复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的体外实验汇编

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1、姚金锋，等.复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的体外实验CRTER .org中国组织工程研究第20卷第52期2016-12-16出版Chinese Journal of Tissue Engineering Research December 16, 2016Vol.20, No.527816P.O. Box 10002, Shenyang110180 www.CRTER.org研究原著复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的体外实验姚金锋1,韩金丽2,郭 昱1,崔东来1 （1河北医科大学第二医院消化内科，河北省石家庄市050000 ; 2保定第七医院内镜室，河北省保定市072150）引用本文：姚金锋，韩金丽，郭

2、昱，崔东来.复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的体外实验J.中国组织工程研究，2016, 20（52）: 7815-7820.DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.52.009ORCID: 0000-0003-0126-3593（姚金锋）复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的溶解性和细胞相容性姚金锋，男，1965年生， 河北省海兴县人，汉族， 博士，主任医师，主要从 事胰腺炎，肠粘膜屏障研 究。通讯作者：韩金丽，主治 医师，保定第七医院内镜 室，河北省保定市 072150中图分类号:R318文献标识码：B文章编号:2095-4344（2016）52-07815-06稿件接受：20

3、16-09-24文章快速阅读:文题释义：左旋乳酸：存在于酸乳和西红柿液中，无毒，具有很好的水溶性，乳酸和甘醇酸的作用相似，具有很 强的透皮作用，在皮肤中呈正常的碳酸化合物代谢。外用低浓度可以改善皮肤的新陈代谢，使角质形 成细胞分裂加快，使堆积的角质细胞脱落，还可以使角质形成细胞和真皮层的含水量增加，真皮层内 黏多糖、胶原纤维、弹力纤维数量增加，使真皮层厚度增加，浅层毛细血管扩张从而改善皮肤质地。 用于皮肤干燥症、老年皮肤瘙痒症等。热源实验：系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中 所含热源的限度是否符合规定。溶血实验：是对人体内的红细胞进行红细胞破裂溶解检

4、测。主要用于溶血性贫血的病因诊断。溶血是指红细胞破裂溶解现象， 很多理化因素都可以引起溶血。检查过程：取试管3支，各加新鲜配制的2%兔血生理盐水混悬液 2.0 mL ,第一管加生理盐水 2.0 mL作为对照管，第二管加供试品稀释液（甲液）2.0 mL ,第三管加供试品稀释液（乙液）2.0 mL ,摇匀，置37 C静置观察1 h。摘要背景：目前已研制出复合左旋聚乳酸可降解性胆肠支架。目的：研究复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的溶解性及生物相容性。方法：溶解性：将复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架置于人工胃酸中，12周内检测溶解率；热源性：将复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架浸提液经耳缘静脉注入兔体内，检测体温变化；溶

5、血性：将复合左 旋聚乳酸胆肠溶解支架浸提液、生理盐水及蒸储水分别加入兔抗凝血中，检测溶血率；细胞相容性： 分别以含体积分数10%胎牛血清的DMEM高汤培养基、橡胶材料浸提液、复合左旋聚乳酸胆肠溶解支 架浸提液培养结肠癌 Caco-2细胞，12, 24, 36, 48 h后，检测细胞增殖；2 d后，检测细胞乳酸脱 氢酶释放量。结果与结论：复合左旋聚乳酸胆肠支架的体内稳定性时间长，在20周左右可以溶解近80%以上；复合左旋聚乳酸胆肠支架不具有热源性及溶血性；复合左旋聚乳酸胆肠支架对Caco-2细胞的增殖及乳酸脱氢酶释放无影响，无明显细胞毒性；结果表明，复合左旋聚乳酸材料具有良好的溶解性及细胞相容性

6、。 关键词：生物材料；材料相容性；左旋聚乳酸；聚乳酸乙醇酸；溶解率；热源实验；溶血实验；CCK-8 ; Caco-2 细胞；乳酸脱氢酶Yao Jin-feng, M.D., Chief physician, Department of Gastroenterology, the Second Affiliated Hospital of Hebei MedicalUniversity, Shijiazhuang050000, Hebei Province,ChinaCorresponding author: Han Jin-li, Attending physician, Department

