猩 猩 。 1. 乙 型 肝 炎 表 面 抗 原 (HBsAg)和 表 面 抗 体 (抗 -HBs)HBsAg存 在 于 病 毒

43、 颗 粒 的 外 壳 以 及 小 球 形 颗 粒 和管 状 颗 粒 。 于 感 染 后 2-12周 ， 丙 氨 酸 转 氨 酶 (ALT)升高 前 ， 即 可 由 血 内 测 到 ， HBsAg有 “ a” 、 “ b” 、“ y” 、 “ r” 、 “ w” 等 多 种 抗 原 决 定 簇 ， 其 中 “ a”是 共 同 的 抗 原 决 定 簇 ， 在 我 国 的 主 要 是 adr亚 型 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 74 乙 肝 病 毒 解 剖 模 型 （ 1） 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 75 乙 肝 病 毒 解 剖 模 型 （ 2） 乡 镇 检 验 人 员

44、培 训 免 疫 76 抗 -HBs对 同 型 感 染 具 有 保 护 作 用 。 近 期 感 染 者 所 产 HBs属 IgM， 而 长 期 存 在 血 中 的 为 抗 -HBsIgG。 前 S1及 前 S2蛋 白 具 有 与 HBsAg不 同 的 抗 原 。 完 整 的 HBV颗粒 含 有 S蛋 白 及 前 S2蛋 白 ， 而 缺 陷 病 毒 颗 粒 则 无 前 S1蛋 白 。血 清 中 出 现 前 S1、 前 S抗 原 是 HBV活 动 性 复 制 的 标 志 。 HBsAg阳 性 患 者 原 发 性 肝 癌 的 发 病 概 率 为 正 常 人 的 200倍 以 上 ； 2. HBcAg主

45、 要 存 在 于 受 染 的 肝 细 胞 核 内 ， 复 制 后 被 释 至 胞浆 中 ， 由 胞 浆 中 形 成 的 HBsAg包 裹 ， 装 配 成 完 整 的 病 毒 颗 粒后 释 放 入 血 。 血 液 中 一 般 不 能 查 到 游 离 的 HBcAg。 血 中 的Dane颗 粒 经 去 垢 剂 处 理 后 可 以 查 到 其 核 心 部 分 的 HBcAg和DNA聚 合 酶 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 77 早 期 出 现 者 主 要 是 抗 -HBcIgM， 是 近 期 感 染 的 重 要 标 志 ； 抗-HBcIgG出 现 较 迟 ， 但 可 长 期 存 在 。

46、 抗 -HBc对 HBV感 染 无 保护 作 用 。 血 清 中 抗 -HBcIgM阳 性 表 明 体 内 有 HBV复 制 ， 且 有肝 细 胞 损 害 ； 若 抗 -HbcIgG阳 性 且 滴 度 高 ， 伴 以 抗 -HBs阳 性 ，则 为 乙 型 肝 炎 恢 复 期 ； 若 抗 -HBcIgG呈 低 滴 度 ， 抗 -HBcIgM阴 性 ， 而 抗 -HBs阳 性 ， 则 是 既 往 感 染 的 标 志 。3. HBeAg仅 存 在 于 HBsAg阳 性 者 的 血 液 中 ， 通 常 伴 有 肝 内HBVDNA的 复 制 ， 血 中 存 在 较 多 Dane颗 粒 和 HBVDNA聚

47、 合 酶 活性 增 高 ， 因 此 ， HBeAg阳 性 是 病 毒 活 动 性 复 制 的 重 要 指 标 ， 传 染 性 高 。 急 性 肝 炎 患 者 若 HBeAg持 续 阳 性 10周 以 上 ， 则 易于 转 为 持 续 感 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 78 HBV是 通 过 接 触 、 血 液 及 血 制 品 、 母 婴 垂 直 传 播等 方 式 传 播 。 在 我 国 约 有 60 的 乙 肝 病 毒 携 带 者 是 通过 母 婴 垂 直 传 播 的 。二 .甲 型 肝 炎 病 毒 （ HAV） HAV属 微 小 核 糖 核 酸 病 毒 (RNA)主 要 引 起

