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1、单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,*,,*,,动物病毒学试验技术,,杨润德,,,,通过病毒学的学习,我们了解到病毒没,,有完整的酶系统,体内无核糖体等细胞器,,,因此不能在任何无生命的培养液中生长。,,所以要想增殖病毒必须在有生命的组织细,,胞内接种让其增殖,如:动物、鸡胚、细,,胞、器官。,,,,实验一、鸡胚接种,,发育中的鸡胚是病毒生长良好的环境,,,被广泛用于病毒(特别是禽病毒)的分离,,培养和疫苗生产等。,,病毒在鸡胚中的生长可以通过几种方法,,加以测定,如:采集尿囊液、羊水、绒尿,,膜、鸡胚作定量检定;采集以上样品作血,,
2、凝滴定、血清学试验等;检査各部的病理,,学变化,如:鸡胚死亡、矮小、出血、羽,,毛发育不良、内脏坏死灶、绒尿膜水肿或,,增厚、坏死性痘斑、出血。,,,,除鸡胚外,根据病毒特点可以选用其他,,禽胚,如小鹅瘟病毒宜接种鹅胚,鸭瘟宜,,接种鸭胚等。,,影响病毒在鸡胚中生长的因素,包括鸡胚,,的日龄、接种途径、接种剂量、接种浓度,,培养时间、培养温度。培养温度一般为,,35.5-37℃,有些病毒所需的温度更低。但,,很多哺乳动物病毒不适合在鸡胚中生长。,,,,、受精卵的质量和孵化,,1选取SPF鸡群所产的蛋;,,2受精卵在10℃左右保存不超过10d,,3最好选择白色卵壳的受精卵;,,4.卵壳无污染,孵
3、化前在0.1%的新洁尔灭中,,浸泡约15mn,最后用冷水冲洗,放卵架,或,,将卵放卵架用甲醛(1m2用13m甲醛、,,6.5 gKMnO4熏蒸,而且在熏蒸时维持箱内温,,度为37℃20min后驱散甲醛蒸汽,,5孵化温度保持39-40℃,相对湿度60-65%,,,有风扇维持空气流通,每天翻蛋3-4次,,,,接种途径,,根据不同病毒的嗜性,选择适宜的接种,,途径。最常用的途径有卵黄囊、尿囊腔,,尿囊膜3种途径,偶尔接种于羊膜腔、静脉、,,胚体等。,,在分离一种未知病毒时,最好3种途经均,,用,如果没有足够的受精卵,首选绒尿膜,,接种途径,因为大多数病毒都能适应。,,接种材料的处理:将组织置研钵磨碎
4、,,加5-10倍盐水并加入双抗混均,2000,,3000r/min离心20-30min。取上清待用。,,,,()卵黄囊,,卵黄是胚胎的营养物质,卵黄囊膜是由,,内胚层发育而来的,内层覆有一层绒毛,,病毒可在绒毛细胞内生长,并且可以由此,,扩散到胚胎的其他部位,,,,,○尿囊腔接种,,尿囊是鸡胚的排泄器官。腔内充满排泄,,物尿囊液。液体的容量因卵的大小而异,,,一般6日龄鸡胚时约1m,11日龄时约6m,,,13日龄可高达10ml,以后逐渐减少直到消,,失。13日龄时的尿囊液是无色透明的,14,,日龄后逐渐变浑浊,呈乳白色,有时淡黄,,色。,,,,接种方法,,1.取9-10日龄鸡胚,照卵,画出气室,离,,气室边缘0.3-05cm用铅笔作一记号;,,2.在气室做记号处用碘酊消毒,打孔;,,3用注射器取毒液自接种孔斜刺入约1cm,,,注入毒液0.1-0.2ml;,,4.封孔继续孵化,定时照蛋。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,
动物病毒学实验技术课件