7、 of Endoscope, Boding Seven Hospital, Baoding 072150, Hebei Province, China主题词：生物相容性材料；乳酸脱氢酶类；组织工程基金资助：2012年度医学科学研究重点课题(201200817)In vitro study on a degradable poly-L-lactic acid biliary-enteric composite stentYao Jin-feng 1, Han Jin-li 2, Guo Yu 1, Cui Dong-lai 1 (1Department of Gastroenterology,

8、the Second Affiliated Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000, Hebei Province, China;2Department ofEndoscope, Boding Seven Hospital, Baoding 072150, Hebei Province, China)AbstractBACKGROUND: The degradable poly-L-lactic acid (PLLA) biliary-enteric composite stent has been developed

9、.OBJECTIVE: To analyze the solubility and biocompatibility of the degradable PLLA biliary-enteric composite stent.METHODS: Solubility: the PLLA composite stent was implanted into artificial gastric acid to detect the dissolution rate within 12 weeks. Pyrogen test: the PLLA composite stent extracts w

10、ere injected into the rabbits via ear vein to detect the changes of body temperature. Hemolysis test: the PLLA composite stent extracts, normal saline and distilled water were added into the rabbit anticoagulant, respectively, to detect the hemolysis ratio. Cytocompatibility test: Caco-2 cells were

11、respectively cultured in the DMEM medium containing 10% fetal bovine serum, rubber material extracts and the PLLA composite stent extracts, and the cell proliferation was detected at 12, 24, 36 and 48 hours; the lactic dehydrogenase release was detected at 2 days.RESULTS AND CONCLUSION:The PLLA comp

12、osite stent showed a long stability in vivo , andapproximately 80% was dissolved at about 20 weeks. No reactions of pyrogen and henolysis were observed in the pyrogen and hemolysis tests. The PLLA composite stent made no effects on the Caco-2 cell proliferation and lactic dehydrogenase release. In c

13、onclusion, the PLLA composite material holds a good solubility and cytocompatibility.Subject headings:Biocompatible Materials; Lactate Dehydrogenases; Tissue EngineeringFunding: the Key Medical Science Research Project in 2012, No. 201200817Cite this article: Yao JF, Han JL, Guo Y, Cui DL. In vitro

14、study on a degradable poly-L-lactic acid biliary-enteric composite stent. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2016;20(52):7815-7820.0 引言 Introduction胆肠吻合是治疗肝胆类疾病临床常用手术方法之 一，而术后吻合口阻塞的发病率也一直困扰着临床医务 人员1-4 O消化道缝合历经了多年的变更，已发展至今日较为先进的吻合器缝合，但术后的消化道狭隘与阻塞仍 较为常见。使用合适的支架对消化道进行支撑处理，同 时不影响肠道推进物的运行是一种可行的方案5-6 O可降解支架

15、的出现，显著降低了胆肠狭隘阻塞的发病，目前 在研究复合材料性能之前，其生物相容性越来越受到人 们的重视，主要包括组织相容性和血液相容性，体内和 体外实验是其评价的主要指标。左旋聚乳酸材料是经过 认可的临床常用医用材料之一，该支架具备一定的力学 性能和孔隙直径，有较好的生物相容性，无炎症反应、 毒性反应、溶血反应、排斥反应，其可塑性及力学特性 均符合肠道溶解支架的要求。实验对该类型支架的生物 学及溶解性进行探究，以便更好地适用于临床7-9 OCaco-2细胞是人体结肠癌细胞，是目前多种肠道实验最常使用的细胞系之一。Caco-2虽然是癌细胞系， 但多种研究表明该类细胞的生理及各种表达特性均与小 肠

16、上皮细胞类似10-12 o目前，Caco-2细胞现已被广泛应 用于各个领域，包括肠道吸收、代谢和毒性等的研究，鉴于其与机体胃肠道细胞高度相似的特性，Caco-2细胞建立的小肠转运机制模型是目前研究药物转运最经典、 认可度最高的模型。实验为探究复合左旋聚乳酸胆肠溶 解支架对胃肠道细胞生物学特性的影响，选用Caco-2细胞作为目的细胞。1 材料和方法Materials and methods1.1 设计 观察性实验。1.2 时间及地点 实验于2013年4月至2014年7月在 河北医科大学第二医院实验室完成。1.3 材料左旋聚乳酸、聚乳酸乙醇酸由济南代罡生姚金锋，等.复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的体外