48、 急 性 感染 ， 经 粪 口 途 径 传 播 ， 有 季 节 性 ， 可 引 起 暴 发 流 行 。三 .丙 型 肝 炎 抗 体 (HCV) 测 定 丙 型 肝 炎 抗 体 是 判 定 急 、 慢 性 丙 型 肝 炎 的 重要 指 标 。 丙 型 肝 炎 病 毒 （ HCV） 是 一 种 具 有 脂 质 外 壳的 RNA病 毒 HCV感 染 者 血 中 的 HCV浓 度 极 低 ， 抗 体 反 应弱 而 晚 ， 血 清 抗 -HCV在 感 染 后 平 均 18周 阳 转 ， 至 肝 功能 恢 复 正 常 时 消 退 ， 而 慢 性 患 者 抗 -HCV可 持 续 多 年 并具 有 传 染 性

49、 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 79 在 2个 月 左 右 的 潜 伏 期 后 ， 只 有 大 约 四 分 之 一 的 病 人 会出 现 食 欲 差 、 疲 倦 、 黄 疸 等 症 状 ； 而 大 部 分 的 患 者 却 没 有任 何 感 觉 。 而 且 ， 感 染 后 大 约 要 经 过 二 十 年 左 右 才 会 出 现肝 硬 化 。 因 此 ， 有 很 多 人 根 本 不 知 道 自 己 经 感 染 。 而 丙 肝可 导 致 肝 脏 慢 性 炎 症 坏 死 和 纤 维 化 ， 部 分 患 者 可 发 展 为 肝硬 化 甚 至 肝 细 胞 癌 （ HCC） ， 对 患 者 的

50、 健 康 和 生 命 危 害 极 大 HCV主 要 通 过 输 血 和 血 制 品 来 进 行 传 播 。 四 .丁 型 肝 炎 病 毒 (HDV) 是 一 种 缺 陷 的 嗜 肝 单 链 RNA病 毒 ， 需 要 HBV的辅 助 才 能 进 行 复 制 ， 因 此 HDV和 HBV同 时 或 重 叠 感 染 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 80 五 .戊 型 肝 炎 病 毒 （ HEV） HEV对 氯 仿 敏 感 ， 在 4 或 20 下 易 被 破 坏 ，在 硷 性 环 境 中 较 稳 定 。 HEV存 在 于 替 伏 末 期 及 发 病初 期 的 患 者 粪 便 中 。 有

51、明 显 的 季 节 性 ， 多 散 发 于 雨季 后 ， 粪 口 传 播 是 主 要 的 传 播 途 径 。 甲 型 和 戊 型 肝 炎 病 毒 主 要 引 起 急 性 感 染 ， 经 粪 口途 径 传 播 ， 有 季 节 性 ， 可 引 起 暴 发 流 行 。 乙 、 丙 、 丁 型 肝 炎 常 表 现 为 慢 性 经 过 ， 主 要 经 血 液传 播 ， 无 季 节 性 ， 多 为 散 发 ， 并 可 发 展 为 肝 硬 化 和肝 细 胞 癌 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 81 第 二 节 五 型 肝 炎 病 毒 （ 抗 体 ） 检 测 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫

52、 82 类 风 湿 性 因 子 （ RF） ： 是 一 种 以 变 性 IgG为 靶 抗 原 的 自 身 抗 体 ， 主 要 存 在 于 类 风 湿性 关 节 炎 患 者 的 血 清 和 关 节 液 中 ， 它 是 一种 抗 变 性 IgG的 抗 体 ， 可 与 IgGFc段 结 合 。检 测 方 法 一 般 有 胶 乳 凝 集 试 验 、 双 抗 原 夹心 ELISA法 、 速 率 散 射 比 浊 法 。 胶 乳 凝 集 试 验 ： 将 变 性 IgG包 被 于 聚 苯 乙烯 胶 乳 颗 粒 上 ， 这 种 致 敏 胶 乳 在 与 待 测 血清 中 的 RF相 遇 时 ， 即 发 生 肉 眼

