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1、单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,主讲人：马静,班级：食品,2,班,学号：,02,奶制品中防腐剂山梨酸和苯甲酸的测定,高效液相色谱法,主要内容,实验背景,食品防腐剂可以抑制食品中的微生物的繁殖或杀灭食品中的微生物，苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钠盐是常用的食品防腐剂。但如果添加过量，会破坏食品中的营养成分，不仅能破坏维生素,B1,还能使钙形成不溶性物质,影响人体对钙的吸收,同时对人的胃肠有刺激作用,过量食用还可引发癌症。苯甲酸的毒性远远大于山梨酸,但因苯甲酸
2、在酸性条件下抑菌范围广,以及价格低廉,仍作为主要防腐剂加入到食品中。但是苯甲酸是不允许在乳制品中添加的。然而近年来中国奶制品大多被检出苯甲酸，虽然含量不高，但足以影响婴儿等特殊人群的健康。,性状与性能,山梨酸,苯甲酸,无色晶体粉末，相对分子质量为：,112.13,，熔点,132,135,，沸点,228,，耐光耐热性好，难溶于水，溶于乙醇，乙醚，花生油和丙酮。,白色晶体，相对分子质量为,144.11,，熔点,121.7,，沸点,249.2,，常温下难溶于水，溶于热水，乙醇，氯仿，乙醚，丙酮，二硫化碳等。,食品中测定防腐剂方法的比较,食品中测定防腐剂方法的选择,检测苯甲酸和山梨酸一般采用薄层色谱法
3、、气相色谱法和液相色谱法。薄层色谱法是一种定性半定量的测定方法，虽然灵敏度高但重现性差。气相色谱样品处理工作量大、试剂毒性强，且该方法由于填充柱的吸附及柱效能差别较大，使标准系列线性差，最低检出限较高。对于含量低或稀释倍数大的样品无法检测，而液相色谱法样品处理相对简单。另外，高效液相色谱因采用高压输液泵和小颗粒的填料，与经典的液相色谱相比具有很高的柱效和分离能力。故本实验采用高效液相色谱法测定防腐剂的含量。,高效液相法的测定过程,仪器及试剂,仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器）微量进样器（,100um,）,超声波发生器,;,溶剂过滤器,;,0.45,m,滤膜,;,容量瓶,;,恒温水浴锅,试剂：液
4、态奶饮料；奶粉；甲醇（色谱纯）；稀氨水（,1:1,）,氢氧化钠溶液（,0.1mol/L,）,;,亚铁氰化钾溶液（,0.2mol/L,）,醋酸锌溶液；磷酸盐缓冲溶液；标准贮备液：苯甲酸,(1mg/mL),山梨酸（,1mg/mL,）,;,混合标准工作液（苯甲酸,+,山梨酸）,0.2mg/mL,山梨酸、苯甲酸的提取,置于,加入,溶解,加入,加入,静置,液相色谱条件,柱子,:Eclipse XD13-C18,柱,(4.6mm150mm,，,5m);,流动相,:,磷酸盐缓冲溶液,-,甲醇,(V/V90:10);,等梯度洗脱,;,流速,0.3ml/min;,保留时间,15min;,柱温,35;,进样量,2
5、0 ul;,紫外检测波长,227nm,；,实验步骤,1.,混合标准液的配置,分别移取混合标准工作,0.00ml,1.00ml,2.00ml,3.00ml,4.00ml,5.00ml,5.00ml,于,6,个容量瓶（,10ml,），稀释定容。,2.,流动相处理,流动相用,0.45 um,水相滤膜进行减压过滤和超声脱气处理,3.,开机 出现平直基线 进样,4.,定性分析,分别进苯甲酸,山梨酸标准溶液,10uL,确定各个峰保留时间,5.,标准曲线测定,分别吸取,60uL,的苯甲酸和山梨酸混合标准液进样，建立定量分析表,6.,样品分析,取样品,60uL,进样，记录保留时间和峰面积,标准色谱图,液相色谱
6、仪使用注意事项,(1),使用高效液相色谱级的溶剂与试剂，溶剂和水必须进行过滤。,(2),必须对含有缓冲盐的流动相进行过滤（,0.45um,）。,(3),流动相使用前必须脱气。,(4),改变流动相时防止交叉污染。,(5),不要使用陈旧的流动相，定期清洗流动相储液瓶。,(6),定期清洗烧结不锈钢吸滤头。,(7),防止过高压力冲击色谱柱。,(8),每次使用后要冲洗干净进样阀中残留的样品和缓冲盐，防止无机盐沉积和样品微粒磨损阀转子。,(9),严禁使用气相色谱那样的尖头针进样。,(10),在注射针前加装针式过滤器，防止样品中的微粒进入进样阀,(11),色谱柱不用卸下前,:a.,必须洗去缓冲液；,b.,防止产生微生物；,c.,用大于,10%,的有机溶剂充满整个色谱柱；,d.,柱卸下后用柱堵头将色谱柱首尾密封。,参考文献,1.,祝伟霞,魏蔚,杨冀州,刘亚风,高效液相色谱法测定乳饮料和奶制品中苯甲酸和山梨酸,中国国境卫生检疫杂志,2005,年,10,月第,28,卷第,5,期,2.,周毅刚,龙苏,王晓春,等,.,高效液相法测定食品中苯甲酸和山梨酸含量,.,中国医师杂志,2001,13(3):184-188,3.,全国标准化委员会,.GB/T5009.29-2003,食品中山梨酸、苹甲酸测测定方法,.,北京,:,中国标准出版社,2003,The End,
液相色谱法测奶制品中的防腐剂含量