17、实验WWW. CRTER .org物科技有限公司制作。根据临床所需胆肠道支架溶解时间确定制作比例，最终将左旋聚乳酸与聚乳酸乙醇酸按质量95 : 5进行混合，支架混合完成后再以质量比1 ： 5的比例混合加入钛，制备成复合左旋聚乳酸材料。实验动物：6月龄雄性新西兰兔，体质量约 2 kg, 由广东省实验动物中心提供，许可证号为：SCXK（粤） 2008-0002。主要试剂及设备：Caco-2细胞（上海博研生物科技 有限公司）；DMEM高糖培养基、胎牛血清（Gbico） ; PBS 粉末（广州赛业生物技术有限公司）；青霉素、链霉素（Sigma）;乳酸脱氢酶测试试剂盒（武汉华美）；CCK-8（日本同仁）

18、；漩涡混合仪（上海沪西分析仪器厂 ”超纯水机、 pH计（MILIPORE）；精密电子天平 （Mettler）；细胞培养 耗材（Corning）；恒温干燥箱（上海一恒）；水浴恒温振荡 器（上海跃进）；各类型移液枪（Eppendorf）；低速离心机 （赛洛捷克）；二氧化碳培养箱（ESCO）;生物安全柜（Thermo Scientific） 。1.4 实验方法1.4.1 复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的溶解性人工胃酸的制备：人工胃酸的制备参照中国药典 的标准。详细来说，先将 6.8 g KH2PO3溶于500 mL超 纯水中，后使用 NaOH溶液调整pH值至6.8,备用。称 取10 g胰酶加入约300

19、mL超纯水溶解后，加入到上述液 体中。容量瓶定容至 1 L即可。复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的溶解时间：将复合 左旋聚乳酸胆肠溶解支架切割成约2 cm x 2 cm大小的薄片，共10个，分析天平精密称质量后，分别放入10个洁净的试管中，每个加入人工胃酸约20 mL 0每隔3 d更换新的胃酸溶液，以保证实验的准确性。分别于实验开始 的第2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20周取出材 料薄片，使用超纯水稍微冲洗后滤纸擦干，37 C烘箱内烘干3 h ,分析天平精密称量，记录数据。随后将薄 片重新放入人工胃酸中等待下一时间点。溶解速率=（薄片初始质量-薄片剩余质量）/薄片初

20、始质量 M00% o 1.4.2 复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架对机体的作用热源性实验：热源实验的进行参考中国药典的标准 进行。取3只新西兰兔，于实验前1 h固定于兔固定器中， 使用电子温度计测定其肛门温度，每隔15 min 1次，共4次，取其平均值作为兔的初始体温。称取 2g复合左旋 聚乳酸胆肠溶解支架粉末，紫外照射灭菌1 h后，在生理盐水中37 C浸泡孵育30 min ,即得浸提液。耳缘静 脉注射材料浸提液（10 mL/kg）,于注射后开始计时，每隔1 h测定肛温，共记录3次。以最高一次温度减去初始 温度作为温度变化量，该值应0.6 C。3次记录的肛温值减去初始值后，相加的总和应1.3 Co所

21、有耐高温的实验器材在180 C烘箱中处理3 h,以保证所有外 界热源被破坏。溶血实验：使用1%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉 新西兰兔，平放于桌面上，使新西兰兔仰卧。枸檬酸钠 润?S 10 mL注射器，以保证取血过程中血液不会凝固。以手指在胸骨正中心找到心脏跳动的位置，10 mL注射器穿刺入胸腔内后， 放松手部，缓慢移动注射器针尖处， 寻找心脏跳动部位插入针头，心脏无菌取血。取血完成 后，拔掉针头缓慢排除血液加入枸檬酸按晃动均匀，制 备成无菌抗凝兔血，用于凝血实验。实验以无菌生理盐水作为阴性对照，蒸播水作为阳性对照，每组设定 6个重复样品。实验过程中保持复合 左旋聚乳酸胆肠溶解支架浸提液温度稳定在