53、 可 见 的 凝 集 。 正 常 人 1： 20稀 释 血 清 为 阴 性 ， 操 作 要 求56 30分 钟 灭 活 ， （ 灭 活 C1q以 阻 止 假 阳性 凝 集 ） 。 第 三 节 类 风 湿 诊 断 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 83 临 床 意 义 ： 未 经 治 疗 的 类 风 湿 性 关 节 炎 患 者 其 阳 性 率 为80%， 且 滴 定 度 常 在 1： 160以 上 。 RF不 是 仅 在 RA患 者 中 出 现 ，在 SLE、 进 行 性 全 身 性 硬 化 症 等 自 身 免 疫 性 疾 病 患 者 和 部 分老 年 人 中 RF的 阳 性 率 可 达

54、28.9%-50%， 因 而 RF对 RA患 者 并 不具 有 严 格 特 异 性 ， 抗 链 球 菌 溶 血 素 “ O” ， 简 称 抗 “ O” 或 ASO 溶 血 性 链 球 菌 产 生 的 一 种 代 谢 产 物 能 溶 解 红 细 胞 ，所 以 这 种 产 物 被 取 名 为 “ O” 溶 血 素 ， 人 体 感 染 了 A组 溶血 性 链 球 菌 后 ， “ O” 溶 血 素 在 体 内 作 为 一 种 抗 原 物 质存 在 。 为 了 测 定 这 种 能 中 和 链 球 菌 溶 血 素 “ O” 的 抗 体含 量 ， 就 称 为 抗 链 球 菌 溶 血 素 “ O” 试 验 。

55、 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫 84 临 床 意 义 :溶 血 性 链 球 菌 感 染 、 猩 红 热 、丹 毒 、 链 球 性 咽 炎 、 扁 桃 体 炎 。 对 风 湿热 、 急 性 肾 小 球 肾 炎 有 间 接 诊 断 价 值 、若 多 次 检 测 结 果 递 增 ， 并 伴 红 细 胞 沉 降率 加 快 可 有 助 于 诊 断 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫85 第 四 章 免 疫 学 检 验 室 内 质 量 控 制 （ ELISA） 南 充 中 心 医 院 免 疫 室 李 欣 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫86 质 量 管 理 的 基 本 要 求 l

56、免 疫 检 验 要 保 证 检 验 结 果 的 准 确 、 可 靠 、及 时 、 有 效 ， 并 尽 可 能 使 各 实 验 室 间 检 验 结 果l 可 比 性 ， 这 是 免 疫 检 验 质 量 保 证 的 基 本 目 的 。ELISA实 验 室 内 质 控 的 重 点 是 对 低 值 弱 阳 性 标本 检 测 的 精 密 性 进 行 检 测 。 临 床 免 疫 学 检 验 主要 采 用 血 清 标 本 ， 检 验 项 目 既 有 传 染 性 病 原 体的 抗 原 及 抗 体 ， 还 有 肿 瘤 标 志 物 、 激 素 、 特 种蛋 白 、 细 胞 因 子 、 治 疗 药 物 等 ； 既

57、有 定 量 检 测 ，又 有 定 性 检 测 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫87 一 、 分 析 前 质 量 保 证 l 主 要 是 患 者 准 备 、 标 本 的 正 确 采 集 、 输 送及 保 存 。 防 止 溶 血 、 乳 糜 血 、 血 液 污 染 ， 治 疗药 物 及 激 素 测 定 还 应 注 意 采 集 标 本 的 时 间 ， 甚至 患 者 体 位 都 能 影 响 检 测 结 果 。 溶 血 标 本 会 增加 非 特 异 性 显 色 造 成 假 阳 性 。 仪 器 保 持 最 佳 工 作 状 态 。 所 要 控 制 的 仪器 包 括 移 液 器 （ 加 样 枪 ）