22、37 C,以保证实验的准确性。在生理盐水、蒸储水及复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架浸提液中分别加入新鲜兔血2.5 mL ,制备成2%血溶液，37 C水浴孵育24 ho第2天，离心 取上清，分光光度计于 540 nm处测定A值。溶血率实验组A值阴性对照组A值 二阳性对照组A值羽性对照组A值100%1.4.3 复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架对的细胞相容性支架对Caco-2细胞增殖的影响：从液氮中取出冻存 的Caco-2细胞，于37 C水浴中迅速摇动解冻， 1 000 r/min低速离心3 min后，乙醇喷涂瓶身。弃去保 存液，加入新鲜配置的含体积分数10%胎牛血清的DMEM高糖培养基1 mL ,重悬细胞，加

23、入培养瓶内，补 充新鲜的培养液至铺满瓶底。二氧化碳培养箱中培养24-36 h,直至大部分覆盖瓶底，期间每隔24 h更换培养70L1次。带生长至大部分铺满瓶底时，使用细胞刮铲 刮下细胞，重悬计数为1X10 8 L-1,传代于新的培养瓶中， 补足新鲜培养液。实验先制作以CCK-8为X轴、细胞个数为丫轴的标准 曲线，以对细胞增殖数目进行更好的探究。重悬并使用 锥虫蓝计数细胞， 于96孔板内，梯度稀释制备细胞悬液 后，加入10心1 体积CCK-8 ,孵育4 h后，酶标仪检测在 450 nm处的吸收波长。以吸光度为横坐标，细胞数目为纵坐标制作曲线，计算相关系数。增殖实验分3组，分别为空白对照组、阳性对照

24、组及实验组。使用细胞刮铲刮下培养传代至第2代的Caco-2细胞，重悬调整细胞浓度至3X107 L-1于96孔板内，每个组6个复孔。空白组加入正常的含体积分数10%胎牛血清的DMEM高汤培养基，阳性对照组及复合材料 组分别加入在橡胶浸提液、复合左旋聚乳酸胆肠溶解支 架浸提液，37 C孵育30 min后。加入含体积分数 10% 胎牛血清的高糖DMEM细胞培养液。培养12, 24, 36, 48 h,加入10 L CCK-8孵育4 h后，酶标仪检测在 450 nm处的吸收波长。支架对Caco-2细胞乳酸脱氢酶释放的影响：按上述 分组培养2 d后，吸取细胞上清液检测细胞经复合左旋 聚乳酸胆肠溶解支架材

25、料处理后乳酸脱氢酶的释放量， 期间更换相对应的培养液1次。1.5 主要观察指标复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的溶解性及生物相容性。1.6 统计学分析实验数据采用 SPSS17.0统计软件进行统计学分析，计量资料以x为表示。3者或3者以上检测采用单因素的方差分析，方差齐的使用LSD法对数据进行分析，方差不齐的使用Dunnett s方法进行分析，两组组间比较采用t检验，以P 0.05为差异有显著性 意义。2 结果 Results2.4 复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的溶解性动态溶解率与时间关系的结果表明，复合左旋聚乳酸胆肠支架的体内稳定性时间长，在20周左右可溶解近80%以上，其中在第10-12周期间内，

26、复合左旋聚乳酸材料溶解时 间最快，溶解增加幅度达到 36.7% ,具体结果见表1。表1复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的溶解率(n=6)Table 1 Solubility of the degradable poly-L-lactic acid biliary-enteric composite stent时间质量(xs, g)溶解率()0周0.440 9 .007 802周0.426 3 .010 43.34周0.410 6 .008 76.96周0.398 6 .004 89.68周0.390 0 .008 411.510周0.368 5 .004 916.412周0.206 5 .004 5

27、53.114周0.172 4 .006 560.916周0.125 4 .012 671.618周0.107 3 .002 975.720周0.067 3 .002 984.71.2 复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架对机体的作用支架的热源性：由表2可得，3只新西兰兔肛温最高 增加值为0.4 C (小于0.6 C ),而累积增加值最高为0.7 C (小于1.3 C)。因此结果可以判断，复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架所使用的材料为不具热源性的材料。表2复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的热源实验结果(n=3, C)Table 2 Pyrogen test results of the degradable poly

28、-L-lactic acid biliary-enteric composite stent兔编号初始1 h2 h3 h最高增加值累积增加值137.037.337.337.10.30.7237.037.137.437.20.40.7337.137.437.137.00.30.5表注：3只新西兰兔肛温最高增加值为 0.4 C (小于0.6 C),而累积 增加值最高为0.7 C(小于1.3 C)。因此结果可以判断，复合左旋聚 乳酸胆肠溶解支架所使用的材料为不具热源性的材料。支架的溶血性：实验组吸光度为 0.048 4 0.002 3 , 阳性对照组吸光度为 0.917 3 0.064 7 ,阴性对

29、照组吸光 度为0.018 3+0.003 2。按照公式计算可得溶血率为 4.0% ,符合溶血率5%的要求，即复合左旋聚乳酸胆肠 溶解支架材料无溶血性。1.3 复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的细胞相容性支架对Caco-2细胞增殖的影响：由实验结果可得， CCK-8吸光度值与细胞数目间为线性关系，相关系数为 0.998 2 ,证实CCK-8溶液适合用于 Caco-2细胞的计数， 可用于评价复合材料对于细胞增殖的影响。由表3可得，在12-48 h内，阳性对照组细胞增殖均呈现显著性下降 趋势，实验组细胞生长与空白对照组相比无差异，细胞 生长良好，未见显著改变。表3复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架材料对细胞增殖的

30、影响(xs, n=6 , M03)Table 3 Influence of the degradable poly-L-lactic acid biliary-enteric composite stent on the cell proliferation时间空白对照组阳性对照组实验组12 h6.7 d0.53.3 m6a6.4 .824 h8.8 d0.35.7 *1a9.2 .336 h24.6 2510.8 27a22.9 母848 h28.3 母613.8 母4a27.9 切.1表注：与空白对照组相比，aP 0.05支架对Caco-2细胞乳酸脱氢酶释放的影响：阴性对 照组乳酸脱氢酶释

31、放量为(59.23 7.34) U/L ,阳性对照组乳酸脱氢酶释放量为(162.28 17.65) U/L ,实验组乳酸脱氢酶释放量为(66.84 12.84) U/L。通过单因素方差 分析表明，阳性对照组乳酸脱氢酶释放量较阴性对照组 显著性增加(P 0.05),表明橡胶材料对细胞有毒性作 用；实验组乳酸脱氢酶释放量与阴性对照组相比无显著 差异，结果表明复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架材料对细胞无明显毒性作用。3 讨论 Discussion中国早在汉朝就有了关于胃肠道手术的记载，而在建国以后，特别是随着经济快速发展，消化道病变的发病率显著提高13-14 O其中对于治疗下腹部疾病胆肠手术尤为常 用，而

32、术后胆肠连接狭窄是最常见的并发症之一，该类并发症的出现显著影响了治疗效果15-17 O可降解性胆肠支架的出现受到了临床医生的广泛关注，而制备这一类医用材 料的主要物质为左旋聚乳酸18-20 O实验采用左旋聚乳酸为 主要材料，探究了这一类材料的生物相容性、溶解性及机体适应性，为临床应用提供基础参考。可降解生物材料与很多可降解材料的定位有所不同，这一类生物材料需要在自然条件下，即光、热、湿、氧化等条件下保持长期的稳定21-22,而在经过胃液中酸作用或蛋白酶等酶类作用下能够在一定时间后降解，在降解之前利用自身稳定的形态或力学特性等起到支持 保护的作用23-24 O研究首先对复合材料的溶解性进行了 研

33、究，发现此类复合左旋聚乳酸材料在胃液中可以保持 12周稳定的时间，满足临床对于手术后支撑材料的要 求，在12周后材料的降解逐渐增强，从而逐步消融。 但人工胃液不等同于真实的胃液情况，研究将进一步进 行该类材料的体内动物手术研究，以更加明确推断材料 在人体中的相关性质。其次，研究对复合聚乳酸胆肠溶 解支架材料的溶血性和热源性进行了研究25-28 O新西兰兔为实验动物中对热源敏感性最高的动物29,实验同时对3只新西兰兔进行了材料热源实验，结果证明材料浸出液对新西兰兔肛温的变化无明显影响，实验在 3h内 均稳定。新西兰兔经材料浸出液注射后未见任何不良反 应，在实验的3 h内保持运动，未见异常。溶血性