58、， 水 浴 箱 （ 温 箱 ） ，洗 板 机 和 酶 标 仪 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫88 l 1.加 样 ： 加 标 本 应 用 微 量 移 液 器 ， 按 规 定 的量 加 至 微 孔 板 孔 底 的 1/3 处 ， 避 免 加 在 孔 壁上 部 ， 并 注 意 不 可 溅 出 ， 不 可 产 生 气 泡 。 加每 份 标 本 应 更 换 吸 嘴 ， 干 吸 头 预 先 在 样 本 中抽 吸 三 次 。 滴 瓶 滴 加 试 剂 时 ， 应 先 将 滴 瓶 摇匀 并 挤 去 第 1 滴 有 气 泡 的 试 剂 ， 注 意 垂 直 加样 ， 并 力 求 量 的 一 致 。一

59、、 分 析 中 质 量 保 证 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫89 2.温 育应 严 格 按 照 试 剂 盒 要 求 选 择 温 育 次 数 和间 ， 力 求 准 确 、 一 致 。温 育 采 用 能 使 反 应 液 迅 速 达 到 平 衡 的 水 浴法 。 为 减 少 边 缘 效 应 ， 水 要 浸 至 板 条 的 1/3处 ， 不 可 将 板 条 叠 加 放 置 。 可 加 封 膜 条 以防 止 蒸 发 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫90 3.洗 涤l 甩 去 孔 内 反 应 液 。l 用 洗 涤 液 过 洗 一 遍 （ 即 注 满 孔 后 即 刻 甩 去 ） 。l 将

60、 微 孔 重 新 注 满 洗 液 后 浸 泡 1-2 分 钟 ， 间 歇 摇 动 。l 甩 去 孔 内 液 体 ， 拍 板 ， 用 纸 彻 底 吸 干 。l 重 复 以 上 操 作 至 少 5 次 ， 注 意 各 种 试 剂 盒 的 洗 涤 液尽 量 不 要 混 用 。l 洗 板 机 洗 涤 时 一 定 按 要 求 设 置 洗 涤 参 数 ， 务 必 要 板架 放 平 ， 填 充 孔 不 能 高 于 标 本 孔 ， 标 本 孔 不 能 有 凝块 ， 以 免 堵 孔 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫91 4.显 色 及 判 读 结 果l 注 意 加 显 色 液 次 序 和 显 色 时

61、间 。l 比 色 前 务 必 擦 干 板 底 。l 注 意 灰 区 值 的 判 定 及 处 理 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫92 一 、 分 析 后 质 量 保 证 钩 状 效 应 现 象 若 样 本 中 抗 原 浓 度 过 高 ， 会 出 现高 浓 度 后 带 现 象 ， 此 时 免 疫 反 应 被 明 显 抑 制 ， 测 定结 果 偏 低 。 要 消 除 此 干 扰 ， 只 有 对 样 本 进 行 适 当 稀释 后 重 新 测 定 。 对 双 抗 体 夹 心 法 则 抗 原 时 出 现 的 假阴 性 标 本 需 稀 释 （ 1： 250、 1： 500、 1： 1000） 后

62、重 测 。 l 灰 区 值 需 重 复 实 验 或 换 试 剂 重 测 以 确 定 其 阴 阳 性 ，如 仍 落 在 灰 区 范 围 内 则 报 告 阳 性 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫93 一 步 法 ELISA抗 原 浓 度 与 显 色 变 化 的 反 映 曲 线 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫94 二 步 法 ELISA抗 原 浓 度 与 显 色 变 化 的 反 映 曲 线 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫95 对 某 些 罕 见 模 式 ， 必 须 进 行 复 查 。试 剂 盒 阴 性 、 阳 性 对 照 或 标 准 浓 度 系 列 ： 阴 性 对照 值 0.05， 阳 性 对 照 值 0.8 ， （ 阳 性 对 照值 阴 性 对 照 值 ） 0.8 ； 标 准 浓 度 落 在 2S范围 内 。 乡 镇 检 验 人 员 培 训 免 疫96