34、结果 表明，在复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架材料浸出液处理 后，未见吸光度值出现明显上升。该部分实验证实，复 合左旋聚乳酸材料降解时间合适且不具有热源性，不会 产生溶血效应。研究第二部分分析了复合左旋聚乳酸胆肠溶解支 架材料的生物相容性。材料作为胆肠道使用的生物医 用材料，因此实验使用胃肠道经典的Caco-2细胞结肠癌细胞进行实验。Caco-2细胞是国际公认的性质稳 定的细胞系，用于各类型胃肠道药物及抗肿瘤药物的 的筛选30-32 o实验探究了复合左旋聚乳酸材料对该类型 细胞增殖和乳酸脱氢酶释放的作用，并选用橡胶材料作 为对照组。实验结果表明，复合材料对Caco-2细胞的 增殖无影响，与正常生长的

35、细胞在形态和增殖上均无明显差异，而阳性对照组对Caco-2细胞有明显的毒性作用。而为了进一步验证，复合材料的生物相容性，实验继续进行了浸提液对细胞乳酸脱氢酶释放量的影响。乳酸脱氢酶是催化丙酮酸生成乳酸的酶，几乎存在于 所有的组织细胞中，临床常用于诊断心肌炎等疾病的 发生33-34 o而对于细胞而言，乳酸脱氢酶的释放增加是细胞受到外界刺激出现应激反应的重要标志35-36 o实验结果表明，复合左旋聚乳酸材料对细胞的乳酸脱氢酶释 放没有影响，即该材料对细胞的生长、生存无明显抑制 作用。实验从复合左旋聚乳酸材料的溶解性、对机体的作用及对细胞的影响 3个方面探究了其生物学特性，完善了其基础研究的内容，为

36、临床该类型材料的使用提供了 基础指导。作者贡献：姚金锋进行实验设计，实验实施为姚金锋， 实验评估为崔东来，资料收集为韩金丽、郭昱，姚金锋成 文，崔东来审校。利益冲突：所有作者共同认可文章无相关利益冲突。伦理问题：实验方案经河北医科大学动物实验伦理委 员会批准。实验动物在麻醉下进行所有的手术，并尽一切 努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。文章查重：文章出版前已经过 CNKI反剽窃文献检测 系统进行3次查重。文章外审：文章经国内小同行外审专家审核，符合本 干I发稿宗旨。作者声明：第一作者对于研究和撰写的论文中出现的 不端行为承担责任。论文中涉及的原始图片、数据 (包括计 算机数据库)记录及样本已

37、按照有关规定保存、分享和销 毁，可接受核查。文章版权：文章出版前杂志已与全体作者授权人签署 了版权相关协议。4 参考文献References1霍凌波，杨滔，申路平，等.胆肠吻合术的标准化治疗J.军 医进修学院学报，2012,33(1):98-100.2林美举，杨玉龙，张洪威，等.胆肠吻合术后肝内胆管复发 结石的微创治疗J.肝胆胰外科杂志，2012,24(3): 201-203.3温锋，卢再鸣，张军，等.胆肠吻合术后再发梗阻性黄疸的介 入治疗J.中国医学影像学杂志，2012,20(6):462-464.4 王禄远.胆肠吻合术围手术期护理体会J.中外医学研究，2012,10(36):87-88.I

38、SSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH7819姚金锋，等.复合左旋聚乳酸胆肠溶解支架的体外实验CRTER .org5 Bouletreau P ,Jurdic P ,Mazzorana M,et al.Evaluation of tissue response to resorbable osteosynthesis materials in maxillofacial surgery. Prospective randomized clinical trial of therapeutic strategy. Rev Stomatol Chir Ma

39、xillofac.2005;106(5):316-320.6 Radin S,El-Bassyouni G,Vresilovic EJ,et al.In vivo tissue response to resorbable silica xerogels as controlled-release materials.Biomaterials. 2005; 26(9):1043-1052.7张凯.胆道内可降解支架的体内及体外的实验性研究D.吉林大学,2004.8申震.胆总管探查术后内置可降解支架并行激光焊接胆 总管的实验研究D.吉林大学，2004.9郭俊，沈下贤，张必利，等.可降解支架现状及研

40、究进展J. 介入放射学杂志，2016,25(2):178-180.10冷薇，郑颖，李绍平，等.莪术油在Caco-2细胞模型中的吸 收机制研究J.中国药学杂志,2007,42(16):1228-1232.11李晓敏，刘红宾，闰于明，等.黑酵母1,3/1,6-葡聚糖对感 染肠炎沙门氏菌Caco-2细胞促炎症和抗炎症细胞因子 基因mRNA表达水平的影响J.动物营养学报，2013, 25(10):2355-2362.12高晨.纳米氧化铜在Caco-2细胞模型及鸡肠道中吸收转 运机制的研究D.吉林大学,2014.13潘建国，路继荣，刘书刚.口服凝血酶治疗上消化道出血60例分析J.潍坊医学院学报,1998

41、,2(2):17.14步雪峰，陈建国，费霞.胃癌相关抗原对消化道肿瘤的诊断 价值J.镇江医学院学报,1996,6(1):38.15陶苏红.超细胆道镜治疗高位胆道狭窄的护理体会J.护士进修杂志，2011,26(8):722-723.16王志强，令狐恩强，蔡逢春，等.肝移植术后胆道狭窄及胆漏 的微创治疗J.中国医刊，2006,41(5):30-32.17李天晓，马南濯水亭，等.良性胆道狭窄的介入治疗J.中 国介入影像与治疗学，2007,4(2):123-125.18王冠勋.左旋聚乳酸/明胶纳米纤维支架的细胞相容性研 究D.吉林大学,2015.19何勇，高兆芬，辛燕，等.左旋聚乳酸的结晶行为研究J.

42、高 等学校化学学报，2006,27(4):745-748.20申晓青，李少萍.左旋聚乳酸-甲壳素共混材料体外降解的 形态学观察J.广东牙病防治，2007,15(8):345-347.21刘达，雷伟，吴子祥，等.生物材料强化椎弓根螺钉稳定性研 究进展J.国际骨科学杂志，2009,30(3):148-151.22夏维娟，张智华，底新林.提高聚氨酯生物稳定性和相容性 的研究进展J.高分子通报，2011,24(4):164-171.23 Rosario-Melendez R,Yu W,Uhrich KE.Biodegradable polyesters containing ibuprofen and

43、 naproxen as pendant groups.Biomacromolecules. 2013;14(10): 3542-3548.24 Diaz A,Katsarava R,Puiggali J.Synthesis, properties and applications of biodegradable polymers derived from diols and dicarboxylic acids: from polyesters to poly(ester amide)s.Int J Mol Sci. 2014;15(5):7064- 7123.25汪穗福，张坤.2001年

44、我国中药注射剂细菌内毒素检查的 研究C.全国第5届天然药物资源学术研讨会，中国宁夏 银川,2002.26夏振民.浅谈药品注射剂之热原J.中国药房，1992,24(4): 38.27佃少娜，伍善广，李桃，等.肺靶向红霉素明胶微球的安全性 评价J.中国药房,2008,19(4):261-263.28邢东炜，唐岚，张闽光，等.天冬胶的溶血实验J.时珍国医 国药,2005,16(11):1067-1068.29悻时锋.新西兰白兔体温变化规律及其在热源试验中的 应用J.中国养兔杂志,1997,16(4):30-33.30何万领，李晓丽，杨肖娥.两个Caco-2细胞系模型铁生物有 效性评价效果研究J.河南

45、师范大学学报(自然科学版), 2010,38(3):119-122.31徐鹏辉，陈小章，高杰英.人结肠癌上皮细胞系Caco-2与肠 上皮间淋巴细胞共培养对上皮细胞屏障功能的影响C.中国免疫学会第四届学术大会，中国河北石家庄,2002.32祝欣刚，杨青.人结肠腺癌细胞系Caco-2单细胞层短期培 养法及其评价J.复旦学报(医学版),2012,39(1):68-73.33张延清，戴海滨，王京华，等.连续动态观察乳酸脱氢酶对 MDS预后判定的意义J.中国实验血液学杂志，2011, 19(1): 85-89.34吴音，冷青，季征，等.乳酸脱氢酶、0_2微球蛋白在急性白 血病中的临床意义J.中国医疗前沿，2011,6(3):8-9.35洪庆涛，宋岳涛，唐一鹏，等.细胞培养液乳酸脱氢酶漏出率 的比色测定及其应用J.细胞生物学杂志，2004,26(1): 89-92.36李阳，孙世光，谢予朋，等.徐长卿提取物对损伤内皮细胞中 乳酸脱氢酶、肿瘤坏死因子及白细胞介素-8活性的影响J.中国医药导报,2013,10(28):10-12.7816P.O. Box 10002, Shenyang110180 www.CRTER.org